中药组方JNRK对乳腺增生大鼠的影响

关会林,王 玉,刘 勇

(1.牡丹江医学院科研处；2.牡丹江市妇女儿童医院生殖科，黑龙江 牡丹江 157011)

乳腺增生(hyperplasia of mammary gland，HMG)是临床上常见的乳腺疾病之一，其发病率占全部乳房疾病的75%[1]，现代研究表明该病高发于25～45岁育龄妇女中[2]。主要表现为雌激素和孕激素比例失衡引起的乳腺小叶的病理性增生[3]。现如今HMG的发病率日益增加，并有患乳腺癌的风险[4]。临床药物他莫昔芬是具有抗增殖作用的雌激素拮抗剂，已被广泛用于乳腺癌和HMG[5]。但是部分妇女不能耐受他莫昔芬，并有具有副作用的风险[6]。因此，需要开发对HMG副作用更小更安全，更有效的药物。

目前中药已被广泛用作各种疾病的替代疗法。最新研究证据表明，对于复杂或多因素疾病，具有共同或不同药理学活性的多种药物配方可以通过多种靶标多种成分的协同作用发挥比单一药物更好的治疗功效[7-9]。JNRK是以中医学理论为指导，并结合多年的临床实践经验进行组方，有多种功效如补气健脾、滋补肝肾、疏肝解郁、调节气血、活血化瘀等。临床应用具有活血行气、散血消肿、定痛生肌的作用。本文就中药组方JNRK对乳腺增生大鼠乳腺组织形态学和激素水平的影响进行深入的研究，为其临床用药提供实验依据。

1 材料

1.1 实验动物SPF级Wistar雌性未孕大鼠72只，8周龄，体质量180～220g，由牡丹江医学院科研共享平台实验动物中心提供。

1.2 药品试剂JNRK中药组方(哈医大药理实验室)；枸橼酸他莫昔芬片，规格：10mg/片， 批号：H37022925，山东健康药业有限公司；苯甲酸雌二醇注射液，每支1mL∶5mg，天津金耀药业有限公司，批号：H12020529；黄体酮注射液，每支1mL∶20mg，批号：H12020533，天津金耀氨基酸有限公司。

1.3 实验仪器赛默飞世尔酶标仪(美国Thermo Fisher公司)；日立高速冷冻离心机 CR22GⅡ；AG204-电子分析天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)；显微镜(德国 Leica公司)；台式高速低温离心机(德国Sigma公司)。

1.4 分组造模与给药将大鼠随机分为实验组(60只)和正常组(12只)，实验组再随机分为模型组、他莫昔芬组(0.0018g/kg)、中药组方JNRK低、中、高(0.1、0.2、0.4g/kg)剂量组，n=12。各实验组大鼠肌肉注射苯甲酸雌二醇(0.5mg/kg)连续25d，1次/d；再改用黄体酮(5mg/kg)肌注连续5d，1次/d。造模的同时，他莫昔芬组和中药组方JNRK各剂量组按体重比分别灌胃相应药物，正常组和模型组给予相同剂量的生理盐水，连续30d。

1.5 观察指标

1.5.1 大鼠血清中激素水平 末次给药后，禁食不禁水12h，乙醚麻醉后腹主动脉采血，4℃离心后取血清，酶联免疫试剂盒检测血清中孕酮(P)、雌二醇(E2)和睾酮(T)水平。

1.5.2 大鼠乳腺组织厚度和直径 精准测量乳腺组织厚度、最大直径及最小直径，乳腺体积=最大直径×最小直径×厚度。

1.5.3 大鼠乳腺组织病理形态观察 在乳头基底部的最大切面取大鼠的第三、四对完整的乳腺，使用4%多聚甲醛固定标本，常规石蜡包埋、作5μm石蜡切片后，进行HE染色，光学显微镜观察各组乳腺组织形态学变化。测定计量各组乳腺小叶以及小叶中腺泡和小叶间质，观察计量每个小叶腺泡数，导管上皮增生数，求其平均值。

