γ干扰素基因多态性在子痫前期患者中的表达及对妊娠结局的影响

高 星，孙伟红

承德市中心医院 妇产科 (承德市 067000)

子痫前期是妊娠20周后首次出现的血压升高、蛋白尿，临床多表现为恶心呕吐、上腹部不适、眼花头痛等，严重者可引起抽搐、昏迷等[1]。子痫前期病因复杂，好发于初产妇，能引起较为严重的母儿并发症，影响患者健康生活[2]。既往研究[3]表明，子痫前期的发生是一个多因素过程，常伴有遗传、环境因素的共同参与，具有较为明显的家族遗传性倾向，但临床上对于其发病机制尚未明确。γ干扰素(IFN-γ)基因是子痫前期患者中重要的基因编码，能产生较为重要的IFN-γ炎症因子，直接参与机体细胞免疫调节[4-5]。国内学者研究[6]表明，IFN-γ基因多态性中，rs2430561位点发生突变能增加子痫前期发生率，但是对妊娠结局的影响研究较少。本研究以子痫前期患者和健康孕检的妊娠者作为研究对象，探讨IFN-γ基因多态性在子痫前期患者中的表达及其对妊娠结局的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择2017年6月至2018年10月承德市中心医院子痫前期患者71例为试验组，年龄23～38(27.63±3.41)岁；病程1～4(2.41±0.39)月；体重指数(BMI)23～29(25.62±3.23) kg/m2。患者中，初产妇45例，经产妇26例。纳入标准：1)均符合《妇产科学》第8版中子痫前期诊断标准[7]，患者妊娠20周后收缩压≥140 mm Hg，舒张压≥90 mm Hg，部分患者可伴有24 h尿蛋白定量≥0.3 g；2)意识清楚，能与医生进行沟通、交流。选择同期健康孕检的妊娠患者69例为对照组，年龄22～39(28.11±3.43)岁；BMI 22～30(25.77±3.29) kg/m2。其中，初产妇36例，经产妇33例。

1.2 方法

1.2.1 IFN-γ基因多态性测定 1)DNA基因提取。试验组入院后首次取外周空腹静脉血3 mL，对照组正常孕检当天取外周空腹静脉血3 mL，3 500 r/min，离心半径50 cm，离心35 min，血清分离后，加入三羟甲基氨基甲烷缓冲液、乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、蛋白酶K等进行过夜孵育，温度设定为37 ℃；向获得的溶液中加入苯酚和Tris缓冲液，离心后获得沉淀物，并向沉淀物中加入乙酸钠、乙醇等，完成DNA基因提取，放置在-70 ℃冰箱中，备用。2)IFN-γ基因SNP位点测定。查阅美国生物技术信息中心数据库，初步确定rs2069705、rs1861493、rs2193050、rs2430561及rs2069718部位的位点，并借助专用软件完成相关引物设计(引物设计均由上海生工生物工程股份有限公司合成)(表1)。设置PCR参数：95 ℃ 预变性5 min，95 ℃变性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共进行40个循环，最后72 ℃终延伸5 min。采用单碱基延伸法PCR扩增IFN-γ基因SNP位点[8-9]。

表1 引物设计与合成

1.2.2 SNP位点的基因型测定 利用单碱基延伸法分析IFN-γ基因5个SNP位点的基因型，将IFN-γ基因中rs2430561位点的AT+TT/AA定义为显性模型，TT/AT+AA基因定义为隐性模型，凸显遗传的变化规律[10]。

1.2.3 不同血清标本中IFN-γ水平测定 取上述分离的血清标本，采用酶联免疫吸附试验测定两组不同基因型下IFN-γ水平，利用3550型酶标仪在450 nm下完成吸光度值测定，绘制标准曲线，完成不同血清标本中IFN-γ水平测定[11]。

1.2.4 妊娠结局 记录两组胎死宫内、新生儿窒息、新生儿透明膜病、肝功能损害、急性心衰及弥散性血管内溶血(DIC)发生率。

1.3 统计学方法

采用SPSS 18.0软件处理，定性资料采用例数(%)表示，行2检验，定量资料采用表示，行t检验，检验水准α除特殊说明外均设定为0.05。

2 结果

2.1 两组IFN-γ基因中基因型比较

试验组子痫前期患者SNP基因位点rs2069705、rs1861493、rs2193050及rs2069718基因频率比较，差异无统计学意义(P>0.05)；试验组子痫前期患者SNP基因位点rs2430561中AA、AT基因频率低于对照组(P<0.05)，TT基因频率高于对照组(P<0.05)(表2)。

