中西结合对非洲猪瘟治疗性试验的失败教训

吴晓林，付锦楠，吴珂超，周华娇，陈金兴,李龙瑞，汪太春

(1.江西新天地药业有限公司，江西峡江331409；2.江西省科学院微生物研究所，江西南昌330029；3.江西生物科技职业学院，江西南昌330200；4.江西省兽药饲料监察所，江西南昌330029）

1 概述

非洲猪瘟（ASF），简称“非瘟”，自2018年在江西爆发以来，对江西养猪业已造成毁灭性打击；85%以上养猪户已经销声匿迹了，15%左右的养猪户仍然在提心吊胆；因为任何药物、保健品和疫苗都是无用的，要有真正的非瘟疫苗至少要等5-10年才有希望的；而且一旦发生非瘟，均以死亡而告终。

非瘟是由非洲猪瘟病毒（ASFV）感染家猪、疣猪、欧洲野猪和非洲野猪的一种传染性极强的出血性疾病，所有年龄的猪都易感。 有特急性、急性、亚急性和慢性四种临床表现形式；非瘟的严重程度与病毒毒株、 猪种和流行时间长短有关。急性型以高热、食欲废绝、皮肤发绀和网状内皮系统出血为特征，发病后2-10 天内死亡，病死率达100%。 临床上与古典猪瘟非常相似，很难区别。

非洲猪瘟病毒是非洲猪瘟病毒科中唯一成员，兼有虹彩病毒和痘病毒的某些特征，是唯一核酸为DNA 的虫媒病毒，只有一个血清型，22 个基因型。 非瘟病毒的基因组大，是蓝耳病病毒的12 倍，猪瘟病毒的15 倍，口蹄疫病毒的24 倍。非瘟病毒的生存能力特别强，在冻肉中可存活数年至几十年，在未熟肉品、腌肉、泔水中可长期存活；但乙醚、氯仿等脂溶剂中可破坏囊膜使其失活。 软蜱的叮咬是直接接触传染的主要形式。

难道没有一种措施能防控非瘟吗？ 除了千方百计消灭非瘟的传染源，想方设法阻断非瘟的传播途径，就没有办法来提高易感猪的抵抗力吗？或许可以通过经口服中草药、 注射给药的方式，清除体内的病毒、调理体内脏腑功能、提高体内各脏腑的抵抗力； 或许可以通过体外带猪消毒、栏舍内外仍至空气进行彻底消毒的方法，以清除环境中病毒，至少可以清除到没能使猪发病的环境病毒量呢？ 带着这样一种想法，对正在患非瘟的猪，尝试一下治疗性试验，现报告如下，望同仁参考。

2 非瘟治疗性试验

2.1 试验猪场一曾某

2.1.1 试验猪场一现状：生产母猪77 头，产房乳猪223 头，保育猪790 头，育肥133 头，全场1257头。 做试验的3 号育肥栏内有15-20kg 吃乳猪料的猪有351 头，35-40kg 吃小猪料的猪有57 头，合计408 头。 在福建省南平市动物疫病检测站检测，全场猪群6月28日开始发生非瘟，当时母猪存栏200 多头，全场存栏近5000 头。 免疫用药情况：猪从7月份起一律不用任何疫苗，饲料中长期添加替米、氟苯、阿莫、强力、林可，猪坚强，多维、枯草、黄芪多糖、驱虫和驱蝇等药物。 8月12日-8月21日进驻猪场试验，9月1日-9月2日进入猪场检查临床试验效果，并采病料送广东农科院作实验室检测，以确定病原和抗体。

2.1.2 试验用药：辉清好伙伴（猪只每6kg 体重用本品1g，一天2 次，用20 天；一天一次，用8 天）；辉清好帮手（猪只每35kg 体重用本品1g，一天一次，用3 天，停3 天，用3 天）；超强碱离子水；辉清佐剂液（100ml/瓶）；辉清混悬液（100ml/瓶）。

2.1.3 用药方法

2.1.3.1 拌料：①辉清好伙伴：从打第1 针开始，连续用20 天，每500kg 饲料中添加2kg+ 葡萄糖3kg。 以后每500kg 料中添加1kg+葡萄糖3kg，用8-10 天。

