Cobas4800高危型HPV分型在中山市宫颈癌筛查中的临床价值

王山云 曾建峰 广东省中山市中医院 528400

子宫颈癌是妇女常见的恶性肿瘤之一，严重危害妇女的生命健康。在世界范围内，子宫颈癌已成为女性第四大恶性肿瘤，全球每年新发子宫颈癌病例约52.8万，死亡26.6万。2015年我国子宫颈癌新发病例数达到9.89万，死亡例数达3.05万。国际上已经明确高危型人乳头瘤病毒持续感染(High-humanpapilloma virus，HR-HPV)是导致子宫颈癌及其癌前病变的主要病因。WHO/IARC已明确13种HP-HPV型别包括HPV16、18、31、33、35、39、45、52、56、58、59、66、68[1]。Cobas4800 HPV检测技术于2014年获得美国FDA委员会及亚太生殖感染和肿瘤研究组织(AOGIN)年会推荐用于宫颈癌的早期筛查，2015年获批进入中国。目前相关报道仍不多，为探讨Cobas4800高危型HPV检测在宫颈癌筛查的临床意义，了解中山市高危型HPV感染分布特点及其与宫颈病变的关系,现将结果分析如下。

1 资料和方法

1.1 临床资料 选择2018年1月1日—12月31日在中山市中医院行宫颈筛查的女性5 650例，年龄17～65岁，平均年龄(38±12)岁；按年龄段分为21～30岁、31～40岁、41～50岁及>50岁4个组。所有病例均进行液基细胞学检查和高危型HPV分型检测，剔除二次复查数据，并对细胞学诊断为AS-CUS及以上病变的妇女进行阴道镜下宫颈活检。本研究获得患者或家属的知情同意。所有妇女均有性生活史，自愿接受检查，无宫颈手术史及盆腔放射治疗史，排除妊娠期及月经期妇女。

1.2 方法 (1)Cobas4800 HR-HPV检测：采用罗氏Cobas4800 HPV检测技术，本方法可同时检测国际公认的14种高危型HPV，并区分出致癌风险最高的HPV16和HPV18型，其他12种高危型HPV包括26、31、33、35、39、45、52、56、58、59、66、68。严格依照试剂盒说明书步骤操作。(2)液基细胞学检查：标本采集妇科检查时用窥阴器暴露宫颈，擦净宫口分泌物，用LCT专用刷插入宫颈内口旋转5～8周，收集宫颈口及颈管脱落上皮细胞，并将采集刷头放入LCT 保存液小瓶内抖动数次，把脱落细胞完全洗入LCT保存液中。LCT检查采用美国TriPath Imaging 公司生产的AutoCyte Prep型自动制片染色机系列制片。(3)诊断标准：细胞学诊断采用2001 年的子宫颈细胞学分类系统(The Bethesdasystem，TBS)标准[2]。对细胞学诊断阳性者遵循宫颈癌综合防控指南(中华预防医学会妇女保健分会)HPV联合LCT筛查流程方案进行阴道镜检查及镜下活检。

2 结果

2.1 HR-HPV阳性标本型别分别及对应阳性率 在接受Cobas4800 HR-HPV分型检测的5 650例标本中，共检出732例HR-HPV阳性(包括单一分型及多重感染)，总阳性率12.96%(732/5 650)，其中以其他12种分型感染率最高，阳性率为9.15%。见表1。

2.2 宫颈病理结果与HR-HPV各型别感染对照 按照LCT联合HPV筛查流程，其中102例患者需行阴道镜下宫颈组织病理学检查，病理诊断≤宫颈低级别上皮内瘤变的患者61例，以其他12型感染为主[感染率为54.10%(33/61)]；病理诊断≥宫颈高级别上皮内瘤变的患者41例，其中以HPV16型感染为主[感染率为58.54%(24/41)]。见表2。

表1 HR-HPV阳性标本型别分别及对应阳性率

注：两型或两型以上者为多重感染。

表2 宫颈病理结果与HR-HPV各型别感染对照

注：*多重感染为12和18型，#多重感染为12和16型；Δ多重感染为16和18型。

2.3 不同年龄宫颈癌筛查妇女高危型HPV感染率比较 在研究的5 650例女性中，按年龄段分为4个组，31～40岁组的高危型HPV感染阳性率最高，感染率为38.80%(284/732)。见表3。

表3 不同年龄宫颈癌筛查妇女高危型HPV感染率比较[n(%)]

