兽医病理诊断技术在动物疾病诊治中的应用

何 毅

（江西省赣州市会昌县筠门岭畜牧兽医站，江西会昌 342600）

兽医病理诊断能通过分析动物所患疾病的特点，按照发生过程、位置以及原因等进行分析，以判断致病因素，掌握疾病发生规律，为后续治疗提供科学依据，对于现代养殖业发展有积极影响[1-4]。

1 兽医病理诊断技术及其影响

1.1 诊断技术兽医病理诊断以病理学原理为基础，对动物身体组织患病部分和感染疾病的动物尸体进行病理学研究，按照组织形态学观摩与病理分析方式，提出科学诊断与合理治疗措施。兽医病理诊断技术结合了表象观察与细微分析，所以得出的结果更加具有直观性和指导性优势。

1.2 技术影响

1.2.1 疾病研究基础作用 以往在对动物疾病进行诊断中，主要采用观察方法进行判断，很少借助相关医疗设备进行疾病检验，所以有可能产生误诊。兽医病理诊断技术凭借其方便、简单和易操作的优势，能在最短时间内根据病死动物尸体解剖检验结果分析死亡原因，结合病例部分数据监测，能直接确定疾病种类，为后续检查提供方向性指导。

1.2.2 疾病扩散预防作用 因为动物所患疾病种类较多，而且危害性较大的疾病大部分为传染性疾病，不仅会在动物之间传播，还可能出现动物和人类之间的传染。流行疾病危害大，已经成为预防动物疾病的关键。兽医病理诊断技术能在流行病学调查技术上，及时掌握动物患病症状，以病理变化和感染源研究方式，确定引起流行性疾病的病菌，提高治疗的针对性。

1.2.3 医疗纠纷判断作用 部分宠物医院、宠物寄存工作者在工作中容易遇到救治限制等因素，因而会产生治疗事故，医疗纠纷也越来越多。在完善的司法体系下，通过法律途径维护权益成为首选。兽医病理诊断结果可以为宠物死亡原因提供可靠的判断依据，以尸体检查方式明确动物的死亡原因，并将其作为司法判决依据，可为宠物死亡引发的纠纷问题提供直接性证据。

2 兽医病理诊断技术在动物疾病诊治中的应用

2.1 实验目的为探讨兽医病理诊断技术在动物疾病诊治中的实际应用情况，本文对X 地区的绵羊肺腺瘤病进行流行病学调查，了解到近几年当地绵羊患该疾病的临床表现，期望通过兽医病理诊断技术，掌握疾病的发病机理以及生物学特性，并为后续研究奠定基础。

2.2 材料与方法

2.2.1 材料 选择2018 年X 地区某养殖场的患病绵羊作为研究对象，将绵羊的肺组织一部分保存在福尔马林中，另一部分放置到-80℃的环境中备用。

实验室用到的试剂与设备如下。①试剂。PBS 液：定容1 000 mL，使用NaOH 或者浓HCl 将pH 值调到7.4 左右，并在高温灭菌后放置到室温保存；选择美国S 公司购入的硫酸卡那霉素；石蜡；上海生物工程技术有限公司购入的分析纯氯化钾和氯化钠。②仪器设备。光学显微镜、高速冷冻离心机、大容量高速离心机、低温冰箱、超净工作台、生物安全柜、切片机、电子秤、微量移液器和研钵。

2.2.2 方法 （1）向当地养殖场负责人与管理人员询问疾病流行情况，并通过生理学观察的方式，了解羊群的生活环境、群体性特征，掌握基本患病情况。

（2）采用剖检观察方法，对患病绵羊进行解剖，观察其全身的病理学变化情况，了解内部的病变，重点观察肺部是否出现病变，记录结果并拍照保存。

（3）剖检的同时采集患病组织，并送到病理切片室进行切片观察，操作流程为：①将组织块放入丙酮I 中90 min、丙酮II 中90 min、无水乙醇I 中60 min、无水乙醇II 中60 min、无水乙醇III 中60 min 脱水；②将组织放置到二甲苯I 和二甲苯II中各15 min，直至样本变为透明状态；③将组织块放到蜡缸I中60 min、蜡缸II 中60 min、蜡缸II 中60 min 包埋，并放置到温度为4℃的环境中保存；④将包埋后的组织进行底部加热并固定在小木块上，做5 μm 的切片，贴在载玻片上，放置到温度为60℃的恒温箱中烘片；⑤经过HE 染色之后，再次放置到二甲苯I、II 和III 中各5 min，加入中性树脂胶封片后，使用光学显微镜对病理组织切片进行观察，得到病理变化结果。