②辉清好帮手：从打第1 针到第11 天开始，连续用3 天，停3 天，再用3 天，每500kg 料中添加1kg+葡萄糖3kg。

2.1.3.2 消毒：超强碱离子水：按1：40 比例对栏舍内外并带猪消毒，隔天，消毒一次，长期使用。

2.1.3.3 肌注：必须注射第1 天、3 天、5 天、7 天四针，用辉清佐剂液、辉清悬液和2.5%恩诺沙星：按1：3：3 比例混匀，试验猪进行肌肉注射，10kg 注2ml，20kg 注3ml，30kg 注4ml，35kg 注5ml，35kg以上注8ml，50kg 以上注10ml。 必须用12×20 号针头，一头猪用一个针头。

2.1.4 试验操作：两人准备药水，两人注射，一人拦猪。 配好药水混均后放入宽口瓶中，一头猪用一个消毒好的针头。 执行第1 天、3 天、5 天、7 天四针操作。 注：当时天气温度35-39℃。

2.1.5 每天观察记录：试验猪和非试验猪，每天上下午各观察一次：发病情况、死亡情况、皮肤眼睛粪尿情况、采食情况等外观；病死猪的胸腹腔、心肺肝胆脾肾膀胱大小肠等内脏变化。 用药情况、消毒情况等。

2.1.6 试验结果

注：8月25日开始出现典型的圆环病毒病；8月12日到9月16日总共死亡193 头猪。

随机采4 头没用上述药的猪全血，4 头用过上述药的猪全血，2 头没用药的猪（合伙猪，50kg以上猪，一头发烧，一头不发烧）全血，共10 支全血；剖检4 头病死猪，采脾和腹股淋巴结作为送检病料。 其中两头病变见胸腔心毛绒状，肺脓肿和纤维素状，腹股沟淋巴结肿大，白色，初诊为圆环病毒病；另两头猪肝、肾、淋巴结肿大、水肿，肠、胃、膀胱出血，肺、胰、心包和心、脾、皮及皮下广泛出血，初诊为非瘟，将病料送广东农科院检测。

2.2 试验猪场二王某

在福建省南平市动物疫病检测站检测，6月15日全场发后非瘟；8.12 选择准备淘汰瘦弱的猪，56 头20kg 重的猪，使用上述药，注射到第2针，认为猪渐渐瘦小，没有得到改善，就淘汰28头，还剩28 头继续使用上述药。 另外，又购买比较好的20kg 的猪134 头，重新使用上述药物，至9月1日，前者28 头猪，己经使用了4 针，后者134 头己经使用2 针。 同时，剖检了2 头，一头用了4 针，一头用了2 头。 都疑似非瘟，采脾和淋巴结，送广东农科院待检。

2.3 试验猪场三姜某

在福建省南平市动物疫病检测站检测，7月5日全场发后非瘟，除200 多头用过猪瘟疫苗，没有进行试验外，其余猪共计1070 头，都使用上述药物试验，己经使用2 针，同时采全血，2 头母猪，4 头小猪，4 头中猪，共10 支，同时采病死猪脾和腹股沟淋巴结作病料，一同送广东省农科院待检。

3 实验室检测

3.1 检测报告

样品名称 猪血清及组织样品 样品数量 血清20+组织9送检单位 福建猪场 样品状态 良好样品来源方式 自送 托运 其他 送检日期 2020年09月03日检测环境条件 环境温度18-25 ℃；环境湿度50-60%RH 检验日期 2020年09月03日检验项目 ASFV-Ag 检测方法 荧光定量PCR

注:“-”表示阴性，“±”表示可疑，“+”表示阳性，“/”为不测项。粤疫控（2018）51 号：《非洲猪瘟实验室检测操作程序》。ASFV-Ag 为非洲猪瘟病毒抗原。 CP 值≥40 为阴性，CP 值＜40 为阳性。ASFV-Ab 为非洲猪瘟病毒抗体,使用的试剂盒为INGEZIM(P72)公司产品。抗体水平用X 值[阴性值-样品值/阴性值-阳性值]*100%表示, 大于或等于50%为阳性，40%-50%之间为可疑，小于或等于40%为阴性。检测结论 详细结果请见附表。备 注 主要仪器为实时荧光定量PCR 仪，规格型号为ROCHE Lightcycle 480 Ⅱ。本检测结果只对本次送检样品负责，仅供防疫参考。检验依据

