新型隐球菌荚膜多糖对肺隐球菌病的诊断价值

卜丹霞，杨春超，黄云平，冼观秀

湛江中心人民医院，广东 湛江524054

肺隐球菌病（PCD）是由隐球菌属中新生隐球菌引起的一种肺部真菌感染，临床上主要以亚急性或慢性起病多见。该病起病隐匿，临床表现不典型，也缺乏简单有效的诊断手段，常被误诊为肺癌或其他肺部疾病［1］。隐球菌进入人体后菌体外周荚膜明显增厚，而荚膜为隐球菌主要致病物质，与菌体的繁殖、定植密切相关，且具有抗原性［2］。血清乳胶凝集试验（LAT）隐球菌荚膜多糖抗原的常用检测方法，具有操作简单、快速等特点，且对肺部隐球菌感染诊断敏感性和特异性均较高［3］。本研究针对疑似PCD患者采用LAT检测新型隐球菌荚膜多糖，探讨新型隐球菌荚膜多糖检测对PCD的诊断价值，旨在为其临床应用提供可靠依据。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月—2018年12月湛江中心人民医院收治的疑似PCD患者83例，其中男58例，女25例；年龄19～78岁，平均年龄（48.95±5.73）岁；所有患者年龄＞18岁，均自愿参加研究并签署知情同意书；排除人类免疫缺陷病毒（HIV）感染，器官移植史，严重心肺肝肾功能不全等疾病及临床资料不全者。

1.2 方法

83例患者入院后治疗前均行LAT、肺组织镜检及培养、肺组织病理检查。（1）LAT。患者取晨起空腹静脉血4 ml置于无菌无抗凝管中，1 000 r/min离心15 min后取上清液，置于-20℃冰箱内冰冻保存待检。试剂盒来源于美国Immuno-Mycologics公司，检测步骤严格按照试剂盒说明书进行。（2）肺组织镜检及培养。采用CT或B超引导下经皮肺穿刺活检。将取出部分肺穿组织标本注入培养皿内送检病原学培养，再抽取少量肺组织标本涂片后直接镜检和细胞学检查。（3）肺组织病理检查。肺穿刺活检中取少量组织应用4%甲醛液固定，石蜡包埋、组织切片后进行HE染色和特殊染色如抗酸染色、六胺银染色（GSM）、过碘酸雪夫染色（PSA）检查等。

1.3 诊断金标准

经肺组织病理活检或者组织培养出隐球菌结合特殊染色GSM、过PSA阳性及抗酸染色阴性确诊。

1.4 观察指标

（1）根据PCD诊断金标准，观察3种检测方法对PCD的检测结果；（2）根据PCD诊断金标准，3种检测方法对PCD的准确性、敏感性和特异性。

1.5 统计学方法

数据采用SPSS 17.0软件进行统计分析，计数资料采用例数和百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3种检测方法对肺隐球菌病的检测结果

根据PCD诊断金标准，83例患者诊断为PCD 26例（31.32%）。3种检测方法对肺隐球菌病的检测结果见表1、表2、表3。

表1 LAT对肺隐球菌病的检测结果 例

表2 肺组织培养对肺隐球菌病的检测结果 例

表3 肺组织病理检查对肺隐球菌病的检测结果 例

2.2 3种检测方法对PCD的准确性、敏感性和特异性比较

LAT对PCD的准确性、敏感性明显高于肺组织培养、肺组织病理检查，差异有统计学意义（P＜0.05）；3种检测方法对PCD的特异性均较高，但差异无统计学意义（P＞0.05），见表4。

表4 3种检测方法对PCD的准确性、敏感性和特异性 %

3 讨论

以往文献报道，PCD主要发生于免疫功能下降或存在免疫缺陷者［4］。随着近年来社会老龄化，心、肺、内分泌等系统常见慢性病发病率上升及免疫抑制剂、肿瘤化疗等药物的使用，使得PCD病例亦呈增多趋势［5］。该病表现为慢性隐匿起病，临床症状不典型，但病情严重时可侵犯中枢神经系统或引起呼吸衰竭导致死亡［6］。因此，早期、准确诊断对PCD患者的治疗及预后具有重要意义。

虽然当前临床检验技术不断提升，但免疫状态不同患者PCD临床特点、影像学及实验室检查等早期均无明显特异性，给早期诊断带来困扰，易发生漏诊、误诊，影响患者预后［7］。目前临床上主要靠肺组织病理活检或者经组织培养确诊PCD，因诊断主要是靠有创操作取得肺组织，具有一定风险性，在早期患者、耐受性差的老年患者及重症患者中开展受到限制［8］；同时组织真菌培养时间较长，可能混有其他定植菌的生长，导致隐球菌培养阳性率低等问题［9］，因此上述两种检测方式早期诊误率及漏诊率仍较高［10］。

新型隐球菌属于环境腐生菌，是一种机会性感染病原体，进入机体后菌体周围会形成一层厚厚的荚膜，后者具有辅助菌体逃逸巨噬细胞的吞噬作用［11］。因此，荚膜为隐球菌主要致病物质及具有抗原性［12］。LAT作为一种新兴的免疫检测方法，以标准大小的乳胶颗粒为载体吸附高效价的隐球菌荚膜多糖抗体，可对血液中隐球菌荚膜多糖抗原进行早期筛查诊断，因其具有操作简单、快速等特点，且阳性率及特异性均较高，近年来已作为隐球菌感染辅助诊断方法广泛应用于临床［13-14］。研究证实，隐球菌荚膜抗原检测不仅是一种高效、快速的PCD诊断方法，还可用于患者疗效的评价［15］。本研究针对疑似PCD患者在入院后治疗前均行LAT、肺组织培养、肺组织病理检查，发现LAT对PCD的准确性、敏感性明显高于肺组织培养、肺组织病理检查，3种检测方法对PCD的特异性均较高，但差异无统计学意义，表明相较于病灶组织培养和病理检查，LAT检测隐球菌荚膜抗原对诊断PCD具有更高的敏感性和准确性，可作为该病早期辅助诊断方法。但隐球菌荚膜抗原结果可受各种因素影响造成假阳性及假阴性［16］，本研究中亦发现假阳性及假阴性。临床试验发现，试剂因素、标本污染、其他病原体感染等可造成隐球菌荚膜抗原结果假阳性或假阴性，类风湿因子阳性可出现假阳性，感染早期、荚膜抗原浓度低、荚膜抗原浓度过高导致前带现象、感染菌株少造成分泌的可溶性抗原含量低等则可造成假阴性［17］。因此，隐球菌荚膜抗原检测目前只限于PCD的定性诊断，并未达到金标准诊断水平，需进行更多的大型临床研究来完善该检查的诊断价值。