禽蛋产品沙门氏菌生化型和血清型分析

马丽萍，张素艳，蒋 健

(余姚市朗霞街道办事处， 浙江 余姚 315480)

沙门氏菌是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病病原菌之一，目前全世界已发现约2500种血清型。在世界各地的细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的中毒事件和病例数列为榜首。沙门氏菌源于家畜、家禽及粪便之中，常污染的食品为猪肉、鸡肉、牛肉、鸭肉、香肠、火腿及熏肉制品和鸡蛋等。其众多的血清型中鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌等是常见的污染菌，它们是引起人类沙门氏菌食物中毒的主要致病菌，已对食品安全构成了严重威胁。传统的生化和血清分型方法目前仍然是流行病学调查中对食源性疾病病原菌鉴定分析的基础手段。为了解人们生活必需的畜禽产品中沙门氏菌的污染状况，于2015-2016年系统地开展了某地零售禽蛋产品中沙门氏菌监测，监测了4大类(鹌鹑蛋，鸭蛋，鸡蛋，鹅蛋)，并对沙门氏菌分离株进行血清型和生化型分析研究，以揭示沙门氏菌分布状况，流行病学特征以及菌株之间的同源性，为食源性疾病爆发的预防和控制提供技术支持。

1 材料与方法

1.1样品 于2015年7月至2016年6月分别从某市各大超市、批发市场购买食品样品209份(鹌鹑蛋58份，鸭蛋32份，鸡蛋101份，鹅蛋18份)，置于2～8 ℃采样箱中尽快送实验室检验。

1.2培养基和试剂 沙门氏菌检验所需培养基(广东环凯微生物科技有限公司)，沙门氏菌诊断血清(宁波天润生物药业有限公司)，API 20E生化鉴定试剂条及其配套试剂(法国梅里埃公司)。

1.3检验方法

1.3.1分离培养和生化鉴定 食品中沙门氏菌检验依据GB4789.4-2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》方法进行，疑似菌落经三糖铁生化实验和A-F O多价血清凝集实验初筛，符合者进行API 20E生化试剂条鉴定。

1.3.2血清诊断 对分离的沙门氏菌用玻片凝集法进行血清分型。首先检查沙门氏菌O抗原，与A-F群多价血清凝集的分别用O2、O4、O7、O8、O9、O10、O11因子血清分群，与A-F群多价血清不凝集者，则用OMA-OMG沙门氏菌多价血清凝集，再进行分群，最后以H血清鉴定其鞭毛抗原，参照沙门氏菌属诊断抗原表，并根据生化反应特征，做出菌型诊断。

2 结果

2.1畜禽产品中沙门氏菌污染情况 209份样本中，共检出沙门氏菌阳性42份，总检出率为20.10%。不同禽蛋产品中沙门氏菌的污染情况详见表1，不同采样地点沙门氏菌阳性检出情况见表2。

鸡蛋的蛋壳上残留的污渍中，携带部分沙门氏菌，相邻的鸡蛋基本都有一定影响。本次实验中，所有禽蛋类阳性样品，未测出沙门氏菌肠毒素。

表2 不同采样地点沙门氏菌阳性检出情况

2.2畜禽产品中沙门氏菌分离株血清分型结果 42个阳性样品中检出的46株沙门氏菌，分为15个血清型。

2.3畜禽产品中沙门氏菌API 20E鉴定生化谱与血清型对应关系 46株菌株经API 20E鉴定，根据生化反应的不同，分为7种不同生化谱的沙门氏菌API生化型，主要的2种为API Ⅰ型(6704752)和API Ⅱ型(6704552)，分别占检出菌株的52.17%和34.78%，这两种主要API生化型的区别仅在于肌醇(INO)的阴阳性不同。由此可以看出沙门氏菌的生化特性比较稳定，以肌醇阴阳性不同为特征，可以将7种不同的沙门氏菌生化谱归为两大类。肌醇为阳性的包括5种：最主要的是API I型(6704752)，以及API Ⅲ型(6604752)鸟氨酸脱羧酶(ODC)阴性的沙门氏菌菌株，API Ⅳ型(6704742)鼠李糖(RHA)阴性的沙门氏菌菌株，API Ⅴ型(6704712)蜜二糖(MEL)阴性的沙门氏菌菌株，API Ⅵ型(6704352)山梨醇(SOR)阴性的沙门氏菌菌株。肌醇为阴性的包括2种：最主要的API Ⅱ型(6704552)和API Ⅶ型(2704552)赖氨酸脱羧酶(LDC)阴性的沙门氏菌菌株。

3 讨论

食物传播是人类感染沙门氏菌的主要途径，肉类(尤其是畜禽肉)等很多食品都与沙门氏菌疾病有关。本次调查发现，禽蛋产品受到沙门氏菌污染的情况比较严重，209份食品中，沙门氏菌阳性样品数为42份，其中制作蛋糕的鸡蛋中检出20份，总检出率为9.57%。调查发现，农村市场零售禽蛋被沙门氏菌污染现象较大型超市和城市集贸市场普遍。这与目前禽蛋销售逐渐走向集团化，超市、城市集贸市场和农贸市场的产品来自相同上级批发商，产品质量上基本无多大差异，只是超市和集贸市场均是集团管理，对销售和贮藏的卫生条件较好，因而减少了致病菌的交叉污染。因此，加强禽蛋生产集团的运输和销售管理，是降低和控制食源性致病菌污染的关键。

在我国，引起食物中毒最常见的血清型主要是鼠伤寒沙门氏菌、德尔卑沙门氏菌和肠炎沙门氏菌等。本研究表明，某地禽蛋污染沙门氏菌血清型以德尔卑(21.74%)、鼠伤寒(10.87%)、肠炎(8.7%)、茨昂威(8.7%)、印第安纳(8.7%)、韦太夫雷登(8.7%)为主。

本研究应用API 20E生化试剂条对分离菌株进行了鉴定，鉴定出7种不同生化谱的沙门氏菌API生化型。研究发现，不同血清型沙门氏菌菌株的生化反应具有相似性，差别不大，其主要的变化在于肌醇(INO)、鸟氨酸脱羧酶(ODC)、鼠李糖(RHA)、蜜二糖(MEL)、山梨醇(SOR)、拉氨酸脱羧酶(LDC)的反应，这与其他学者的研究结果也一致。对沙门氏菌分离菌株进行生化型和血清型研究分析，是沙门氏菌监测的首要任务，是流行病学调查的基础，对当地禽蛋沙门氏菌监测和防治工作具有重要的理论和实践意义。