3.2 检测结果

3.2.1 抗原检测结果

编号 CP 值 判定结果 编号 CP 值 判定结果2-A-1 ＞40.00 - 姜2-201 ＞40.00 -2-B-1 ＞40.00 - 姜2-202 ＞40.00 -2-1-3 ＞40.00 -血清王-1 31.65 +2-1-4 ＞40.00 - 王-2 31.19 +2-2-3 ＞40.00 - 姜-1 29.63 +2-2-4 ＞40.00 - 姜-2 34.38 +姜1-1.1 27.31 + 姜-3 28.67 +姜1-1.2 33.17 + 曾-1 36.32 +姜1-1.3 35.42 + 曾-2 ＞40.00 -姜1-1.4 33.72 +组织

3.2.2 抗体检测结果

编号 阻断率 判定结果 编号 阻断率 判定结果(P72) (P72)2-1-1 10-2 11- 2-2-4 13 -2-1- 姜1-1.5 11 -2-1-3 21 - 姜1-1.6 39 -2-1-4 93 + 姜1-1.7 8 -2-2-1 15 - 姜1-1.8 13 -2-2-2 15 - 姜2-201 51 +2-2-3 21 - 姜2-201 26 -

4 结果分析

4.1 试验猪场一曾某

抗原检测血清：没用过药的菜猪2-2-3、2-2-4，2-A-1、2-B-2；用过药的菜猪2-1-3、2-1-4，均为阴性，即均没有非瘟抗原。

抗原检测组织：曾-1 为阳性，即有非瘟抗原，曾-2 为阴性，即没有非瘟抗原。

抗体检测：没用过药的菜猪2-2-1、2-2-2、2-2-3、2-2-4；用过药的菜猪：2-1-1、2-1-2、2-1-3 均为阴性，即没有非瘟抗体；而2-1-4 为阳性，即有非瘟抗体。

从上述检测结果看，场内非瘟基本消失，全部试验猪非瘟抗原阳性转为阴性。 合作猪场没有感染非瘟：检测数量太少。

9.26 电话回访，试验的408 头，陆续猪死的差不多了，只剩4 头猪。

4.2 试验猪场二王某

抗原检测组织：王-1、王-2 均为阳性，即均为有非瘟抗原。

从上述检测结果看,场内仍有严重非瘟。

9.26 电话回访，猪134 头全部死亡，猪28 头的只剩2 头。

4.3 试验猪场三姜某

抗原检测血清：菜猪姜1-1.1, 姜1-1.2,姜1-1.3,姜1-1.4,均为阳性，即有非瘟抗原。

抗原检测组织：菜猪姜1，2，3，均为阳性，即有非瘟抗原。 而姜2-201，姜2-202 均为阴性，即没有非瘟抗原。

抗体检测：姜1-1.5, 姜1-1.6, 姜1-1.7,姜1-1.8,姜2-201 均为阴性,即没有非瘟抗体.而姜2-202 为阳性,即有非瘟抗体.

从上述检测结果看,场内有严重非瘟，母猪非瘟正在侵入。

9.26 电话回访，200 多头用过猪瘟疫苗的猪，全部死亡，其它猪除中途卖了180 多头外，其余全部死亡，母猪还剩9 头。

5 失败教训

5.1 本试验所用药物

中草药1：辉清好伙伴，主要由黄芪、芍药、桂枝、辣蓼、甘草等组成，具有温经益气、祛风散寒功效。 这样有助于烈性疫病所致猪体五脏六腑的功能恢复。

中草药2：辉清好帮手，主要由栀子、大黄、茵陈蒿、牡丹皮、黄连、水牛角、牛黄等组成，具有清热利湿、凉血解毒、燥湿退黄的功效。 这样有助于消湿退黄，提高免疫力。

超强碱离子水：是一种PH 为13.2 的消毒剂，可带猪喷雾消毒，也可栏舍内外、地面墙壁喷雾消毒，还可空气净化消毒。

辉清佐剂液、 辉清混悬液和2.5%恩诺沙星：按比例混合的混悬液，进行第1 天、3 天、5 天和第7 天注射，目的是控制猪感染病毒的数量，增强猪的抵抗能力，防治继发感染。

从上述的检测报告可以看出，在治疗期间猪还较稳定，阳性猪群基本上转变为阴性猪群，从试验开始算起，1 个月左右，猪的死亡越来越多，除了发现猪场一曾某的试验猪群继发了圆环病毒病外，猪场二王某和猪场三姜某的猪群并没有发现有继发感染，到后来所有试验猪基本上全部死亡，这只能说明试验猪所采取的用药方案，对非瘟的防控没有起到作用，至少没有起到延迟作用。 非瘟病毒始终还在猪体内，一旦用药不到位，或用时不准确，或用量不到位，非瘟病毒又大量的繁殖，而造成感染而致病。

