重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活苗的免疫效果评估

吴蕾

摘  要：为评估新型重组禽流感（H5+H7）三价灭活苗对父母代种鸡场的免疫效果，选择了五家公司的禽流感三价灭活苗产品，分别免疫9日龄的SPF鸡，并以厂家进行分组（分别是A、B、C、D、E组），对照组为F组;采集免疫前后血清，检测 H5N1（Re-11、Re-12、Re-8）和H7N9（H7-Re2、H7-Re1）抗体效价，分析不同公司疫苗产品在鸡上抗体的消长规律。结果表明，对照组鸡血清H5N1（Re-11和Re-12）和H7N9（H7-Re2）的HI抗体均为0;免疫1周后所有免疫组鸡的禽流感抗体开始上升，4周左右抗体效价达到高峰;产生抗H5N1（Re-11）的HI抗体最好的是A组;产生抗H5N1（Re-12）的HI抗体最好的是D组;产生抗H7N9（H7-Re2）的HI抗体最好的是E组;不同厂家禽流感三价苗产生禽流感抗体效价差异不显著。三价灭活苗同时可以产生抗H5N1（Re-8）和H7N9（H7-Re1）的有效抗体。本研究对鸡场免疫禽流感三价灭活疫苗提供数据支持。

关键词：禽流感;H5+H7三价灭活苗;免疫效果评估

中图分类号：S858.312.5     文献标识码：B     文章编号：1673-1085（2020）4-0015-05

高致病性禽流感是一种重要的人兽共患传染病，被世界卫生组织列为一类动物疫病[1]。2013年开始发现的 H7N9流感病毒对禽类表现为低致病性，感染禽类后并无明显临床症状;抗原不断变异是禽流感病毒最显著的特点，2017年5月12日我国农业部首次报道了一起家禽H7N9流感疫情，引起发病的H7N9流行毒株具有典型的高致病性禽流感分子特征，对禽类表现为高致病性，临床症状与H5亚型高致病性禽流感类似，死亡率较高[2]。为有效防控H7N9亚型禽流感，2017年7月农业部发布关于切实做好全国高致病性禽流感秋季免疫工作的通知，要求从2017年秋季开始对全国家禽全面开展H7N9禽流感疫苗的免疫[3]。

许多养殖场由于规模化程度低或者其他原因的限制，没有自己的实验室，对所使用的疫苗免疫效果不了解或者免疫程序不合理，导致免疫后仍不能产生有效的抗体保护家禽。选择合适的疫苗和合理免疫程序对有效防控禽流感具有重要的意义，本实验选择了5家公司最新生产的H5+H7三价灭活苗免疫SPF鸡，通过检测H5N1（Re-11和Re-12）和H7N9（H7-Re2）的抗体效价和CV%值来评估免疫效果，并且根据实验结果筛选最合适的重组禽流感（H5+H7）三价灭活苗。

1  材料与方法

1.1  试验动物、疫苗  SPF鸡由山东省农业科学院家禽研究所SPF鸡场提供，试验场所为山东省农业科学院实验动物房，试验在SPF负压隔离器中进行。

抗原H5N1（Re-11）株、H5N1（Re-12）株H5N1（Re-8）株、H7N9（H7-Re2）株和H7N9（H7-Re1）株及对应的阳性血清均由哈尔滨兽医研究所提供。禽流感H5+H7三价灭活苗产品信息见表1。

1.2  试验分组  90只9日龄SPF鸡随机分为6组，每组15只。设5个试验组，分别对应5个疫苗厂家（A、B、C、D、E），颈部皮下注射，每只0.3mL;1个对照组，免疫等量PBS。分别在免疫后1、2、3、4周对各组别鸡进行采血。

1.3  试验方法  HA和HI 检测方法根据国家标准（GB/T-18936-2003）进行。

2  结果与分析

2.1  H5N1（Re-11）株抗体检测结果  在9日龄首次免疫后1周，鸡体产生的抗H5N1（Re-11）的抗体效价开始上升，免疫后2周抗体检测合格率100%，免疫后4周抗体效价达到高峰。高峰时抗体效价最高（A组）和最低（C组）相差1.04log2个滴度。B组抗原变异系数最小（CV值最低），与变异系数相对较高的C组相比，CV降低了2.95%。F组抗体效价均为0log2（表2）。

2.2  H5N1（Re-12）株抗体检测结果  免疫后1周，抗H5N1（Re-12）的禽流感抗体开始上升，免疫后2周，除A组和B组外，其余组采集的血清样品均合格，免疫后4周抗体达到高峰。高峰时抗体最高的D组和抗体最低的A组相差1.19log2个滴度。CV值最好的E组比相对较差的A组低了5.37%。F组抗体值均为0log2（表3）。

