肾痿复方颗粒对慢性肾衰竭腹膜透析大鼠TGF-β1/Smad通路表达的影响

吴健，刘东，欧昌良，邹永根

（西南医科大学附属中医医院，四川 泸州）

0 引言

慢性肾功能衰竭（Chronic renal failure,CRF）是由于各种原因起的肾脏结构和功能损害的临床综合征，其一般由慢性肾脏病发展而来[1]。随着人口老年化及糖尿病等可能影响肾脏功能疾病发病率的升高，CRF的发病率也逐年上升，其治疗困难、病程漫长，严重影响患者的生活质量，加重了社会经济负担。目前西医最常用的治疗方式为透析治疗，能保护肾脏功能，缓解疾病发展。其中，腹膜透析使用较多，但临床发现腹膜透析病人腹膜纤维化发病较高，发病多与转化生长因子 -β1（TGF-β1）等关系密切[2-4]。肾痿复方颗粒作为中药制剂，能改善肾功能，较低肌酐、尿素水平，临床使用中发现，肾痿复方颗粒能改善腹膜透析病人腹膜纤维化进展[5-6]。因此，本实验，通过CRF 大鼠模型，从而观察肾痿复方颗粒对对慢性肾衰竭腹膜透析大鼠TGF-β1/Smad 通路表达的影响，为肾痿颗粒的临床应用提供实验室依据。

1 材料与方法

1.1实验动物

SPF 级 SD 大鼠 40 只，体质量 200g 左右。购买自西南医科大学实验动物中心。

1.2仪器与试剂

肾痿复方颗粒：西南医科大学附属中医院内制剂，专利号[201310123711.3]。4.25% 葡萄糖腹膜透析液：（上海长征富民金山制药有限公司，批准文号：国药准字H31020946）；腺嘌呤（江苏江莱生物科技有限责任公司）；兔抗大鼠TGF-β1 多克隆抗体、免疫组化专用湿盒（科华生物制品有限公司提供）；大鼠磷酸化Samd2/3 抗体（Abcam 公司生产），实验仪器由西南医科大学中心实验室提供。

1.3 模型构建

将 40 只 SD 大鼠饲养 10 天后，B 组、C 组 D 组喂养含腺嘌呤饲料2 月，建立慢性肾功能衰竭大鼠模型。检测血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）确定模型建立。对C组、D 组模型腹腔注射腹膜透析液，构建大鼠腹膜透析模型。腹透管冲洗通畅时鉴定造模成功。

1.4给药

C 组大鼠给予肾痿复方颗粒 4g/（kg·d）灌胃；D组大鼠给予肾痿复方颗粒8g/（kg·d）灌胃处理；A 组及B 组大鼠给予同等生理盐水灌胃处理。

1.5指标检测

4 组大鼠每2 周进行体重检测，并记录其活动次数。于第12 周检测大鼠体内血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN），同时处死大鼠后，对大鼠肾脏进行免疫组化检测，对 p-Samd2/3、TGF-β1 蛋白测定。

1.6 统计学方法

2 结果

2.1 各组大鼠体质量比较，4 组大鼠前4 周体质量均有提高，A 组 ＞D 组 ＞C 组 ＞B 组，随着时间推移，各组大鼠体质量增长差别较大，其中部分组大鼠个别死亡，但4～12 周，大鼠体质量变化趋势为：A 组＞D 组＞C 组 ＞B 组。

2.2各组大鼠活动次数变化及比较

前 4 组 B 组、C 组、D 组较 A 组活动次数均下降，可能是造模对大鼠损伤所致。4～12 周，B 组大鼠部分死亡，存活大鼠较其余3 组活动明显减少，大鼠活动次数变化趋势为：A 组 ＞D 组 ＞C 组 ＞B 组。

