基于时间分辨免疫荧光法与电化学发光法对降钙素原检测项目的临床一致性评价

李登红，陆建伟，王洪涛，庄子槟

1 巴迪泰（广西）生物科技有限公司 （广西南宁 530031）；2 广西中医药大学第一附属医院检验科 （广西南宁 530022）

降钙素原（procalcitonin，PCT）是无激素活性的降钙素 前肽物质，为分子量为13 kD的糖蛋白。健康人血浆中PCT含量极低[1]，其在人体内的半衰期为25～30 h，稳定性好[2]。PCT水平在有系统性症状的细菌感染后会快速升高，其他情况，如重大手术、严重烧伤和新生儿也会升高，但是其会很快回复到基线水平；而病毒性感染、细菌定植、局灶感染、变态反应性疾病、自身免疫疾病和移植排斥反应通常不会诱导PCT水平大幅度升高（数值＜0.5 ng/ml）。因此，通过评估PCT水平，临床医师能够进行是否会发展为重度脓毒症和脓毒性休克的危险性评估。

目前，测定PCT的方法主要有凝胶层析法、酶联免疫吸附试验法、放射免疫法、金标法、免疫荧光法、免疫化学发光法等[3]。罗氏PCT检测试剂盒（电化学发光法）已进入中国市场多年，因其产品质量可靠、稳定，深受广大医院用户的信赖。超敏PCT（PCT Plus）检测试剂盒（免疫荧光干式定量法）是巴迪泰公司研发的POCT试剂盒，采用时间分辨免疫荧光与干化学层析技术，结合抗体、抗原的特异度反应，检测下限能够达到0.01 ng/ml，通过配套的荧光免疫分析仪，将结果定量显示出来。为了评估超敏PCT（PCT Plus）检测试剂盒（免疫荧光干式定量法）的性能，以罗氏PCT检测试剂盒（电化学发光法）为对照，对超敏PCT（PCT Plus）检测试剂盒（免疫荧光干式定量法）开展准确度、精密度、相关性、一致性方面的评价，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

110例样本均来源于2019年3—4月广西中医药大学第一附属医院门诊、急诊以及住院的患者，其中男60例，女50例；年龄1～85岁；包含一定数量的健康人群和轻、重度炎症患者，剔除严重溶血、黄疸以及体积小的样本。

1.2 仪器与试剂

参照组试剂及仪器：罗氏PCT检测试剂盒（电化学发光法）及配套校准品、质控品（Roche diagnostics GmbH），罗氏 cobas e411分析仪（Roche diagnostics GmbH）。

试验组试剂及仪器：超敏PCT（PCT Plus）检测试剂盒（免疫荧光干式定量法）及配套校准品、质控品[巴迪泰（广西）生物科技有限公司]，全自动干式荧光免疫分析仪（A5000）[巴迪泰（广西）生物科技有限公司]。

参照试剂和试验试剂的阳性标准均为PCT≥0.5 ng/ml。

1.3 方法

1.3.1 精密度评估

参考EP15-A2文件，两种试剂均检测两个水平的血清样品配制的血清质控品，另外使用两种试剂分别测试两种试剂配套的质控品，测定3次/d，间隔2 h，连续测定5 d，计算批内和总变异系数（CV）；根据原卫生部临床检验中心室间质评标准，检测系统不精密度CV＜1/3Tea（10%）。

1.3.2 准确度评估

使用罗氏PCT检测试剂盒（电化学发光法）和超敏PCT（PCT Plus）检测试剂盒（免疫荧光干式定量法）同时检测25例浓度覆盖检测范围的临床样本，采用t检验统计检验结果，计算超敏PCT（PCT Plus）检测试剂盒（免疫荧光干式定量法）测定值与罗氏PCT检测试剂盒（电化学发光法）测定值的偏倚，绘制偏移图，将测量的偏倚与厂家声明进行比较。

1.3.3 相关性评估

使用罗氏PCT检测试剂盒（电化学发光法）和超敏PCT（PCT Plus）检测试剂盒（免疫荧光干式定量法）同时检测110例浓度覆盖检测范围的临床样本，采用线性回归进行结果分析，以y=a+bx和r的形式给出回归分析的拟合方程。

1.3.4 一致性评估

Bland-Altman可很好地评价定量数据的检测结果一致性，同时会提供系统误差与随机误差。试验试剂与参照试剂的每个样本测定值之差与相应两试剂的测试均值作散点图并采用四格表法分析两种方法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和约登指数。

