冻融胚胎移植术后第9和11天β-HCG水平对单胎妊娠临床结局的预测价值

邱佩嫦，陈彩蓉，陈润强，况玉兰，赵晓英，蓝永乐，王秋香

[广州医科大学附属第六医院（清远市人民医院）1.生殖中心，2.检验中心， 广东 清远 511518]

目前国内多采用胚胎移植术后12～14 d测定血清β-人绒毛膜促性腺激素（beta-human chorionic gonadotropin, β-HCG）的方法来预测体外受精-胚胎移植术（in vitro fertilization and embryo transfer, IVFET）的妊娠结局[1-7]。可是对最早能在什么时候进行检测才能准确判断IVF-ET的各种妊娠结局尚无定论。笔者前期研究提示新鲜胚胎移植和冻融胚胎移植（frozen-thawed embryo transfer, FET）术后第9和11天检测血清β-HCG可以准确地判断患者是否妊娠[8]。本文在此基础上探索FET术后第9和11天的血清β-HCG水平是否对单胎妊娠患者的妊娠结局具有预测价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年12月—2018年8月广州医科大学附属第六医院生殖中心FET术后7周经过阴道彩超确诊为单孕囊着床的342例患者的临床资料，分析FET术后第9和11天血清β-HCG水平，根据不同妊娠结局将患者分为异位妊娠组、早期流产组和活产组，分别有22、74和246例。患者均移植2个卵裂期胚胎（受精后72 h）。排除标准：①采用注射用绒促性素进行黄体支持者；②≥2个孕囊着床者（包括宫内、宫外及宫内外同时妊娠）；③孕12～27+6周妊娠流产或者畸形引产者；④资料缺失或者妊娠后失访。患者均签署知情同意书，本研究获得医院伦理委员会批准实施。本研究最终共纳入342个FET周期。

1.2 方法

胚胎冷冻及解冻试剂、冷冻载体均购自日本Kitazato公司，胚胎冷冻及解冻步骤按试剂说明书要求操作。按本中心常规方案进行内膜准备（自然周期和雌激素替代方案），排卵后或激素转换后第3天进行胚胎解冻移植[8]。

1.3 观察指标

患者均在施行FET后第9和11天复诊，并于清晨空腹抽取静脉血3 ml，3 500 r/min离心10 min，获得血清，采用Cobas e602电化学发光免疫分析仪（美国罗氏公司）通过电化学发光法测定血清β-HCG水平，试剂盒由瑞士罗氏公司提供，采用罗氏公司的Elecsys HCG+βCalSet定标液定标，检测范围为0.100～10 000 IU/L。

1.4 妊娠结局判定

异位妊娠组：B超或手术病理证实孕囊位于子宫腔以外部位的患者；早期流产组：经B超证实子宫腔内有单个孕囊但在妊娠7周以后行B超检查仍未探及胎儿心管搏动，或虽然在妊娠7周B超探及胎儿心管搏动，但在妊娠12周内发生胎心搏动消失或者发生流产（腹痛、阴道流血、宫口扩张及胎儿娩出）的患者；活产组：单胎妊娠≥28周活胎分娩者。

1.5 统计学方法

数据分析采用SPSS 20.0统计软件。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较用单因素方差分析或非参数检验；计数资料以率表示，比较用χ2或Fisher概率确切法；绘制ROC曲线计算β-HCG的最大敏感性和特异性的最佳阈值，并以此来预测妊娠结局，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组一般资料比较

各组女性年龄、男性年龄、BMI、不孕年限、移植日内膜、受精方式及不孕因素比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1、2。

2.2 各组患者第9和11天β-HCG比较

异位妊娠组、早期流产组和活产组在FET后第9天 血 清β-HCG值 分 别 为（12.23±12.49）、（50.09±43.45）和（59.74±35.11）IU/L，经Kruskal-WallisH检验，差异有统计学意义（H=51.168，P=0.000），各组进一步的两两比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表1 各组一般资料比较 （±s）

表1 各组一般资料比较 （±s）

组别 n 女性年龄/岁 男性年龄/岁 BMI/（kg/m²） 不孕年限 移植日内膜/mm异位妊娠组 22 31.82±5.039 33.18±5.324 21.73±2.676 3.86±3.013 9.93±1.775早期流产组 74 32.54±5.565 34.38±5.519 21.76±3.157 4.34±3.605 10.54±2.228活产组 246 31.99±4.863 34.46±5.931 21.47±2.553 3.96±2.997 10.84±2.048 F值 0.375 0.468 0.378 0.441 2.255 P值 0.688 0.615 0.685 0.644 0.106

