两种鲤血液生理生化及部分免疫指标的比较分析

潘正坤 ，孙迪 ，左至恒 ，何天庆 ，陈嗣建 ，李启标 ，卓孝磊 ，梁钧然 ，邹记兴 ，周爱国 ，

（1.华南农业大学海洋学院，广东 广州 510642；2.连山壮族瑶族自治县农业科学研究所（示范农场）；广东 连山 513200；3.清远市农业科技推广服务中心，广东 清远 511510；4.碧波农业发展有限公司，广东 肇庆 526000）

禾花鲤属鲤科温水性小型鱼类，原产于广西桂林，是中国特有的鲤科鱼类，因以稻田禾花为食而得名。禾花鲤活动能力较弱，故而能在稻田小水体中养殖。近年来，由于其鲜香味美、生态健康的特点，深受消费者欢迎，成为鲤科鱼类中新兴热门养殖品种。稻田养殖禾花鲤，充分提高了资源利用效率，水稻为禾花鲤提供了食物，禾花鲤排泄物也为水稻生长提供了营养元素，加速了物质循环，提高了农田综合利用率。禾花鲤养殖周期短，市场价格高，经济效益可观，全国多地已在推广稻田养殖禾花鲤。麦溪鲤原产地肇庆高要区，养殖水源为优质的西江水，麦溪鲤生性活跃，游泳迅速，喜欢逆水而上，养出的鱼肉质肥嫩，甘香可口。麦溪鲤因其高品质深受市场青睐，是肇庆的畅销特产。2012年，麦溪鲤荣获国家地理标志产品保护。

鱼类的血液生理生化及免疫指标可以反映鱼体自身抗病力，相关物质的含量和活性可以在很大程度上衡量判断养殖鱼类的免疫能力，是鱼类免疫能力的物质基础。研究不同养殖条件下的鲤鱼血液生理生化及免疫指标，可以综合评价不同养殖模式下鲤品种的免疫能力，以期为高效养殖模式的探索提供一定的理论依据。该试验，选取清远连山稻田养殖禾花鲤品种和肇庆的池塘养殖麦溪鲤品种，测定其血液生理生化及免疫指标，分析两个鲤品种的免疫特性，为禾花鲤和麦溪鲤的健康养殖提供一定的理论依据。

1 材料和方法

1.1 试验材料

禾花鲤采集于清远连山壮族瑶族自治县示范农场稻田养鱼示范基地（30～50 g），麦溪鲤采集于肇庆碧波农业发展有限公司的池塘养殖品种（80～100 g）。饲养于水产养殖系实验室水族箱，暂养一周。每组设3个平行，每个平行放养10尾鱼，水族箱规格：1 m×1 m×0.8 m。采样前禁食24 h，再进行样品采集。

1.2 样本和数据采集

从每个水族箱随机捕捞5尾鱼，称重。用注射器从尾部抽取静脉血，注入1.5 mL离心管，一部分用EDTA-二钾抗凝，收集到离心管中用于生理指标的测定。另一部分以肝素钠抗凝的鱼血，静置4 h后，4 000 r/min离心8 min，收集上清液用于免疫和生化指标的测定。

1.3 血清生理生化指标测定

参照徐革锋等的方法[1]，使用全自动血细胞分析仪（型号为 Cell-Dum3700，购自美国 Abbott Laboratories公司），测定16项生理指标；参照张永泉等的方法[2]，使用全自动生化分析仪（型号为BS-200，购自深圳迈瑞公司），测定23种血液生化指标。用南京建成试剂盒测两种鲤鱼血清的超氧化物歧化酶、微量丙二醛、溶菌酶、酸性磷酸酶、谷胱甘肽过氧化物酶这五个免疫酶指标。

1.4 数据处理与统计分析方法

以“平均值±标准误”表示试验结果。应用SPSS 24.0软件进行生物学统计分析，通过独立样本的t检验区分各生理生化指标差异的统计学意义。当P＞0.05表示没有统计学意义性差异；0.01＜P＜0.05表示存在统计学意义性差异；P＜0.01表示存在极具统计学意义性差异。

表1 禾花鲤、麦溪鲤血液生理指标比较

2 结果与分析

2.1 两种鲤鱼生理生化指标的对比分析

由检测结果可知，禾花鲤血液中的淋巴细胞百分比、嗜酸性粒细胞百分比、红细胞计数、血红蛋白、平均红细胞血红蛋白含量、平均红细胞血红蛋白浓度分别为（26.3±3.36）%、（0.17±0.07）%、（1.14±0.24）1012/L、（89.3 ±8.17）g/L、（82.67 ±10.72）/pg 和（498±44.16）/%，显著低于麦溪鲤（P＜0.05）。禾花鲤血液中的中性粒细胞百分比、白细胞计数分别为（71.57±4.22）%、（69.7±22.98）1012/L，高于麦溪鲤，但不显著（P＞0.05）。禾花鲤血液中的单核细胞百分比、红细胞压积、血小板计数分别为（1.4±0.7）%、（17.63±3.77）%、（49.33±12.33）1012/L，低于麦溪鲤，但不显著（P＞0.05）。两种鱼血液中的其他生理指标相差较小，差异不明显。