1.4 统计学处理

基于 OriginPro8 SR4（v8.0951(B951)）和 MedCalc（Version 18.2.1）软件进行统计分析和作图，精密度评估用CV表示，准确度评估采用t检验，相关性评估采用线性回归分析，一致性评估应用Bland-Altman和四格表法。

2 结果

2.1 精密度评估结果

两种方法检测PCT的精密度见表1，其中两种检测方法均小于原卫生部临检中心要求的1/3Tea（10%）。

表1 试验试剂与参照试剂检测结果

2.2 准确度评估结果

通过t检验，在置信限P=0.05情况下，t临界值为2.06，超敏PCT（PCT Plus）检测试剂盒（免疫荧光干式定量法）检测结果均值为6.76 ng/ml，罗氏PCT检测试剂盒（电化学发光法）检测结果均值为6.35 ng/ml，两种检测方法的百分偏倚为6.42%，＜10%，与厂商的声明相符。

2.3 相关性分析结果

两种检测方法的检测结果回归方程为：y=0.9777x+0.3365，r=0.987＞0.975，表明在检测范围内两种检测方法的相关性良好，拟合曲线方程见图1。

2.4 一致性判断

使用Bland-Altman散点图进行分析，在检测范围内，两种方法的差值偏倚呈现均匀分布，由图2可以看出共有3个点超出±1.96SD范围，比例为2.73%，表明两种方法具有良好的一致性。

采用四格表法计算两种方法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、约登指数分别为96.36%、94.55%、94.64%、96.30%、0.91，见表2。

图1 两种方法检测结果的线性相关

图2 两种检测方法的Bland-Altman散点

表2 试验试剂与参照试剂比较（例）

3 讨论

新生儿肺炎为新生儿的常见疾病和多发病症，主要由细菌、病毒、衣原体及支原体等引起，以细菌较为常见，是引起新生儿死亡的一个重要原因，据研究报道，新生儿感染性肺炎的病死率为5%～20%[4]。考虑新生儿感染初期临床表现较隐蔽，少数表现有咳嗽、咳痰、体温升高等现象，所以容易被家属忽视，据调查，全世界每年有200万例以上新生儿死于肺炎，其中在中国西部农村新生儿病死率调查研究中，34.5%的新生儿死于肺炎[5]。因此，新生儿肺炎需尽早确诊并及时治疗，以确保新生儿生命安全。对于此类患儿展开治疗时，针对不同的发病原因，需采用不同的方式，早期诊断中对感染病原菌进行明确极为关键。作为一个敏感指标，PCT与新生儿肺炎病情严重程度及病原菌感染类型有一定关系，可用于脓毒血症的早期诊断中[6-8]。

目前行业内对PCT进行检测采用电化学发光法口碑较好，其中罗氏PCT检测试剂盒（电化学发光法），其准确度、精密度、灵敏度、特异度等各项性能都得到广泛认可[9-10]。超敏PCT（PCT Plus）检测试剂盒（免疫荧光干式定量法）使用时间分辨荧光免疫法，以免疫荧光分析仪为检测平台，检测下限达到0.01 ng/ml。本研究选择罗氏诊断公司生产的罗氏PCT检测试剂盒（电化学发光法）与超敏PCT（PCT Plus）检测试剂盒（免疫荧光干式定量法）两种检测方法进行系统性的比对分析，以罗氏电化学发光法作为参考方法，时间分辨免疫荧光法为试验方法，对两者的偏倚程度、相关性和一致性进行分析。

本研究结果显示，超敏PCT（PCT Plus）检测试剂盒（免疫荧光干式定量法）拥有良好的精密度，检测结果的变异系数＜10%，能够满足临床检验的要求；超敏PCT（PCT Plus）检测试剂盒（免疫荧光干式定量法）与罗氏PCT检测试剂盒（电化学发光法）之间存在一定的系统性误差，其偏倚为6.42%，符合厂家的声明；两种检测方法拥有较好的相关性（r=0.987）。Bland-Altman法可得出有2.73%的检测结果超出了95%的置信区间，灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、约登指数分别为96.36%、94.55%、94.64%、96.30%、0.91，证明两种方法一致性较好。

综上所述，超敏PCT（PCT Plus）检测试剂盒（免疫荧光干式定量法）具有良好的精密度，且与罗氏PCT检测试剂盒（电化学发光法）的偏倚较小，两种检测方法相关性、一致性均良好，临床上不同科室应考虑自身需求选择合适的检测方法。