一种闽产青红酒粗多糖和总黄酮的测定

周美兰 许景 阚永军

【摘 要】 目的：采用分光光度法，测定一种闽产青红酒中粗多糖和总黄酮含量。方法：采用醇沉法，分离酒中粗多糖，以无水D-葡萄糖为对照品，采用苯酚-硫酸法检测粗多糖含量;以芦丁为对照品，在360nm波长下测定吸光度，计算总黄酮含量。结果：测定葡萄糖范围3.86～12.87μg/mL，回归方程为y=53.32x-0.021，r=0.9984;测定芦丁线性范围7.56～22.68μg/mL，回归方程为y=0.034x-0.022，r=0.9993。结论：通过测定青红酒中粗多糖和总黄酮含量，有利于对产品配方及工艺进行质量控制。

【关键词】 青红酒;分光光度法;粗多糖;总黄酮

【中图分类号】R283   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2020）1-0035-04

Abstract：objective The contents of crude polysaccharide and total flavonoids in a kind of Green Red Wine produced in Fujian Province were determined by spectrophotometry.Methods Crude polysaccharides from wine were separated by alcohol precipitation method， and anhydrous D-glucose was used as control. Rutin was used as control; the content of total flavonoids in Green Red Wine was determined by colorimetry method. Results Glucose was determined in a linear range of 3.86～12.87μg/mL，the regression equation was y= 53.32x-0.021with the correlation coefficent of 0.9984.Rutin was determined in a linear range of 7.56～22.68μg/mL， the regression equation was y= 0.034x-0.022 with a correlation coefficent of 0.9993. Conclusion The determination of crude polysaccharide and total flavonoids in Green Red Wine is beneficial to the quality control of product formulation and process.

Keywords：Green Red Wine;Spectrophotometry Method;Crude Polysaccharide;Total Flavonoids

青紅酒，是以福建独有的古田红曲做为糖化发酵剂，选用上好的糯米，配以秘制药白曲，精酿而成，色呈琥珀，口感柔顺绵长。青红酒，被誉为闽派黄酒的正宗，含有丰富的葡萄糖、糊精、氨基酸、维生素和多种酯类物组成;酒精度为13%左右，刺激性小，适量常饮，有促进食欲、舒筋活络、生津补血、调养身体、解除疲乏的功效，是一种老少皆宜的饮用酒。

立足于福建红曲和道地药材综合利用，以中华老字号企业的百年酿造经验，采用闭合式生产模式。以黄精等药食同源中药为原料，选用道地多花黄精，有机圆糯米及古田红曲、秘制药白曲，由国家级高级酿酒师、中医药专家组成的团队精心配方研制。在保留传统酿造工艺基础上，优化本产品工艺，萃取原料之精华发酵而成。酒色橙黄清亮，酒味醇厚，香气雅致，口感柔和甘甜，酒与黄精完美融合，有补气养阴、健脾、润肺，益肾之功效。产品上市获得消费者赞誉。青红酒样品图片见图1。

糖类是黄精化学组成中含量最多的重要活性部分，黄精多糖含量最大，约占11.74%;黄酮具有较高的药用价值，并且为黄精属植物的活性成分之一[1]。多糖是一类非特异性免疫增强剂，而且有降血糖、降血脂、降血清过氧化脂质和降低胆固醇浓度、抗血凝等作用[2-4];黄酮具有消除疲劳、降血脂、降血糖、保护血管、防动脉粥样硬化、扩张毛细血管、抗衰老和抗菌作用、活化大脑细胞和其他脏器细胞的功能等多种功效[5]。

本文采用醇沉提取酒中多糖、以D-葡萄糖为对照品，苯酚一硫酸显色，490nm波长处测定黄精青红酒中粗多糖含量[6];采用聚酰胺层析法提取酒中黄酮[7]，以芦丁为对照品，360nm波长下测定吸光度，计算总黄酮含量。为产品配方及工艺的质量控制奠定基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器 紫外分光光度计（上海美谱达仪器有限公司，型号：UV-3200）;水浴锅（上海精宏实验设备有限公司，型号：DK420S）;离心机（湖南液仪实验室YI仪器开发有限公司，型号：L-530低速离心机）;电子天平（梅特勒-特利多，型号：AE240S）

1.2 材料与试剂 无水乙醇（西陇化工有限公司，批号16010902）;苯酚（国药，20150716）;D-无水葡萄糖（成都曼思特生物科技有限公司，MUST-11020603）。聚酰胺粉（国药集团化学试剂有限公司，批号20150924，规格：100-200目500g）;芦丁（成都曼思特生物科技有限公司，规格：对照品 A0103-20mg）;乙醇（西陇化工有限公司，批号16010902，规格：AR500mL）;甲醇（国药集团化学试剂有限公司，批号20150824，规格：AR5L）;苯（西陇化工有限公司，批号1601131，规格：AR500mL）。

供试品：1号黄精青红酒，将黄精浸泡于青红酒中;2号黄精青红酒，将黄精与红曲米一起投料发酵。同一工艺，同一批次取3个样品。

2 方法与结果

2.1 供试品中粗多糖测定

2.1.1 试剂 配制取无水葡萄糖对照品2.57mg于25mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，得浓度为0.103mg/mL的对照品溶液。取苯酚2.50g加50ml纯水溶解即得5%的苯酚溶液。

