硒提高雏鸡抗MDV感染能力的试验

文│康晨张家森（安徽省阜阳市动物卫生监督所）

马立克氏病是鸡的一种淋巴组织增生性肿瘤病，其特征为外周神经淋巴样细胞浸润和增大，引起肢（翅）麻痹，以及在性腺、虹膜、各种脏器、肌肉和皮肤上发生肿瘤病灶。病原为马立克氏病毒（MDV），属于疱疹病毒科禽疱疹病毒2型，是鸡重要的传染病病原，马立克氏病也是目前危害养鸡业健康发展的三大主要疫病（马立克氏病、新城疫、鸡传染性法氏囊炎）之一。马立克氏病在国内呈散发流行。20世纪70年代在我国开始发现鸡群感染马立克氏病的病例，发病的鸡群表现轻微的神经症状和部分病鸡发生内脏型马立克氏病。后来我国应用火鸡疱疹病毒疫苗，一定程度上控制了马立克氏病疫情。近年来，由于出现马立克氏病毒变异株，少数地区出现免疫失败。一些野毒株甚至能在免疫过CVI988/Rispens株的鸡群引发严重的疾病。它们的出现可能是一些地区鸡群仍发生马立克氏病的重要原因之一，不仅国外进口的肉鸡、鹌鹑、山鸡等禽类发病，我国本土品种鸡也被发现感染马立克氏病，经火鸡疱疹病毒（HVT）和马立克氏病毒双价苗免疫的鸡群马立克氏病发病率达1%～30%，神经型死亡率1%～3%，内脏型死亡率一般为25%～30%，给养鸡业造成严重的经济损失。

微量元素硒是有机体生命活动必不可少的元素，在有机体的生长、发育、防止疾病的发生有着直接关系，尤其是与抗肿瘤方面有着密切关系。硒具有抗癌变、提高机体免疫力、清除体内毒素、修复组织细胞、软化血管、清理血管壁的胆固醇、改善血液循环通道、延缓衰老、预防多种疾病、降低患癌风险等作用。同时，对重金属引起的中毒还具有一定的保护和解毒作用，有抑制其吸收和促进排泄的作用。流行病学研究表明，血浆中硒含量过低易导致癌症、心脑血管疾病、骨关节炎的发生。Karam等人研究发现，合成的有机硒化物比无机硒化物、天然硒化物具有更强的抗肿瘤活性和更低的毒性。

近年来，由于含硒药物在抗肿瘤、抗病毒以及治疗神经系统相关疾病等方面的应用，已成为国内外学者研发的热点，药物研究主要集中在抗肿瘤、抗炎和抗高血压等方面。

超氧化物歧化酶（SOD）是一种具有特定生物催化功能的蛋白质，由蛋白质和金属离子组成，广泛存在于自然界的动植物以及一些微生物体内。SOD活性的测定可以间接反映机体清除氧自由基的能力。丙二醛（MDA）作为脂质过氧化物的终产物之一，被称为生物体内自由基的指示物，被广泛作为各种氧自由基损伤机体的指标。通过研究雏鸡在饲料中添加亚硒酸钠感染MDV后肾脏内SOD活性和MDA含量，可以为硒在畜牧业生产过程中的应用以及在养鸡业的科学饲养管理提供参考。

一、材料与方法

1.试剂和仪器。亚硒酸钠化学纯，含量为99%（上海金山县兴塔化工厂生产，批号：20130801），722分光光度计、水浴锅、离心机、试管、烧杯、旋涡振荡器、微量移液器等。

2.MDV的BJ-1株。

3.HVT疫苗。试验用火鸡疱疹病毒疫苗系美国Solvay公司生产，批号SerialNo.088/93。

4.M D A 测定试剂盒由南京建成生物研究所提供（批号：20140507）。

（1）操作方法。旋涡混匀器混匀，试管口用保鲜膜扎紧，用针头刺一小孔，95℃水浴（或用锅开盖煮沸）40分钟，取出后流水冷却，然后4000转/分钟，离心10分钟，取上清液，532纳米处，1厘米光径，蒸馏水调零，测各管吸光度值。

（2）计算公式。血浆中MDA含量（纳摩尔/毫升）=（测定管吸光度-测定空白管吸光度）/（标准管吸光度-标准空白管吸光度）×标准品浓度（10纳摩尔/毫升）×样本测试前稀释倍数。

5.SOD试剂盒由南京建成生物研究所提供（批号：20130513）。

（1）操作方法。混匀，室温放置10分钟。在波长550纳米处，1厘米光径比色杯，蒸馏水调零，比色。

（2）计算公式。血浆中SOD的含量＝（对照管吸光度-测定管吸光度）/对照管吸光度/50%×反应的稀释倍数×样本测试前的稀释倍数。

6.试验设计。150只商品罗曼雏鸡在1日龄随机分为3组，分别为对照组、攻毒组、攻毒加硒组（在基础日粮中添加硒0.065毫克/千克）；攻毒组和攻毒加硒组鸡群于第13天腹腔注射经稀释的BJ-1株血毒0.2毫升/只。分别从攻毒后7、14、28、56日龄的每组鸡中随机取5只雏鸡，各取出1克肾脏样品和生理盐水按照1∶9放在研磨器中研磨，然后取上清液测定SOD的活性和MDA的含量。