（4）取低温保存备用的病理组织10 g，剪碎后进行研磨，使用5倍体积PBS溶液稀释制备成乳剂，放置到无菌离心管中，在-20℃下迅速冷冻，18 h 后取出在室温中融化6 h。如此反复3 次之后，对样本进行过滤，使用4 000 r/min 离心机设备进行离心，共操作3 次，得到上清液，分装到小号离心管后在温度为-70℃的环境中保存备用，悬液使用透射电镜进行观察。

2.3 实验结果病理组织结果观察得到病羊的肺组织区域有明显的瘀血情况，因病毒侵入终末细支气管与肺泡间上皮细胞，使肺泡壁增宽，增殖细胞侵入会代替肺泡，导致肿瘤细胞增生。

当肺泡壁上皮细胞新生增殖时，其细胞壁始终处于相对完整的状态，而且细胞核位于细胞基部。当受感染的肺泡腔内部出现渗出性浆液和纤维素时，证明周围肺泡腔内充满巨噬细胞，腺瘤病灶间质增多。终末细支气管充满炎性物质，周围有淋巴增生灶，无正常肺泡结构，黏液分泌增强，空泡变性。可以看到增生的柱状上皮细胞突出到末端细支气管的腔内，肺组织血管壁增厚，内皮细胞变性，周围可见立方和柱状排列的肿瘤细胞。可见圆形腺瘤样病变，周边有结蹄组织囊肿，一些假囊肿由塌陷的肺泡壁形成，也称为腺瘤样区域。肺组织中有脱落的肿瘤细胞及其崩解产物，小叶间支气管管壁增厚，内皮细胞变性，肺泡融合，细支气管内淋巴细胞增生，肺动脉分支内有炎性物质浸润。

通过制备组织悬液，并运用透射电镜观察得到病毒颗粒，发现其为球形、外部有囊膜的颗粒组织。电镜观察结果显示，病毒颗粒的直径为88 ～125 nm，颗粒外部囊膜的表面有长度为10 ～12 nm 的纤突。

2.4 结果分析本研究对X 地区某养羊场的绵羊肺腺瘤进行了调查，并对其临床症状和组织解剖进行了观察。观察发现病羊的呼吸困难，并有咳嗽症状，尸检可见肺增大、实变，肺表面因大小不等的灰白色，被感染肺组织的正常结构被破坏，肺泡壁上皮细胞新增生，突入肺泡腔形成乳头状腺瘤。

临床尸检时应注意其他易与肺部感染疾病相混淆的疾病。可见切割的肺和气管充满泡沫状黏液，这是由于肺组织中的血气屏障被破坏，渗透性增加，血管中的液体渗出，以及肺组织中有丰富的毛细血管网。肺泡腔内可见大量巨噬细胞和乳头状瘤，末端细支气管充满炎症物质。绵羊肺腺瘤病的一个重要特征是在发病症状明显的时期，可以从病羊的鼻腔中收集到大量的水样分泌物。绵羊肺腺瘤病在临床病理、影像学和超微结构上与人细支气管肺泡癌相似。因此，它也可以成为了解病毒与人肺癌关系的理想动物模型，为肺癌的发病机制提供新的有益见解。在诊断病羊时，要注意将其与其他容易混淆的疾病区分开来。

3 结语

兽医病理诊断技术应用期间，可在对动物疾病进行诊断的基础上，对病症进行系统分析，确保研究结果系统、完整，防止发生各类医疗纠纷，也能为后续顺利开展工作奠定基础。