幽门螺杆菌感染病人胃癌组织中MMP-7、VEGF的表达及相关性研究

任 志，马振增，王启之

胃癌是常见的消化道恶性肿瘤，胃癌的发生是一个多步骤、多因素进行发展的过程。癌症的高发因素中，基质金属蛋白酶-7(MMP-7)与血管内皮生长因子(VEGF)已引起广泛重视，国内外的相关文献中有多次报道，但在胃癌的诱发因素中，MMP-7及VEGF与幽门螺杆菌(Hp)的相互关系却鲜有研究;本实验选取60例胃癌病人，通过用荧光定量PCR法及免疫组织化学检测分别测定其中的MMP-7与VEGF的表达，统计分析其表达水平与各临床病理特征之间有无相关性，从而探求三者与胃癌之间的相互关系，以探求胃癌发生及转移检测的特异、敏感指标，以助于胃癌病人早期诊疗及预后评价。

1 资料与方法

1.1 一般资料 实验所用胃组织来源于2015年1月至2018年11月蚌埠医学院第一附属医院普外科手术室、肿瘤外科手术室，并由病理医生根据组织切片独立作出病理诊断。手术切除组织后，立即取组织置入RNAlater(Ambion,Austin,TX，USA)的EP管内，并放入-80 ℃冰箱中，隔日转入液氮中保存备用。均为经过影像学及病理学检查确诊的胃癌病人60例，其中男43例，女27例，年龄42～83岁。所有病人在术前均未接受化疗、放疗等其他针对肿瘤的特殊治疗以及针对Hp的治疗。

1.2 方法 60例胃癌病人术前经快速尿素酶实验及C呼气实验检测来判定Hp的感染状态，即快速尿素酶实验及C呼气实验检测均阳性入组Hp阳性组，快速尿素酶实验及C呼气实验检测均阴性入组Hp阴性组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法，对2组胃组织标本中MMP-7及VEGF的mRNA表达水平进行检测，结果依据2-△△Ct计算相对定量结果；应用免疫组织化学染色技术检测各组胃组织标本中MMP-7及VEGF的蛋白表达水平。

1.3 统计学方法 采用t(或t′)检验、Pearson相关性分析和Spearman秩相关分析。

2 结果

2.1 Hp阳性与Hp阴性组中MMP-7、VEGF mRNA表达结果比较 Hp阳性组MMP-7、VEGF mRNA表达均高于Hp阴性组(P<0.01)(见表1)。

分组nMMP-7VEGFHp阴性组301.000±0.0921.000±0.094Hp阳性组301.422±0.0881.465±0.093t—18.1619.26P—<0.01<0.01

2.2 浆膜侵犯、淋巴转移不同的胃癌病人MMP-7和VEGF mRNA表达结果比较 有浆膜层浸润、有淋巴结转移的胃癌病人MMP-7和VEGF mRNA表达量均高于无浆膜层浸润、无淋巴结转移的病人(P<0.01)(见表2)。

2.3 MMP-7与VEGF mRNA相关性 60例标本中MMP-7与VEGF mRNA表达值之间呈正相关(r=0.498，P<0.01)。

2.4 MMP-7与VEGF免疫组织化学结果 MMP-7、VEGF在癌旁正常胃黏膜组织中几乎不表达或弱表达，表达则呈浅黄色。均定位于细胞质，呈棕黄色(见图1～4)。MMP-7、VEGF蛋白在胃癌组织中的阳性率高于癌旁正常胃组织(61.6%vs 5.3% 56.6% vs 11.3%)，Spearman相关性分析结果显示，Hp与MMP-7及VEGF表达呈正相关，MMP-7和VEGF的表达呈正相关(P<0.05～P<0.01)(见表3～4)。

分组nMMP-7VEGF无浆膜层浸润191.000±0.1121.000±0.082有浆膜层浸润411.315±0.0831.422±0.098t—12.2116.29P—<0.01<0.01无淋巴结转移组191.000±0.1241.000±0.121有淋巴结转移组411.342±0.0801.391±0.087t—11.01∗14.26P—<0.01<0.01

*示t′值

表3 Hp与MMP-7、VEGF在胃癌中蛋白表达的相关性

表4 VEGF与MMP-7在胃癌中蛋白表达的相关性

3 讨论

胃癌是全球癌症相关死亡的主要原因之一，排在全部恶性肿瘤的第5位[1]。在中国，随着人口老龄化的加剧总发病数还将随而增加[2]。国际癌症机构(IARC)已于1994提出Hp是胃癌第Ⅰ类致癌原[3]，Hp感染与胃癌密切相关已得到全世界的认可[4-5]； SUGIMOTO等[6]研究认为MMPs于胃黏膜炎症反应和Hp相关疾病的发生有关，MMP-7与Hp之间有着相互促进的关系[7-9]。VEGF在新生血管和淋巴管的生成中发挥重要作用，因此许多学者认为VEGF与肿瘤细胞新生血管的生成亦密切相关；VEGF与MMP-7与肿瘤的发生、转移等关系在肺癌、结肠癌等肿瘤中已有报道，但在胃癌中鲜有报道[10]；胃癌高发因素中，MMP-7 与VEGF已引起广泛的重视[11-14]，但三者之间相互关系研究报道较少。

本研究结果显示，胃癌组织中的MMP-7 与VEGF均高表达，明显高于同标本来源的正常组织，说明上述因子可能参与了胃癌的发生、发展。其中Hp阳性组MMP-7及VEGF表达值与Hp阴性组比较，差异均有统计学意义，提示在胃癌的发生、发展过程中Hp与MMP-7及VEGF可能起到了相互协同的作用，从而促进了胃癌的进程发展。实验中发现，MMP-7与VEGF表达值两者之间呈正相关性，提示两者存在胃癌的发生、发展中可能也起到了相互协同的作用。免疫组织化学结果中MMP-7、VEGF蛋白在胃癌组织中的阳性率显著高于癌旁正常胃组织，亦可说明上述因子参与了胃癌的发生、发展。经Spearman等级相关分析亦显示， Hp与MMP-7和VEGF之间呈正相关性，推测Hp导致胃癌发生、发展可能与MMP-7、VEGF过表达相关。且MMP-7与VEGF表达具有高度一致性，MMP-7可水解包括Ⅳ型胶原蛋白、层黏连蛋白、纤维连接蛋白、酪蛋白等在内的多种组织蛋白，VEGF在新生血管和淋巴管的生成中发挥重要作用，结合两者表达的高度一致性提示两者在胃癌的转移、侵袭等过程中可能存在相互作用，共同促进了肿瘤的转移与浸润。本研究MMP-7和VEGF在淋巴结转移组及浆膜浸润组表达值较高，亦表明两指标与肿瘤转移可能相关。

综上，MMP-7、VEGF在胃癌组织中均有较高的表达，均与Hp感染密切相关，两者在肿瘤的发展过程中起着非常重要的作用，且两者具有相关性，同时检测可以从不同角度更好地监测肿瘤的发生、发展。