2.1.2 吸收曲线的绘制 对浓度10μg/mL葡萄糖对照品溶液，在200-800nm波长范围进行全波长扫描。以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标作图，绘制出曲线，此曲线即为葡萄糖的吸收光谱曲线。葡萄糖最大吸收波长为490nm，如图2所示。

2.1.3 标准曲线的绘制 精密量取对照品溶液0.3mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，分別置15mL具塞试管中，各加水补至2.0mL，精密加入5%苯酚溶液l.0mL，摇匀，再精密加浓硫酸5.0mL，摇匀，置沸水浴中加热2min，取出，流水冷却到室温，以相应试剂为空白，采用紫外-可见分光光度法，在490nm的波长处测定吸光度，结果见表1。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为y=53.32x-0.021，r=0.9984。

2.1.4 黄精青红酒中粗多糖测定 取10mL受试样品加无水乙醇35ml，置于4℃冰箱中静置4h，离心（4000r/ 10min），倒去上清液，收集沉淀，加纯水5mL溶解，加无水乙醇20mL，反复溶解沉淀3次。收集沉淀，将沉淀用水溶于200mL容量瓶中，摇匀，即得供试溶液。

精密量取黄精青红酒供试溶液0.5mL，加水补至2mL，置于具塞试管中，按标准曲线的制备项下的方法，自“2.1.1项下，精密加入5%苯酚试液1.0mL”起，依照测定吸光度，以葡萄糖标准曲线计算试样中总多糖的含量。结果见表2。

2.2 供试品中总黄酮测定

2.2.1 对照品溶液配制 称取2.52mg芦丁，加甲醇溶解并定容至50mL，即得50.4μg/mL的芦丁标准溶液。

2.2.2 吸收曲线的绘制 对浓度10μg/mL芦丁对照品溶液，在200～800nm波长范围进行全波长扫描。以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，绘制出曲线，此曲线即为芦丁的吸收光谱曲线。芦丁在紫外光区最大吸收波长为360nm，如图3所示。

2.2.3 标准曲线的绘制 吸取0、1.5、2.0、3.0、4.0、4.5mL芦丁标准溶液于10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，于360nm测定吸光度值，见表3。以浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为：y= 0.0328x+ 0.0171，r=0.9983。

2.2.4 黄精青红酒中总黄酮测定量取试样50mL各3份，置于蒸发皿中70℃浓缩至约10mL，转移至25mL容量瓶，加无水乙醇定容至刻度，摇匀后，超声提取20min，离心（4000r/min，10min），吸取上清液2.0mL，于蒸发皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱（1cm×25cm）。先用20mL苯洗，弃去苯液，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25mL。取上述溶液离心，于波长360nm测定吸光度值。依照测定吸光度，以芦丁标准曲线计算试样中总黄酮的含量。结果见表4。

3 讨论

由表3可以看出，两种不同工艺制备的黄精青红酒，1号供试品浸泡黄精酒每100mL粗多糖平均含量为14.89mg，2号供试品发酵黄精酒每100mL粗多糖平均含量为76.28mg，是1号样品的5.1倍;由表4可以看出，1号供试品浸泡黄精酒每100mL总黄酮平均含量为16.28mg，2号供试品发酵黄精酒每100mL总黄酮平均含量为72.16mg，是1号样品的4.4倍。

发酵黄精酒中的多糖和黄酮均高于浸泡黄精酒，同时发酵黄精酒的口感和色泽均优于浸泡黄精酒。因此无论是从功效成分，还是从外观和味道，发酵黄精酒工艺均优于浸泡黄精酒工艺。

4 结论

本文采用醇沉法提取多糖简单易行，聚酰胺柱层析法已广泛用于黄酮类成分分离纯化，以提高提取物黄酮成分的含量;两种提取分离方法的应用，可避免酒干扰色对测定的影响。通过测定青红酒中粗多糖和总黄酮等功效成分含量，有利于对产品配方及工艺进行质量控制。

参考文献

[1]李小沛，张亚玉，赵立春，等. 黄精的化学成分和药理作用研究进展[J]. 植物学研究， 2017， 6（5）： 255-261.

[2]杨明河， 于德泉. 黄精多糖和低聚糖的研究[J]. 药学通报， 1980（7）： 44-45.

[3]CHEN J L，PANG W S，SHI W T，et al. Structural elucidation of a novel polysaccharide from Pseudostellaria heterophylla and stimulating glucose uptake in cells and distributing in rats by oral[J]. Molecules， 2016， 21（9） ：1-18.

[4]CHEN J L，PANG W S，KANY J，et al. Structure of a pectic polysaccharide from Pseudostellaria heterophylla and stimulating insulin secretion of INS-1 cell and distributing in rats by oral[J]. International Journal of Biological Macromolecules，2018（106）：456-463.

[5]王文君， 向灿辉， 刘成红. 黄精总黄酮的提取与性质分析[J]. 食品工业， 2014， 35（10）： 259-261.

[6]白少伟， 徐媛， 庞文生， 等. 液态保健品中总多糖含量测定方法研究. 中国民族民间医药[J]， 2014， （7）：26.

[7]贝伟剑， 彭文烈， 罗杰. 柿叶黄酮的大孔吸附树脂分离提纯富集. 中成药[J]，2005，27（3）： 257-261.

（收稿日期：2019-10-15 编辑：刘斌）