表2 两组IFN-γ基因中基因型比较[n(%)]

2.2 两组IFN-γ基因中等位基因频率比较

试验组子痫前期患者rs2069705中A、G基因频率和rs1861493、rs2193050、rs2069718中G、A基因频率与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)；试验组rs2430561中A等位基因频率低于对照组(P<0.05)，T等位基因高于对照组(P<0.05)(表3)。

表3 两组IFN-γ基因中等位基因频率比较[n(%)]

2.3 两组不同基因型下IFN-γ水平比较

试验组与对照组AA基因位点下IFN-γ水平差异无统计学意义(P>0.05)；试验组TT、AT、AT+AA基因位点下IFN-γ水平高于对照组(P<0.05)(表4)。

表4 两组不同基因型下IFN-γ水平比较

2.4 两组妊娠结局比较

试验组子痫前期患者胎死宫内、新生儿窒息、新生儿透明膜病、肝功能损害、急性心衰及DIC发生率高于对照组(P<0.05)(表5)。

表5 两组妊娠结局比较[n(%)]

3 讨论

子痫前期是妊娠期特有的疾病，临床对于其发病机制尚未明确，普遍认为与高血压、蛋白尿等有关，且随着患者病情的不断发展，将会引起身体器官功能障碍。国外学者[12]以重度子痫前期患者116例、正常孕妇107例及未孕女性56例作为对象，完成IFN-γ基因位点测定，结果表明，IFN-γ基因在重度子痫前期患者中基因频率较高。本研究中，试验组子痫前期患者SNP基因位点rs2069705、rs1861493、rs2193050及rs2069718基因频率比较差异无统计学意义(P>0.05)；试验组子痫前期患者SNP基因位点rs2430561中AA、AT基因频率低于对照组(P<0.05)，TT基因频率高于对照组(P<0.05)；试验组rs2430561中，A等位基因频率低于对照组(P<0.05)，T等位基因频率高于对照组(P<0.05)，说明IFN-γ基因中rs2430561位点在子痫前期患者中基因频率较高，可能直接参与子痫前期的发生、发展。国内学者[13]研究表明，子痫前期病因复杂，发生时常伴有母体免疫缺陷、体液免疫增强，导致Th1/Th2发生免疫失衡，且子痫前期患者免疫应答以Th1型细胞因子为主，持续的Th1表达异常将会引起Th1/Th2发生免疫失衡，影响滋养细胞增殖与细胞浸润障碍，引起血管内皮细胞受损，延缓胎盘生长发育，影响妊娠结局。IFN-γ基因主要定位于染色体12q15中，能在人体内产生相对重要的免疫调节蛋白IFN-γ。国内研究[14]表明，IFN-γ由Th1细胞分泌产生，且在子痫前期患者多呈高表达，能抑制Th2细胞分化，促进细胞活性、增殖，从而进一步损害胎盘组织，影响母婴结局。本研究中，试验组与对照组AA基因位点下IFN-γ水平差异无统计学意义(P>0.05)，试验组TT、AT、AT+AA基因位点下IFN-γ水平高于对照组(P<0.05)，说明IFN-γ基因中不同基因位点下IFN-γ水平存在明显的差异性，能直接参与疾病的发生、发展。国内学者[15]进行了一次动物实验，给予小鼠注射过量的IFN-γ后，大大增加流产概率，部分大鼠宫内发展迟缓。同时，IFN-γ能与肿瘤坏死因子-α相互作用，促进细胞活化、增殖，损害胎盘组织，抑制小鼠胚胎生长、发育。本研究中，试验组子痫前期患者胎死宫内、新生儿窒息、新生儿透明膜病、肝功能损害、急性心衰及DIC发生率均高于对照组(P<0.05)，说明IFN-γ基因多态性能影响子痫前期母婴结局，对伴有IFN-γ基因多态性的子痫前期患者可能会增加母婴不良结局发生率，影响母婴健康；因此，临床上对于确诊的子痫前期患者应加强IFN-γ基因多态性测定，预测母婴结局，对于高风险、高危患者，可尽早终止妊娠。

综上所述，IFN-γ基因中rs2430561位点是子痫前期的易感基因位点，并且不同基因型下患者血清IFN-γ均呈高表达，能影响患者妊娠结局。