桂林地区婚前和产前人群血红蛋白电泳参考范围调查①

廖丽芬，曾 丹

(桂林医学院附属医院 a.检验科；b.优生遗传科，广西 桂林 541001)

地中海贫血又名海洋性贫血(简称“地贫”)，是我国最常见的血红蛋白病，由于合成血红蛋白的珠蛋白链异常所致。该病属常染色体溶血性贫血疾病，具有单基因隐性遗传特征。进行婚前和产前地贫筛查，预防基因缺陷和提前干预是其重要手段[1]。目前筛查较为理想的方法是进行血红蛋白电泳，能初步判断结果为正常或是携带者。由于地贫受出生环境、地域分布及种族等因素影响，不同地区人群存在差异，故有必要建立适宜当地的血红蛋白电泳参考区间。HbA2相对的含量检测在地中海贫血筛查中是重要指标，是受检者的表型特征之一[2]。当女性结果为阴性时，其出生的孩子一般不存在重型血红蛋白病的风险；当女方结果是阳性时，要求告知其配偶进行筛查[3-4]；若男方与女方为同型地贫，则要进行产前诊断。认真做好地贫筛查工作，防止重型患儿的出生，对家庭和社会都具有重要意义[5]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

从2017年9月至2019年9月到桂林医学院附属医院优生咨询及产前检查的人群中随机选择符合条件588例(血常规正常、血红蛋白电泳正常、地贫筛查正常、血清铁蛋白正常等)为调查组，其中女306例，男282例，年龄21～45岁。另随机选择体检、婚检、孕检320例作为验证组，其中女174例，男146例，年龄22～43岁。两组一般资料比较差异无统计学意义，有可比性。

1.2 仪器与试剂

法国Sebia Capillarys2 Flex型毛细管电泳仪及配套的质控品和检测试剂。每次按SOP文件开机，再室内质控，结果在控后进行标本检测。在控判断依据：Z1到Z15共15个区，各个区图像背景干净，HbA和HbA2条带清晰且未出现其他条带，HbA的尖峰在Z9区，HbA2的尖峰在Z3区，图像无峰偏移等。

1.3 方法

清晨抽取3管EDTA-K2抗凝的全血各2 ml，分别进行血红蛋白电泳、血常规以及基因检测；血红蛋白电泳在Capillarys2 flex全自动毛细管电泳仪检测；血常规在XN2800仪器检测；地贫基因采用亚能生物公司(深圳)全血DNA提取试剂盒，用gap-PCR方法和PCR-反向印记杂交法对基因缺失及点突变情况进行检测；血清铁蛋白用血清标本在罗氏E601进行电化学发光检测。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 调查组各年龄段HbA参考范围

对588例婚前和产前人群的HbA进行分析，年龄组间及同年龄组男女间的HbA值比较差异均无统计学意义(P>0.05)。详见表1。

表1 调查组各年龄段HbA参考范围

2.2 调查组各年龄段HbA2参考范围

各年龄组间HbA2值比较差异均无统计学意义(P>0.05)；而相同年龄组间男女性HbA2值比较差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

表2 调查组各年龄段HbA2参考范围

2.3 调查组HbA、HbA2参考范围

把无显著性差异的年龄段合并后分析，HbA男与女比较差异无统计学意义(P>0.05)，但男女组间HbA2差异有统计学意义(t=-3.717,P<0.01)，且男性高于女性。详见表3。

表3 调查组HbA、HbA2参考范围

与女性比较，*P>0.05；P<0.01

2.4 对结果进行验证

应用本次新建立的参考范围对验证组进行验证，3例HbA2结果在新范围内，但基因检测为异常，其中1例为αβ复合型地贫，另外2例为静止型α-地贫(αwSα/αα和-α3.7/αα)。 3例HbA2大于参考值上限，基因检测为β-地贫(β17M/βN)，9例HbA2小于参考值下限，基因检测为α-地贫(-SEA/αα或αcSα/αα)。符合317例，符合率达99.06%；不符合3例，类型主要为静止型α-地贫。

3 讨论

血红蛋白电泳能够定量检测HbA和HbA2等含量，通过对比正常参考范围可以初步判断结果是否正常，如果异常，可以初分为α-地贫或β-地贫，快速地筛查高危夫妇(同型地贫)。地贫是单基因隐性遗传，同型夫妇生育重型患儿的概率为每次每胎25%，中间型为50%，轻型为25%。所以，第一次初筛判断携带者，是婚前产前检查最有效的干预措施之一。

广西实施免费婚检后，为当地适宜人群减轻了部分经济负担，由于桂林地区经济条件相对落后，以及遗传知识的相对缺乏，以至于仍然有部分人群未进行筛查，加大了中、重型地贫患儿出生的风险，加重了家庭和社会的负担[6]。统计分析适宜当地婚前和产前的血红电泳参考范围，为是否需要进行产前诊断提供指导[7]。本调查显示，男性HbA2水平均高于女性组，原因可能为成年健康男性血红蛋白含量高于女性。HbA2若低于参考值下限，则α-地贫及缺铁性贫血可能性大；HbA2若高于参考值上限，主要考虑为β地贫的可能。由于HbA是机体血红蛋白比例最大的组成部分，若降低则考虑是否存在血红蛋白病或β地贫的可能。目前很多用此仪器的医院采用的参考范围[8]为：HbA：96.5%～97.5%；HbA2：2.5%～3.5%，HbF:0～2.0%，但李显航等[9]建立了当地具体研究对象的参考值范围，我室新建立的孕前及婚前人群的参考范围与之较有不同。对无显著性差异的各年龄组间HbA、HbA2分别进行合并后建立的孕前及婚前人群参考范围，通过验证组结果分析，新建立的参考范围可以作为桂林地区婚前和产前人群地贫筛查的参考指标。地贫不可根治，但可防可控，严把初筛防线，降低出生缺陷率，可提高健康人口出生率。