1.6 统计学方法应用Graphpad Prism 5.0软件进行统计分析，多组间比较采用单因素方差分析，实验数据表示选用“均数±标准差”呈现结果，Tukey检验比较各组间差异。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠乳腺组织体积影响与正常组比较，模型组乳腺组织体积明显增大(P<0.05)。与模型组相比较，他莫昔芬组大鼠乳腺体积明显减小(P<0.05)，中药组方JNRK低、中、高剂量组大鼠乳腺体积明显减小(P<0.05)。结果表明：中药组方JNRK对苯甲酸雌二醇及黄体酮诱导的大鼠乳腺增生有明显的抑制作用，结果见表1。

表1 中药组方JNRK对大鼠乳腺组织体积的影响

注：与正常组比较，#P<0.05；与模型组比较，*P<0.05

2.2 对大鼠血清激素水平影响与正常组比较，模型组雌二醇、睾酮含量均显著升高(P<0.05)，孕酮水平显著降低(P<0.05)；与模型组比较，中药组方JNRK中、高剂量组与他莫昔芬组雌二醇含量显著降低(P<0.05)，中药组方JNRK低、中、高剂量组与他莫昔芬组孕酮含量明显升高(P<0.05)睾酮含量明显降低(P<0.05)。结果见表2。

表2 中药组方JNRK对大鼠血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)水平的影响

注：与正常组比较，#P<0.05；与模型组比较，*P<0.05

2.3 对大鼠乳腺组织病理形态的影响HE结果显示正常组乳腺小叶排列整齐规则，无增生，腺管整齐，腺管上皮细胞无增生，腺泡规则，乳腺导管无扩张。模型组腺泡数量增加，乳腺小叶数量增多，导管扩张明显，上皮细胞层数增多，有分泌物。JNRK和他莫昔芬作用后，腺泡及乳腺小叶数目减少，分泌物减少，导管管腔缩小，腺泡体积缩小，对乳腺增生大鼠病理形态的改变有明显改善作用。见图1。

图1 中药组方JNRK对大鼠乳腺组织

注：A正常组；B模型组；C他莫昔芬组；D、E、F 中药组方JNRK组

3 讨论

乳腺增生(HMG)是中年妇女的常见疾病，具有严重的癌变倾向，对妇女构成严重健康威胁[10]。他莫昔芬作为HMG的主要治疗药物，可以改善患者的总体生存率。但此药物的依从性和持久性很差，源于副作用会给生活质量带来负面影响[11]。因此寻找更有效且几乎没有副作用的药物来阻止HMG的发展具有重要意义。

乳腺增生病的发病机制尚不十分清楚，现代医学认为雌孕激素分泌失调是造成乳腺增生的根本原因。当机体内孕激素水平降低时，雌激素会相对过高，升高的雌二醇将导致体内孕酮含量降低，从而不能够抑制雌二醇，失去对乳腺的保护作用，雌激素的刺激使乳腺组织细胞在经期过度增生，而后复原不全导致导管、乳腺小叶等周围结缔组织细胞增生[12]。本实验使用外源雌激素肌注雌性未孕大鼠，扰乱大鼠性激素分泌，诱导乳腺组织增生，实验结果发现模型组动物100%出现了乳腺增生病症，而正常组动物的乳腺均未发现有乳腺增生，说明复制大鼠乳腺增生模型成功。用JNRK和他莫昔芬治疗后均有效抑制了大鼠乳腺增生情况，还降低了乳腺增生发生时血清睾酮和雌二醇含量，充分说明两种药物药效效基本一致。

乳腺增生属于中医“乳癖”的范畴，中医学认为乳腺增生治疗原则以调畅气机、疏通乳络、消肿散结为主，通过调节神经内分泌功能影响激素水平。中药组方JNRK(因为要保密，所以不能写全名，JNRK只是代号)经过乳康片改剂型后含有丹参、黄芩、柴胡、天冬、乳香、川芎、三棱等15味中药，具有调气健脾、滋补肝肾、疏肝解郁、调节气血、活血化瘀等功效。本研究结果显示该药能够通过调节大鼠性激素水平，改变雌激素引起的乳腺增生情况，改善乳腺增生病理形态学变化，使肿大的乳房体积缩小，明显改善增生的病理组织，从而达到抑制乳腺增生的目的。

综上所述，中药组方JNRK具有明显抑制乳腺增生的作用，为中药治疗乳腺增生病提供了药理依据，但其作用详细机制尚有待于进一步深入研究。