表1蛋鸡饲料配方

表2预混料成分及保证值（每千克含量）

7.试验动物来源及管理。雏鸡购于安徽吉凤禽业有限公司，免疫鸡群在1日龄时接种火鸡疱疹病毒疫苗。攻毒组与非攻毒组鸡在整个试验期间分别隔离饲养于经消毒的繁殖实验室和动物房内，予以同等的饲养管理，适时接种鸡新城疫疫苗和鸡传染性法氏囊病疫苗。定期称重，计算饲料消耗和料重比。饲养管理规范化，自由采食和饮水。日粮配方见表1、表2。

8.测定指标与方法。血浆中SOD活性的测定严格按试剂盒说明书方法进行；血浆中MDA的含量测定严格按试剂盒说明书方法进行。

9.数据处理。数据处理测定结果以平均数和标准误（Mean±SE）表示，用软件对数据进行处理，确定差异显著性。

二、结果

1.硒对雏鸡感染MDV后肾脏中MDA含量的影响。从表3和图1可知：7日龄攻毒组肾脏中MDA的含量高于对照组肝脏中MDA的含量（P＞0.05），但未达到显著水平。攻毒加硒组肾脏中MDA的含量低于攻毒组和对照组肾脏中MDA的含量（P＞0.05），但未达到显著水平；14日龄攻毒组肾脏中MDA的含量显著地高于对照组肾脏中MDA含量（P＜0.05），攻毒加硒组肝脏中MDA的含量低于攻毒组中MDA的含量（P＞0.05），但未达到显著水平；28日龄攻毒组肾脏中MDA的含量显著高于对照组肾脏中MDA的含量（P＜0.05），攻毒加硒组肾脏中MDA的含量极显著低于攻毒组肾脏中MDA的含量（P＜0.01），低于对照组肾脏中MDA的含量（P＞0.05）；56日龄攻毒组肾脏中MDA含量高于对照组肾脏中MDA含量（P＞0.05），但未达到显著水平。攻毒加硒组肾脏中MDA的含量低于攻毒组和对照组肾脏中MDA的含量（P＞0.05），但未达到显著水平。试验结果表明，日粮中添加硒元素在28日龄鸡只时可以有效地降低肾脏中MDA的含量，即使是感染MDV后的鸡群；7日龄、14日龄以及56日龄肾脏中MDA的含量与对照组相比有降低的趋势，但未达到显著水平（P＞0.05）。

◎图1雏鸡感染MDV后肾脏中MDA含量变化柱形图

◎图2雏鸡感染MDV后肾脏中SOD活性变化的柱形图

2.硒对雏鸡感染MDV后肾脏中SOD活性的影响。从表4和图2可知：7日龄攻毒组肾脏中SOD的活性极显著地低于对照组肾脏中SOD的活性（P＜0.01），攻毒加硒组肾脏中SOD活性高于攻毒组肾脏中SOD的活性（P＞0.01），但未达到显著水平；28日龄各组间肾脏中SOD的活性差异均未达到显著水平（P＞0.05）；56日龄攻毒组肾脏中SOD的活性与对照组肾脏中SOD的含量差异不显著（P＞0.05），攻毒硒组肾脏中SOD的活性高于攻毒硒组肾脏中S O D 的活性，但未达到显著水平（P＞0.05）。试验结果表明，日粮中添加硒元素在7日龄相比攻毒组可以极显著地增强SOD的活性（P＜0.01）；28日龄和56日龄雏鸡肾脏中SOD的活性与对照组和攻毒组相比有增强的趋势，但均未达到显著水平（P＞0.05）。

三、讨论

1.硒对雏鸡感染MDV后肾脏中MDA含量的影响。MDA是机体内氧自由基代谢中产生的脂质过氧化产物，它可以反映该体系中脂质过氧化自由基的存在及细胞膜过氧化的程度。氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸的过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂氢过氧化物的分解产物引起细胞损伤。因而测定MDA的含量常常可反应机体内脂质过氧化物的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。由表3和图1知，攻毒组MDA的含量始终都高于对照组，说明MDV能

表3雏鸡感染MDV后肾脏中MDA含量的变化（Mean±SE，n=5，纳摩尔/毫升）

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表4雏鸡感染MDV后肾脏中SOD活性的动态变化（Mean±SE，n＝5，U/毫升）够作用于机体产生更多的MDA，增加其对机体的损害程度。尤其在雏鸡早期这种损害效果更明显，随着鸡群日龄的增加，MDV对提高鸡群体内的MDA的含量越来越不明显。而攻毒硒组的MDA含量总体小于攻毒组和对照组，说明在日粮中添加硒可以减少MDV对鸡体的损害，尤其在28日龄之前。本实验结果表明：日粮中添加硒元素使体内硒含量增多，能增加过氧化物酶的活性，提高抗氧化能力，清除体内自由基，使MDA含量下降，从而减少有害物质对机体的损害，提高抵抗MDV的能力。

2.硒对感染MDV的雏鸡肾脏中SOD活性的影响。在生物的进化系统中，细胞内形成了防御活性氧毒害的保护机制，其中起重要作用的是SOD，其主要功能是清除氧气而产生过氧化氢和氧气，但过氧化氢可以和氧气相互作用产生更多的自由基，凡是能提高机体内抗氧化酶活性的物质同时也具有了抑制及清除自由基的作用，自由基清除剂能清除自由基对机体的毒害作用。由表4和图2知，7日龄、28日龄、56日龄攻毒加硒组肾脏中SOD活性高于攻毒组的活性，说明在日粮中添加硒能够提高感染MDV雏鸡肾脏中SOD的活性。本实验研究结果表明：日粮中添加硒元素，会使体内硒含量增加并能增加过氧化物酶的活性，提高抗氧化能力，从而增强雏鸡的免疫力，提高雏鸡抗MDV感染的能力。