由检测结果可知，禾花鲤的血清总蛋白、血清白蛋白、球蛋白分别为（30.2±0.81）g/L、（10.77±0.44）g/L、（19.43±1.12）g/L，显著高于麦溪鲤（P＜0.05）。禾花鲤的血清丙氨酸氨基转移酶、血清天门冬氨酸氨基转移酶、肌酐分别为（385.3±49.93）IU/L、（725.33±21.14）IU/L、（29.33±5.17）μmol/L，极显著高于麦溪鲤（P＜0.01）。禾花鲤和麦溪鲤血液中的血钾、血钠、血氯、血总钙、血糖相比差异不具统计学意义（P＞0.05）。

表2 禾花鲤、麦溪鲤血液生化指标比较

2.2 免疫指标的对比分析

2.2.1 两种鲤鱼血清的超氧化物歧化酶（SOD酶）活性比较 由图1可知，禾花鲤血清中SOD酶活性为（175±2.89）U/mL，略低于麦溪鲤（182.7±1.67）U/ml，但差异不具统计学意义（P＞0.05）说明两种鲤鱼之间SOD酶活性没有显著差异。

2.2.2 两种鲤鱼血清的丙二醛（MDA酶）含量比较由图2可知，禾花鲤血清中微量丙二醛的含量为（5.09±0.22）nmol/mL，显著高于麦溪鲤血清中微量丙二醛的含量（2.66±0.30）nmol/mL（P＜0.05）。说明两种鲤鱼血清中的丙二醛降解酶活性存在差异，且麦溪鲤的丙二醛酶活性强于禾花鲤。

2.2.3 两种鲤鱼血清的溶菌酶（LZM）活性比较 由图3可知，禾花鲤血清中溶菌酶的活性为（221.7±11.3）U/mL，极显著低于麦溪鲤血清中溶菌酶的活性（524.3±23.1）U/mL（P＜0.01）。说明麦溪鲤的血清溶菌酶活性极显著强于禾花鲤。

2.2.4 两种鲤鱼血清的酸性磷酸酶（ACP）活性比较由图4可知，禾花鲤血清中酸性磷酸酶活性为（3.58±0.173）U/mL，麦溪鲤血清中酸性磷酸酶活性为（3.56±0.127）U/mL，差异不具统计学意义（P＞0.05）说明两种鲤鱼之间超氧化物歧化酶活性没有统计学意义差异。

2.2.5 两种鲤鱼谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性比较 由图5可知，禾花鲤血清中谷胱甘肽过氧化物酶的活性为（106.7±5.2）U/mL，显著低于麦溪鲤血清中谷胱甘肽过氧化物酶活性（140.4±3.1）U/mL（P＜0.05）。说明麦溪鲤的血清谷胱甘肽过氧化物酶活性明显强于禾花鲤。

3 讨论

3.1 两个鲤品种血液生理生化指标的差异分析

研究表明，鱼类血液的多项指标与其活动能力及食性密切相关，正常情况下，活动能力强的鱼类高于活动能力弱的鱼类[3]。该研究中，禾花鲤与麦溪鲤血液生理特点与其活动特性也表现出了上述规律。由表1中两个鲤鱼品种血液生理指标可知，禾花鲤血液中的淋巴细胞百分比、嗜酸性粒细胞百分比、红细胞计数、血红蛋白、平均红细胞血红蛋白含量、平均红细胞血红蛋白浓度，显著低于麦溪鲤（P＜0.05）。红细胞能够运输氧气及二氧化碳和调节机体免疫功能。一般情况下，鱼类血液中的血红蛋白数量与鱼类耐低氧能力和水环境中的含氧量有关[4]。由表1可知，禾花鲤血液中的红细胞数和平均红细胞血红蛋白含量都显著低于麦溪鲤，说明禾花鲤的耐低氧能力弱于麦溪鲤。鱼类白细胞承担鱼类机体特异性免疫和非特异性免疫的主要机能，白细胞的数量变化情况可以作为机体免疫指标[5-6]。由表1可知，禾花鲤血液中的嗜酸性粒细胞、淋巴细胞百分比显著低于麦溪鲤。根据试验结果分析，禾花鲤的耐低氧能力和凝血能力弱于麦溪鲤，与根据红细胞数分析得出的禾花鲤的耐低氧能力弱于麦溪鲤的结论一致。鱼类机体的营养和代谢情况可以在血液中的相关指反映出来。由表2中两个鲤鱼品种血液生化指标可知，禾花鲤的血清总蛋白、血清白蛋白、球蛋白显著高于麦溪鲤，说明禾花鲤的吸收与代谢水平高于麦溪鲤。

