高血压脑出血患者膜联蛋白A7、基质金属蛋白酶-9/基质金属蛋白酶抑制剂-1比值与早期脑损伤的相关性

孙秀媛 徐克芳 戴婧

(1青海省心脑血管病专科医院检验科,青海 西宁 810012;2上海新起点康复医院内科)

高血压脑出血是指在基础疾病高血压的基础上发生脑实质内出血，具有较高的致残率和致死率，严重威胁人们生命健康〔1〕。高血压脑出血由于血肿的占位性效应，同时伴有血液循环紊乱，导致脑组织缺血缺氧，引起继发性脑损伤，可遗留各种后遗症，严重者也可因重要神经中枢功能障碍而死亡〔2〕。膜联蛋白(ANX)是一个钙离子依赖的磷脂结合蛋白超家族，其生物学功能包括生物膜的形成、信号传导、离子通道建立、抗炎、调节细胞的迁移和凋亡等，ANXA7是ANX家族成员之一，目前研究主要表明其与肿瘤具有密切关系，而与心血管疾病的相关性研究甚少〔3〕。基质金属蛋白酶(MMP)-9是MMPs家族成员之一，其被激活后，可破坏血脑屏障的完整性而参与多种神经疾病病理过程〔4〕。组织基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-1是MMP-9内源性特异性抑制剂，可抑制MMP-9表达〔5〕。本研究旨在探讨高血压脑出血患者ANXA7、MMP-9/TIMP-1比值与早期脑损伤的相关性。

1 材料与方法

1.1一般资料 选取2015年8月至2018年1月青海省心脑血管病专科医院收治的高血压脑出血患者226例，设为高血压脑出血组。纳入标准：经头颅CT确诊脑出血；无既往脑出血史；发病至入院时间不超过6 h；本研究方案经医院医学伦理委员会批准，研究对象均知情同意。排除标准：脑肿瘤、脑外伤、脑血管畸形等引起的继发性脑出血；急慢性感染；血液系统疾病；恶性肿瘤；老年痴呆或阿尔茨海默症等认知功能障碍。在高血压脑出血组中，男119例，女107例，年龄65～88岁，平均(67.42±8.36)岁，出血部位：基底节102例，枕叶61例，颞叶38例，额叶25例；根据改良爱丁堡+斯堪的纳维亚脑卒中量表(MESS)对患者的神经功能缺损程度进行评分，分为：轻度(0～15分)49例，中度(16～30分)105例，重度(17～45分)72例；根据脑出血量分为：小量出血量组(30～45 ml)99例，中量出血量组(46～60 ml)84例，大量出血量组(>60 ml)43例；根据格拉斯哥预后评分(GOS)将出院患者分为：预后良好组(GOS 4～5分)149例，预后不良组(GOS 1～3分)77例。选取同期到青海省心脑血管病专科医院体检的健康人群100例作为对照组，男54例，女46例，年龄65～87岁，平均(68.02±8.13)岁。

1.2研究方法 (1)ANXA7、MMP-9/TIMP-1比较：采集所有对象清晨空腹静脉血3 ml，经3 000 r/min离心10 min，获得血清后置于-80℃冰箱保存待检；(2)MESS〔6〕得分0～45分，分数越高，神经功能损越严重。轻度为0～15分，中度为16～30分，重度为17～45分；(3)采用GOS评价患者的预后〔7〕：恢复良好为5分：有轻度缺陷，但可以正常生活；轻度残疾为4分：有残疾，但可以独立生活，可在保护下工作；重度残疾为3分：有残疾，日常生活都需照料；植物状态为2分：只有最小反应；死亡为1分。预后良好：GOS评分≥4分，预后不良：GOS评分<4分。

1.3统计学分析 采用SPSS19.0软件进行t检验、方差分析、q检验、Pearson相关分析及Logistic多元回归分析。

2 结 果

2.1两组ANXA7、MMP-9/TIMP-1的比较 高血压脑出血组ANXA7、MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1均显著低于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 两组ANXA7、MMP-9/TIMP-1的比较

与对照组比较：1)P<0.05

2.2高血压脑出血患者不同神经功能缺损ANXA7、MMP-9/TIMP-1比值的比较 随着高血压脑出血患者不同神经功能缺损程度的加重，ANXA7、MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1不断升高(P<0.05)。见表2。

表2 高血压脑出血患者不同神经功能缺损ANXA7、MMP-9/TIMP-1比值的比较

与轻度组比较：1)P<0.05；与中度组比较：2)P<0.05

2.3高血压脑出血患者不同出血量ANXA7、MMP-9/TIMP-1比值的比较 随着高血压脑出血患者出血量的增加，ANXA7、MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1不断升高(P<0.05)。见表3。

表3 高血压脑出血患者不同出血量ANXA7、MMP-9/TIMP-1比值的比较

与小量出血组比较：1)P<0.05；与中量出血组比较：2)P<0.05

2.4高血压脑出血患者不同预后情况ANXA7、MMP-9/TIMP-1的比较 预后良好组ANXA7、MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1显著低于预后不良组(P<0.05)。见表4。