2.3  H5N1（Re-8株）抗体检测结果  免疫后2周，抗H5N1（Re-8株）的禽流感抗体开始上升，免疫后4周各个试验组血清抗体值在5log2和6log2之间。F组抗体值均为0log2（表4）。

2.4  H7N9（H7-Re2）抗体检测结果  免疫后1周，抗H7N9（H7-Re2）禽流感抗体开始上升，免疫后3周抗体检测合格率100%，免疫后4周抗体达到高峰。高峰时抗体效价最高的C组和E组比最低的D组高了1.52log2个滴度，C组的CV值，较E组的低了0.86%，比相对较差的B组低了3.49%。F组抗体值均为0log2（表5）。

2.5  H7N9（H7-Re1）抗体检测结果  与H7N9（Re-2）抗体产生结果相似，免疫后3周抗H7N9（H7-Re1）抗体检測合格率均达100%，4周抗体达到高峰。高峰时抗体效价最高的A组比最低的D组高了1.04log2个滴度，A组和E组抗体效价差异不显著，比其高了0.35log2滴度，E组的CV值最低，比A组低了3.79%。F组抗体值均为0log2（表6）。

3  讨论

2017年以来H7N9流感变异毒株给我国家禽养殖业带来了严重的影响和经济损失[2、4]。国内外禽流感防控实践表明，疫苗免疫是防治禽流感的关键措施之一[5-7]。

本試验中，从免疫后产生的抗体来看，5个厂家H5+H7三价灭活苗差异不显著，都符合规定。

本试验还检测了H5N1（Re-8）和H7N9（H7-Re1）的抗体效价，见表4和表6。尽管H5+H7三价灭活苗不含有H5N1（Re-8）疫苗株，但是免疫后4周，产生的抗H5N1（Re-8）的抗体效价也能达到5log2和6log2之间，这表明H5+H7三价灭活苗对市场上的H5N1（Re-8）禽流感也有一定的保护效果。

同样免疫后，检测到抗H7N9（H7-Re1）抗体结果和抗H7N9（H7-Re2）的结果相似，抗体效价最高达到了9.42log2，见表6。这表明5个厂家H5+H7三价灭活苗尽管不含有H7N9（H7-Re1）疫苗株，对H7N9（H7-Re1）毒株同样具有很好的防控效果。

重组禽流感 H5+H7三价疫苗中因不同厂家疫苗抗原含量、生产工艺、免疫佐剂以及保存运输等方面的原因，会导致疫苗质量存在一些差异，从而造成免疫后H5和H7亚型免疫抗体水平差异。因此，免疫前后持续的抗体检测是当前高致病性禽流感免疫防控工作中的重要环节。另外，由于AIV等病毒抗原变异持续发生，定期开展家禽重大疫病的流行病学调查和疫苗的免疫效果评估具有重要的临床指导意义。

参考文献：

[1]  Chen Hua-lan.H5N1 avian influenza in China [J]. Sci China Life Sci， 2009，52（5）：419-427.

[2]  田国彬.禽流感流行现状与防控措施[J].兽医导刊，2017（17） ：8-11.

[3]  农业部.关于切实做好全国高致病性禽流感秋季免疫工作的通知 [EB/OL].（2017-07-10）.http：//www.moa.gov.cn/govpublic/SYJ/201707/t20170711_5744436.htm.

[4]  Jianzhong Shi，Guohua Deng，Huihui Kong，et al.H7N9 virulent mutants detected in chickens in China pose an increased threat to humans[J].Cell Research，24 October 2017：1409-1421.

[5]  张济培，张溢珊，牛森，等.H7N9 亚型禽流感免疫程序研究初报[J].广东畜牧兽医科技，2017，42（3） ：21-27.

[6]  曾显营.H5N1亚型重组禽流感灭活疫苗种毒Re6 株的生物学特性及免疫原性研究[J].中国预防兽医学报，2010，41（10） ：800-803.

[7]  田国彬.防控H7N9，建议免疫 2 次以上 H7-Re1 苗[J].北方牧业，2017（20）：9.

Abstract：In order to evaluate the immunity effect of the new recombinant avian influenza （H5+H7） trivalent inactivated vaccine on the parental generation chicken farm， the trivalent inactivated vaccine products of five companies， A， B， C， D and E， were selected. Serum samples of chickens were collected weekly before and after inoculation to test the titer of H5N1（re-11， re-12， re-8） and H7N9（H7-re2， H7-re1） antibodies， and to analyze the fluctuation pattern of antibodies on chickens from different companies. The results showed that the HI antibodies of H5N1（re-11 and re-12） and H7N9（H7-re2） in the serum of the control group were 0log2.After 1w of immunity， the antibody of avian influenza of all the chickens in the immune group began to rise，and the titer of antibody reached a peak around 4w.The group that produced the best HI antibody against H5N1（re-11） was group A;The group that produced the best HI antibody against H5N1（re-12） was group D; The group E produced the best HI antibody against H7N9（H7-re2）.Different manufacturers of avian influenza trivalent vaccine produced avian influenza antibody titer difference is not significant.The trivalent inactivated vaccine also produces effective antibodies against H5N1（re-8） and H7N9（h7-re1）.This study provides data support for chicken farm immunity to avian influenza trivalent inactivated vaccine.

Key words：Avian influenza viruses;vaccine of recombinant avian influenza virus（H5+H7） trivalent inactivated;immune effect evaluation