丙氨酸氨基转移酶与天门冬氨酸氨基转移酶是重要的转移酶，酶活性与肝细胞健康程度成反比。由表2可知，禾花鲤的两种转移酶活性均极显著高于麦溪鲤，表明麦溪鲤肝脏比麦溪鲤更加健康。血清肌酐的浓度与肾小球滤过能力成反比，由表2可知，禾花鲤的肌酐浓度极显著高于麦溪鲤，表明麦溪鲤肾小球的滤过能力比禾花鲤更强。

根据对两个鲤品种血液生理指标的分析，得出结论禾花鲤的耐低氧能力和凝血能力弱于麦溪鲤。正常情况下，活动能力强的鱼类耐低氧能力高于活动能力弱的鱼类，研究结果与实际情况相符合。所以，在禾花鲤养殖中要注意保证水中的溶氧量，必要时采取人工增氧措施。在活鱼运输过程中要特别注意增氧，避免禾花鲤因缺氧死亡而造成损失。禾花鲤的血清总蛋白、血清白蛋白、球蛋白、丙氨酸氨基转移酶、血清天门冬氨酸氨基转移酶、肌酐显著高于麦溪鲤，表明禾花鲤的蛋白质吸收与代谢水平高于麦溪鲤，但麦溪鲤的肝脏和肾脏的解毒、滤过能力强于麦溪鲤。肝胆综合征已成为困扰水产业的一个流行病症，在禾花鲤的池塘养殖中，一方面要合理投喂、保持水质，另一方面可在饲料中加入维生素或中药制品，进行禾花鲤的保肝护肝。

3.2 两个鲤品种血清免疫指标的差异分析

在测定的两个鲤品种 5个血液免疫指标中，麦溪鲤血液中的丙二醛酶（MDA）、溶菌酶（LZM）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）均显著强于禾花鲤（P＜0.05）。鱼类的免疫能力以非特异性免疫为主，以上五种酶类在一定程度上代表了两个鲤品种的抗氧化性能，可以作为分析不同鲤鱼品种免疫能力的依据。丙二醛是生物体内发生过氧化反应的终产物，可引起蛋白质、核酸等生物大分子的交联聚合，具有细胞毒性[7]。其能经血液被运送到肝脏中，在肝脏中分解代谢，过多会导致代谢异常，损伤肝脏，进而影响机体的正常代谢。试验结果显示麦溪鲤血液中丙二醛的浓度显著低于禾花鲤，表明其肝脏中分解丙二醛相关酶的活性强于禾花鲤，代谢丙二醛能力更强。溶菌酶可与病毒蛋白直接结合，与核酸、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。实验结果显示麦溪鲤血液中溶菌酶的活性显著高于禾花鲤，表明其水解病菌的能力强于禾花鲤，更能抵御水体中的细菌、病毒。谷胱甘肽过氧化物酶可以起到保护细胞、维持机体正常生理功能的作用[8]。其含量的变化可以间接反映环境中有毒污染物质的存在，在污染物的存在下，谷胱甘肽过氧化物酶含量可能会发生增加或者抑制[9]。试验结果显示麦溪鲤血液中谷胱甘肽过氧化物酶的活性显著高于禾花鲤，表明其抵御环境中有毒有害物质和抗氧化能力强于禾花鲤。

综合试验结果，可以发现，所测定的五项免疫指标中，麦溪鲤有三项显著高于禾花鲤，其余二项差异不显著，可以确定麦溪鲤的综合免疫能力强于禾花鲤。该试验的禾花鲤品种采集自清远连山，麦溪鲤品种采集自肇庆。禾花鲤的养殖模式为稻田养殖，相比麦溪鲤的池塘养殖，稻田水体小，水体环境日变化较大，故在养殖过程中应加强巡田、定期观测水质、适时调节水深。由于禾花鲤市场价格较高，已有地区探索进行池塘养殖，养殖标准经常是参考普通鲤鱼品种的池塘养殖方法，采用高密度、高投入、高产出的养殖模式，但根据该试验的测定结果，禾花鲤的免疫能力较普通鲤鱼品种较弱。所以，在禾花鲤的养殖过程中，适当减少养殖密度，加强水质调控，投喂优质饵料，不可为追求高收益而盲目进行高密度养殖。

综上分析，禾花鲤的免疫能力、耐低氧能力和肝脏、肾脏的解毒能力均在一定程度上弱于麦溪鲤。可以认为禾花鲤的养殖难度大于麦溪鲤，对养殖条件要求较高，这可能是禾花鲤市场价远远高于麦溪鲤的原因之一。在养殖禾花鲤的过程中，应当考虑到禾花鲤的上述特性，做好水环境调控、增氧、保肝护肝等工作。该试验得出的结论与实际情况较为符合，可以在一定程度上作为禾花鲤和麦溪鲤养殖参考。若要更深入禾花鲤与麦溪鲤的免疫与生理生化特性，可采集不同养殖模式中的禾花鲤或麦溪鲤做进一步检测，以便为两个鲤品种的健康养殖提供科学依据。