表4 高血压脑出血患者不同预后情况ANXA7、MMP-9/TIMP-1比值的比较

与预后不良组比较:1)P<0.05

2.5高血压脑出血患者入院时ANXA7、MMP-9/TIMP-1与各相关指标的相关性分析 经过Pearson相关性分析，ANXA7、MMP-9/TIMP-1与高血压脑出血患者MESS、出血量、GOS均呈正相关(P<0.05)。见表5。

表5 高血压脑出血患者入院时ANXA7、MMP-9/TIMP-1与各相关指标的相关性分析

2.6高血压脑出血患者脑损伤的Logistic回归分析 以MESS评分为因变量，以ANXA7(<30 μg/L=1,≥30 μg/L=1)、MMP-9/TIMP-1(<0.8=0,≥0.8=1)为自变量，经Logistic多元逐步回归分析，ANXA7、MMP-9/TIMP-1是高血压脑出血患者发生脑损伤的预警因素。见表6。

表6 高血压脑出血患者脑损伤的logistic回归分析

3 讨 论

高血压脑出血是临床常见病，脑出血引起的血肿可导致病灶中心神经细胞损伤，也会造成血肿周围的神经组织损伤；同时高血压脑出血还可破坏血脑屏障，血肿周围聚集大量炎症细胞，释放出的炎症因子扩大免疫炎症反应，引起继发性脑损伤〔8～10〕。

ANX也叫作钙磷脂结合蛋白，其成员主要以四具体的形式存在，有极高的同源性。ANXA7在脑组织中广泛表达，通过促进质膜融合，参与机体的分泌过程〔11，12〕。Gerelsaikhan等〔13〕研究表明，ANXA7与突出小体相关蛋白(SNAP)-23存在相互作用。SNAP-23主要表达于脑组织中，且分布于突出后膜，参与突触的融合及神经递质的释放，可以促进神经内分泌细胞的胞吐〔14〕。因此推测ANXA7可能是通过与SNAP-23作用，影响进神经内分泌细胞的胞吐过程。有研究表明〔15〕，发生脑出血继发性脑损伤后，ANXA7表达上升，且与SNAP-23/ SNAP-25的作用增多；通过hr ANXA7的干预，可以促进ANXA7与SNAP-23/SNAP-25的作用，提高谷氨酸水平，加剧脑损伤进程，而ANXA7抗体则具有相反的作用。

MMPs家族是一类肽键内切酶，可以降解细胞外基质，而细胞外基质可维持血脑屏障〔16〕。MMP-9可降解细胞外基质成分中的层黏连蛋白、纤维连接蛋白等，导致毛细血管通透性增加，使得血脑屏障破坏，导致血管源性水肿形成，由此参与脑出血后引起的继发性脑损伤〔17〕。Egashira等〔18〕研究表明，在蛛网膜下腔出血后引起的血脑屏障和脑白质损伤中，MMP-9起了很大作用。TIMP-1是MMP-9的抑制剂，可与其特异性结合，形成复合物，从而抑制MMP-9活性，对脑组织起到保护作用〔19〕。由上可知，TIMP-1/MMP-9动态平衡可以作为评估高血压脑出血后降低血肿进展和减轻血管源性水肿的治疗靶点。李丹东等〔20〕研究表明，实验性大鼠蛛网膜下腔出血(SAH) MMP-9/TIMP-1比值与基底动脉痉挛和脑组织含水量具有显著的相关性，可以作为判断SAH后早期脑损伤的指标。

本研究结果提示ANXA7、MMP-9/TIMP-1与高血压脑出血患者的脑损伤及脑出血量有密切关系。因为高血压脑出血后主要存在炎症反应，而MMP-9、TIMP-1是与炎症反应密切相关的细胞因子，剧烈的炎症反应会引起脑损伤，因此对脑神经细胞分泌的细胞因子有影响，由此推断这是ANXA7水平升高的原因。本研究也进一步说明，当高血压脑出血逐渐恢复后，ANXA7、MMP-9/TIMP-1水平也随之恢复平衡状态。

本研究结果提示ANXA7、MMP-9/TIMP-1可能参与高血压脑出血的脑损伤病理过程，分析其可能原因是正常人MMP-9/TIMP-1处于一个动态平衡，当受到刺激后，就会失去平衡。高血压脑出血发生后，形成的血肿会刺激大量炎性因子的释放，其中就包括MMP-9和TIMP-1，且MMP-9升高水平明显高于TIMP-1，导致MMP-9/TIMP-1比值升高，过量的MMP-9通过降解细胞外基质破坏的血脑屏障的完整性，引起脑水肿，导致大量炎症因子进入脑组织，进一步加剧脑损伤；脑神经细胞在炎性因子的刺激下分泌更多的ANXA7，因此与SNAP-23/SNAP-25的作用增加，导致谷氨酸水平提高，加剧脑损伤。因此，MMP-9/TIMP-1与ANXA7参与高血压脑出血脑损伤可能是一个上下游的关系，但其具体作用机制还有待进一步的分子生物学研究。

综上，ANXA7、MMP-9/TIMP-1与高血压脑出血患者的脑损伤程度有关，可作为预后的评估指标。