2.4 HPV阳性对应LCT不同级别比率比较 在HPV阳性患者对应的TCT结果分析，共635例正常或炎症， HPV16型感染导致的HSIL感染明显高于其他分组。见表4。

表4 HPV阳性对应LCT不同级别比率比较[n(%)]

3 讨论

HPV感染是女性宫颈癌以及癌前病变的主要病因，目前已发现100多种HPV基因型，其中至少有40多种基因型主要侵袭生殖道[3]。根据其导致的病变程度，可分为高危型、低危型以及其他型[4]，高危型HPV16、18型持续感染导致70%以上的宫颈癌[5]。宫颈癌的发生、发展是由量变到质变、渐变到突变的连续过程，宫颈癌前病变可存在多年，在此期间及时诊断、采取正确的处理措施可有效阻断癌变的发生，因此积极有效的筛查及预防手段显得尤为重要[6]。

本文采用Cobas4800 HPV检测技术对5 650位女性标本分析显示，高危型HPV感染者总人数732例，阳性率12.96%(732/5 650)，HPV分型中其他12种(26、31、33、35、39、45、52、56、58、59、66、68其中一种)感染率9.15%(517/5 650)最高，其次是HPV16型感染率2.25%(127/5 650)，多重HPV(两型或两型以上者为多型感染)感染率为1.06%(60/5 650)，HPV18型感染率为0.50%(28/5 650)。按照LCT联合HPV筛查流程，其中102例患者需阴道镜下宫颈组织病理学检查，病理诊断≤宫颈低级别上皮内瘤变的患者61例，以其他12型感染为主[感染率为54.10%(33/61)]；病理诊断≥宫颈高级别上皮内瘤变的患者41例，其中以HPV16型感染为主[感染率为58.54%(24/41)]。可见高危型HPV感染与宫颈病变的发生、发展密切相关，而中山地区高危型HPV感染的亚型主要为其他12种高危型，HPV16导致宫颈癌变率最高。与广东省河源市、浙江省丽水市、香港地区亚型等有差异[7-9]。另有研究发现，HPV 52型和HPV 58型引起的宫颈癌在亚洲地区所占比例明显高于非洲及西方国家[10]，从而进一步说明不同地域、不同民族间因为文化、生活习惯等差异导致了HPV感染谱的不同。

在各年龄组中，21～30岁、31～40岁、41～50岁和>50岁年龄组高危型HPV总感染率分别为11.91%、13.95%、12.71%、12.41%。以31～40岁组阳性率最高(38.80%)，这与刘国忠等报道天津地区HPV的年龄分布基本一致[11]。这可能与该年龄组处于性活跃期、多性伴侣、吸烟或长期使用口服避孕药等因素有关。另也可能缘于在临床上按照筛查指南对30岁以上进行检测者更多。此外本次研究在联合LCT检测对照中细胞学阳性(≥ASC-US)HR-HPV阳性率分别为16型25.20%(32/127)、多重感染组15%(9/60)、18型3.57%(1/28)、其他12型10.64%(55/517)。而且在患者宫颈病变CIN分级的增加HR-HPV检测阳性率显著升高，各分型阳性率分别为16型16.54%(21/127)、多重感染组13.33%(8/60)、18型3.57%(1/28)、其他12型5.22%(27/517)，提示HR-HPV对筛查CIN及早期宫颈癌具有很高的敏感度。

由于不同亚型HPV其编码外壳的基因变异很大，不同亚型HPV之间基本没有交叉保护性抗体，容易造成不同高危型HPV多重感染[12]。对宫颈病变与高危型HPV单型感染或多重感染间关系目前没有统一意见。本研究发现，单一感染率(16、18，或其他12型其中一型)为91.80%，多重感染率(同时存在两种或以上高危型感染)8.20%。在宫颈病变中，以单一感染中的16型感染为主，多重感染导致宫颈病变的阳性率高于单一感染中的18型感染，其原因可能是多重感染中以含16型感染比例更多或需增大样本量进一步论证。

目前关于HPV的检测方法有组织学检查、免疫组化、原位杂交、PCR及Cobas4800 HPV检测，其中Cobas4800 HPV检测是一种新型的方式，能够同时检测HPV16型、18型等多种高危型HPV病毒。Cobas4800 HPV是美国FDA至目前推荐的唯一一种用于宫颈癌初筛的检测方法，具有较高的灵敏度和阴性预测值，有助于宫颈癌早诊断、早治疗。本研究为采用Cobas4800临床检测的准确性提供了依据。但目前在国内相关研究不多，有待于在国内外不同地区并同其他高危型HPV检测方法进行比较，进一步证明其优势或不足之处。