5.2 在不同情况下，猪感染ASFV 的临床表现是：高热（40-41℃）、高致死率、广泛出血、肺水肿和淋巴结广泛坏死（Medus,1988;G0mez-Villamand0s等，1995）。 有时，ASF 与猪霍乱、猪丹毒表现相似的临床症状和病理变化。 ASFV 虽不能在T、B 细胞中复制，但ASFV 确实能在单核细胞和巨噬细胞中复制，因此：一是造成的免疫抑制作用不明显；二是ASFV 有很好的抗原性，在感染后4 天和6-8 天的血清中能查到IgM、IgG，而且能维持很长时间；三是ASFV 抗体能延迟临床症状的出现、减轻病毒血症、并保护感染猪不会死亡；四是实验表明，实验感染和自然感染ASFV 的猪的血清中没有中和抗体，并ASFV 不影响体液免疫反应。所以做好生物安全，控制猪场内ASFV 的数量，减轻病毒血症，保护感染猪不死亡，是养殖专业户唯一能做的事情。

5.3 家猪经以下途经感染ASFV 病毒：口，鼻腔，蜱叮咬，皮肤划痕，肌肉、静脉、皮下和腹腔注射。ASFV 感染从扁桃体和下颌淋巴结的单核细胞和巨噬细胞开始，随淋巴液和血液到达靶器官如淋巴结、骨髓、脾、肺、肝和肾，感染后6-8 天出现病毒症，而且病毒血症将存在很长时间。 自然感染ASFV 的潜伏期4-19 天不等，实验感染ASFV 的潜伏期较短，2-5 天，潜伏期长短与病毒数量和感染途经有关。 ASF 大体病变见于：脾、淋巴结、肾、心脏。 脾：红黑色、肿大、梗死、变脆，脾大量出血。淋巴结：出血、水肿、变脆。象黑红色的血肿。切面大理石样。肾：肾皮质和肾盂点状出血。肾大量出血。 心：心内外膜出血点或出血斑，出血性浆液性心包积水。 还见：腹腔内出血性浆液，整个消化道水肿和出血；肝和胆出血；膀胱粘膜出血点。 胸腔积水，胸膜出血点；肺水肿；脑膜脑组织充血，间质性肺炎。

所以环境安全、生物安全是目前防控ASF 的最佳选择。

5.4 软蜱是ASFV 的保毒者和传播者，实验证明，非洲的一个新种软蜱----O.Savignyi 能将ASFV传染给家猪（Mellor 和Wilkinson,1985）。家畜中只有家猪能自然感染ASFV。 感染ASFV 的野猪的组织中含有少量的病毒和表现低水平或不能检查病毒血症，然而，即使很少的ASFV 也足以通过软蜱传播给家猪。感染ASFV 的康复猪和带毒猪，这两种猪在ASF 的流行病学中所起的作用是制定消灭非洲猪瘟的计划时应该主要考虑的问题。从流行病学方面看，有ASFV 传播到无ASFV 的国家与通过国际空港和海港进口大量感染ASFV的未煮熟的猪肉有关，在这些港口的垃圾中发现了未煮熟的废物中含有猪肉并用来饲喂猪只。 一旦ASFV 感染家猪，ASFV 带毒猪将是随后病毒传播的重要来源。 至今ASF 无有效疫苗原因一是ASFV 分离株间变异太大； 二是与ASFV 参与免疫反应的细胞复制有关。 所以目前防控ASF 的措施是：①服从统一指挥，依靠科学。 ②统一监测，病死尸体深埋。 ③特别是隐性或慢性ASF 的检测。 如低毒力病毒株和不能产生血细胞吸附现象的病毒株。 ④群防群动，灭蜱与疣猪，消灭传染源。 ⑤群防群动，灭空港和海港的污染ASFV 垃圾，消灭传播途经。 ⑥患ASF 的猪不会产生免疫抑制，对ASF 慢性、隐性、病毒携带者，通过运用中草药，合理的配伍，科学的炮制，达到提高猪群整体抵抗力，改善猪群的脏腑功能，让猪群慢慢地适应，猪群与环境共生共存的自然状态。 只有这样，才是目前防控ASF 的唯一选择。