唾液腺淋巴上皮性病变中免疫组织化学双染技术的应用

朱姝美

【摘  要】目的：分析免疫组织化学双染技术应用于唾液腺淋巴上皮性病变的诊断效果，根据不同的抗体阳性表达形式及染色效果，判定最佳的病变诊断染色途径。方法：选取本单位检测组织样本包括良性淋巴上皮病、淋巴上皮癌、淋巴组织结外边缘区 B 细胞淋巴瘤，分别应用抗体免疫组织化学单染色法及组合双染色法，对照不同染色方法的染色效果。结果：单染结果显示Ki-67定位区域为细胞核、AE1/AE3定位区域为上皮细胞细胞质位置，CD20cy定位区域为B淋巴细胞的细胞膜位置，不同抗体的阳性检测率及染色对比度优良。双染色顺序为 Ki-67 （DAB 显色）随后AE1/AE3、CD20cy （AEC 显色），应用EnvisionTM二步法完成DAB 显色，抗体的定位相对更为准确，有鲜明的颜色对比，相较于单染，其阳性比率及阳性染色强度无显著差异（P>0.05）。结论：通过免疫组织双染技术能够提供辅助诊断的有效途径，在细胞群蛋白表达中提供更具价值的信息。

【关键词】唾液腺;淋巴上皮性病变;免疫组织;化学双染技术

【中图分类号】R46      【文献标识码】A      【文章编号】1672-3783（2020）03-0270-01

唾液腺肿瘤是唾液腺组织中的常见疾病的一种，当前发病率有逐年增多的趋势^[1]，多数唾液腺肿瘤为上皮性肿瘤类型，其病理类型较为复杂，不同的肿瘤在影像学显示、临床表征等方面存在差异，常规的检测方法为免疫组化检测方法，免疫组化双染技术相较于单染技术具有显著的应用优势，能够在单张切片上同时完成对两种抗体的标识，且以不同的颜色呈现出来，双染技术能够对特定的细胞群中的蛋白表达进行观察，在较为复杂的细胞类型检验中有广泛的应用^[2]。此次研究中，应用免疫组织化学双染法分别对单位组织样本进行检验，现就研究结果作如下内容报道。

1 资料与方法

1.1一般资料

此次研究中，选取我单位检验样本包括良性淋巴上皮病（benign lymphoepithelial lesions，BLEL）、淋巴上皮癌（lymphoepithelial carcinoma，LEC）、淋巴组织结外边缘区 B 细胞淋巴瘤（extranodal marginal zone lymphomaof mucosa-associated lymphoid tissue，MALT 淋巴瘤）各10例。

1.2方法

此次研究中，所有的樣本材料应用甲醛液体进行固定，在完成脱水及石蜡包埋处理后进行常规H-E染色，同时由有丰富经验的医师进行阅片诊断。（1）免疫组织化学染色单染应用的抗体为Ki-67、AE1/AE3、CD20cy，0.3h，应用免疫组织化学单染法进行检测，进行常规脱蜡入水处理，进行抗原修复后经PBS缓冲液清洗，清洗5min×3次。滴加一抗于37℃状态下孵育时间为60min，经PBS缓冲液清洗5min×3次，DAB显色共5min，后经流水清洗处理。应用苏木精染色共60min，后完成常规脱水后进行封片。（2）应用免疫组织化学双染法对BLEL及淋巴上皮恶性病变检测，LEC病例双染所应用的抗体为Ki-67和 AE1/AE3，应用Ki-67 和 CD20cy进行MALT淋巴瘤病例双染，以抗体阳性显示的具体位置信息，选用对应的滴加顺序，完成显色剂的显色作用，首先为 Ki-67 （DAB 显色）随后AE1/AE3、CD20cy （AEC 显色），应用EnvisionTM二步法完成DAB 显色，应用PBS 缓冲液进行清洗，在完成一抗滴加后在37℃状态下孵育时间为60min，经PBS缓冲液清洗5min×3次，随后滴加HPR复合物二抗，在37℃状态下孵育时间为60min，经PBS缓冲液清洗后完成AEC显色反应，随后应用苏木精染色共60min，后完成常规脱水后进行封片。

1.3统计学方法

此次研究中，所应用的统计学分析软件为SPSS18.0，其中计量资料以标准差形式表示，通过t进行组间验证，计数资料以n（%）形式表示，通过卡方进行组间验证，若存在显著的统计学差异，则显示为P<0.05。

2 结果

2.1 免疫组织化学单染技术化学检测结果

单染结果显示，Ki-67定位区域为细胞核、AE1/AE3定位区域为上皮细胞细胞质位置，CD20cy定位区域为B淋巴细胞的细胞膜位置，不同抗体的阳性检测率及染色对比度优良。

2.2 免疫组织化学双染技术化学检测结果

双染结果显示Ki-67 （DAB 显色）随后AE1/AE3、CD20cy （AEC 显色），应用EnvisionTM二步法完成DAB 显色，抗体的定位相对更为准确，有鲜明的颜色对比，相较于单染，其阳性比率及阳性染色强度无显著差异（P>0.05）。

3 讨论

应用免疫组织化学双染技术能够实现在相同组织切片中2种蛋白质的标记，在对较为复杂的病变细胞进行检测时，可以确定淋巴瘤的类型，从而对细胞群中特定的蛋白质表达状况进行分析，上皮细胞具有较强的增值活性，根据单纯形态学分析以及单染色途径无法完成准确判断^[3]，而免疫组织化学双染色方法通过一抗滴加顺序的改变，分别滴加细胞核抗体、细胞质抗体、细胞膜抗体，蛋白表达更准确，此次研究中单染结果显示Ki-67定位区域为细胞核、AE1/AE3定位区域为上皮细胞细胞质位置，CD20cy定位区域为B淋巴细胞的细胞膜位置，不同抗体的阳性检测率及染色对比度优良。双染色顺序为 Ki-67 （DAB 显色）随后AE1/AE3、CD20cy （AEC 显色），应用EnvisionTM二步法完成DAB 显色，抗体的定位相对更为准确，有鲜明的颜色对比，相较于单染，其阳性比率及阳性染色强度无显著差异（P>0.05）。综上所述，通过免疫组织双染技术能够提供辅助诊断的有效途径，在细胞群蛋白表达中提供更具价值的信息。

参考文献

[1] 顾挺，胡宇华，夏荣辉， 等.免疫组织化学双染技术在唾液腺淋巴上皮性病变中的应用评价[J].中国口腔颌面外科杂志，2019，17（3）：216-220.

[2] 刘奕，周昊，费伟.CD20在口腔潜在恶性病变中的表达及其临床意义[J].国际口腔医学杂志，2018，45（2）：135-139.

[3] 江悦，宋国新，张炜明， 等.两种免疫组织化学平台和抗体检测PD？L1表达的一致性分析[J].中华病理学杂志，2019，48（11）：867-872.