2.3各组大鼠体内血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）比较

12 周 末，C 组、D 组 大 鼠 较 B 组 大 鼠 Scr 含 量明显降低，D 组大鼠较C 组Scr 含量降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。C 组、D 组大鼠较 B 组大鼠BUN 含量明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），C 组、D 组大鼠BUN 含量差异不明显，差异无统计学 意 义（P＞0.05）。B 组、C 组、D 组 大 鼠 Scr 含 量、BUN 含量较A 组大鼠不同程度升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表 1。

2.4各组大鼠肾组织p-Samd2/3、TGF-β1的影响

正常组A 组大鼠肾脏组织中p-Samd2/3、TGF-β1在含量极低。C 组、D 组大鼠 p-Samd2/3、TGF-β1 表达较B 组明显下降，有统计学意义（P＜0.05），C 组较D组表达差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 各组大鼠血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、p-Samd2/3、TGF-β1 比较

3 讨论

目前西医对慢性肾功能衰竭病人最常用的治疗方式为透析治疗，能保护肾脏功能，缓解疾病发展。其中，腹膜透析使用较多，但临床发现腹膜透析病人腹膜纤维化发病较高，发病多与转化生长因子-β1（TGF-β1）等关系密切。肾痿复方颗粒作为中药制剂，能改善肾功能，较低肌酐、尿素水平，临床使用中发现，肾痿复方颗粒能改善腹膜透析病人腹膜纤维化进展。通过CRF大鼠模型，从而观察肾痿复方颗粒对对慢性肾功能衰竭腹膜透析大鼠TGF-β1/Smad 通路表达的影响，为该药的临床应用提供实验室依据。

实验结果表明，肾痿复方颗粒干预的大鼠血肌酐、尿素氮较未干预造模大鼠明显降低，说明肾痿复方颗粒对慢性肾衰大鼠有一定疗效，能改善肾脏功能，减缓肾脏损坏进程。通过活动次数的变化比较，肾痿复方颗粒对慢性肾衰大鼠生活质量有一定改善作用。现代医学认为慢性肾功能衰竭是肾功能损害、肾脏疾病发展的终末期状态，其主要的病理基础是肾纤维化，而腹膜纤维化是是腹膜透析病人的并发症之一。肾痿复方颗粒是基于“肾痿理论”而来，已有研究表明肾痿方能延缓慢性肾脏疾病患者肾纤维化进程[7-9]，但目前对于“肾痿理论”、由肾痿方研制的“肾痿复方颗粒”是否能减缓腹膜纤维化尚存疑问，缺乏实验室依据。

TGF-β1/Smad 通路是腹膜透析腹膜纤维化的主要机制，此次研究中，肾痿复方颗粒干预的大鼠p-Samd2/3、TGF-β1 表达较未干预模型大鼠明显下降，且随着药物干预计量的增加，其p-Samd2/3、TGF-β1表达越低，表明肾痿复方颗粒对腹膜纤维化有一定延缓作用，且随着药物的增加，纤维化进程降低越显著。肾痿复方颗粒主要由黄芪、三七、当归、牡蛎、怀牛膝、昆布、大黄组成。其中黄芪与三七为君药。黄芪甘温纯阳，能补诸虚。三七止血、活血，黄芪与三七配伍，补纳肾气，祛瘀而不伤新。昆布、牡蛎、当归作为君药，当归温通，补血活血；昆布入肾经，软坚散结，利水消肿；牡蛎咸寒，收敛固摄、滋阴潜阳。三药共奏活血化瘀、软坚散结、收敛固涩之功。大黄苦寒。清热攻下，祛瘀；怀牛膝活血化瘀，引药下行，补益肝肾；供为使药。诸药合用，共奏纳气活血、消散癓结，除废起痿。肾痿复方颗粒是在传统医学理论指导下针对慢性肾功能衰竭的辨证论治，随着对肾痿理论方药的广泛应用，除在慢性肾脏病，在越来越多的肾脏疾病、肾脏疾病并发症得到了大量的应用，有着广泛的应用前景，值得进一步去开发探索。