表2 冻融胚胎移植周期单胎妊娠患者的助孕方式和不孕因素 例（%）

异位妊娠组、早期流产组和活产组第11天血清β-HCG值分别为（42.18±39.04）、（141.77±118.97）、（176.59±108.37）IU/L，经Kruskal-WallisH检验，差异有统计学意义（H=48.110，P=0.000），各组进一步的两两比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.3 ROC曲线预测冻融胚胎移植周期单胎妊娠的不同结局

图1 β-HCG预测冻融胚胎移植单胎妊娠周期宫内妊娠或异位妊娠的ROC曲线

在FET周期中，移植后第9天预测宫内妊娠/异位妊娠的β-HCG最佳阈值为27.5 IU/L（AUC为0.913，敏感性为81.9%，特异性为90.9%）。预测活产/非活产的β-HCG的最佳阈值为32.50 IU/L（AUC为0.690，敏感性为82.3%，特异性为55.2%）；移植后第11天预测宫内妊娠/异位妊娠的β-HCG最佳阈值为77.50 IU/L （AUC为0.892，敏感性为80.6%，特异性为86.4%），预测活产/非活产的β-HCG的最佳阈值为119.0 IU/L （AUC为0.691，敏感性为70.7%，特异性为65.6%）。见图1、2和表3。

图2 β-HCG预测冻融胚胎移植单胎妊娠周期早期活产或非活产的ROC曲线

表3 冻融胚胎移植单胎妊娠周期中第9和11天血清β-HCG值的预测价值

3 讨论

人绒毛膜促性腺激素由绒毛滋养细胞产生,有文献报道，在受精后6～8 d就可以在母亲体内测出，而胚胎移植术后早期血清β-HCG具有预测体外受精患者妊娠结局的作用[9-11]。但是，由于检测方法敏感性不同，胚胎种植的延迟等多种原因，胚胎移植术后测定血清β-HCG值来准确预测体外受精治疗结局的时间点尚未明确。

本研究结果显示，在FET周期单胎妊娠患者中，异位妊娠组、早期流产组和单胎活产组在移植后第9、11天血清β-HCG均值比较有差异，异位妊娠组低于早期流产组，早期流产组低于活产组，与之前报道的结论一致[10-11]。在FET周期中，胚胎移植术后第9天预测宫内妊娠/异位妊娠的血清β-HCG的界值为27.5 IU/L，AUC为0.913，敏感性0.819，特异性0.909。第11天预测宫内妊娠/异位妊娠的β-HCG的界值是77.5 IU/L，AUC为0.892，敏感性0.806，特异性0.864。提示在FET周期中，第9天血清β-HCG值对FET宫内妊娠/异位妊娠具有高度预测价值，第11天血清β-HCG值对FET宫内妊娠/异位妊娠具有中度预测价值，这个结论与SUNG等[12]基本一致。

本研究结果显示第9、11天血清β-HCG值对FET周期活产有预测价值，但预测价值不高，可能与早期流产组和活产组患者血清β-HCG值的波动范围有一定程度上的重叠有关，有待纳入更多研究样本后进一步验证。由于本研究采用回顾性分析，尽管已经严格制定研究对象的纳入标准以及排除标准，仍然不可避免地会产生偏倚，因此，下一步会考虑采取前瞻性研究，进一步验证研究的结论。此外，由于研究对象来自于单个生殖中心的资料，样本量偏少，下一步可考虑收集多中心数据，进一步扩大研究样本量，以期能获得更加确切的研究结论。

在临床，影响滋养细胞分泌β-HCG的因素有很多，诸如不同的种族、移植不同时期的胚胎、不同的胚胎培养系统以及胚胎冷冻方式等[13]。TSAMPALAS等[14]则认为，高级别的滋养层细胞分泌HCG时间更早，分泌量更多，这必然会影响到血清β-HCG的浓度。也就是说，评分高的胚胎进行移植后获得妊娠，其滋养细胞分泌的β-HCG似乎会较评分低的胚胎高。这将是笔者下一步的研究方向。

综上所述，本文旨在探讨在FET过程中胚胎移植术后第9和11天血清β-HCG水平对不同妊娠结局的临床预测价值。FET术后第9和11天测定血清β-HCG水平可以准确预测冻融胚胎移植单胎妊娠患者宫内妊娠/异位妊娠，对单胎活产具有一定的预测价值，值得推广。