奶牛布氏杆菌病流行病学分析与诊断

石硕

（北京市顺义区动物疫病预防控制中心 100300）

布氏杆菌病又称为布病，是由于布氏杆菌侵入机体而引起的一种人畜共患传染病。 此病在世界各地都有不同程度的流行，主要感染牛、羊、猪、犬等，也可以感染人。 发病后典型的症状就是引起生殖器官和胎膜炎症，造成流产、不孕等。 人感染后，症状和感冒相似，常被误诊，从而转成慢性，治愈率很低，造成劳动能力丧失。 因为人畜布病，每年的治疗费用很高，给养殖业带来很大的经济损失，也威胁着人类的健康，要引起足够的重视。

1 病原

布氏杆菌属主要有6 个种，分别为羊种布氏杆菌、牛种布氏杆菌、猪种布氏杆菌、犬种布氏杆菌、绵羊种布氏杆菌和沙林鼠种布氏杆菌。 羊、牛、猪、犬种布氏杆菌对人畜都有感染力，绵羊种布氏杆菌只对羊有感染力。沙林鼠种对人畜都不感染。每种布氏杆菌又有不同的类型，如牛种布氏杆菌有1、2、3、4、5、6、7、9型。 布氏杆菌的毒力和致病力较强，尤其是羊种、牛种和猪种更为明显。

布氏杆菌为球杆形或短棒状的革兰氏阴性菌， 没有鞭毛，不能运动，也没有芽孢，一般情况下也不形成荚膜，但也有人认为其在恶劣的条件下可以形成荚膜样物质或荚膜样结构， 提高其对外界的抵抗力。 此菌革兰氏染色和柯兹罗夫斯基染色都为红色，可以用以进行染色鉴别。

布氏杆菌为需氧菌，但是其生长繁殖还需要C02，最适宜的生长温度为36℃～37℃，最适宜生长的pH 为6.4。 此菌对外界环境的抵抗力相当强，直射阳光下可以存活4h，不耐湿热，煮沸条件下立刻死亡，60℃加热30min 或70℃加热5min 就可以将其杀死。其对普通的消毒药也非常敏感，2%石炭酸、来苏水、火碱溶液在1h 内就可以将其杀死；5%新鲜石灰乳、2%福尔马林经2h 或1h 可将其杀死；0.5%洗必泰或0.01%度米芬、新洁尔灭，在5min内就可以杀死该菌。

2 流行病学

对布氏杆菌易感的动物很多，200 多种动物可感染布病。最易感的为牛、羊、猪，其次还有牦牛、野牛、马、狗、猫等动物和人。通常牛种布氏杆菌感染引起牛布病， 牛布病在全球几乎都有感染发病，尤其是在南欧和西亚等国家，牛、绵羊、山羊混合养殖，造成牛感染羊种布氏杆菌而发病。 没有怀孕的母牛感染后通常没有临床症状，怀孕的母牛感染后会引起胎盘炎，导致母牛在妊娠期内流产，有的虽然不会引起流产，但是在其胎盘、胎液和阴道排泄物中会有大量病原。成年公牛感染后会引起睾丸炎症。布病是导致母牛、公牛不孕的主要原因。 有的牛感染后，还会引起关节炎、淋巴结炎等。

布病的主要传染源为病畜和带菌动物，病原微生物通过阴道分泌物、乳汁、精液、粪尿等排除体外，污染周围的环境、饲料、饮水等，健康牛通过配种、消化道、皮肤黏膜接触等感染发病，尤其是流产母牛的胎水、胎儿、胎衣中含有大量的布氏杆菌，是最危险的传染源。 布病多呈地方流行，发病没有季节性，饲养管理粗放、应激是诱发此病的主要因素。

3 诊断

3.1 病原学诊断

3.1.1 染色镜检 无菌采取病料， 做成涂片自然干燥后用火焰固定，然后用2%的沙黄水溶液覆盖标本放在酒精灯火焰上加温直至产生小气泡，再水洗后用碱性美蓝溶液染色呈红色，放置到显微镜下观察可见球杆形的杆菌。 必要的时候还可以对布氏杆菌做进一步分离，可以从病料中直接分离培养，或者通过感染动物间接分离。

3.1.2 PCR 扩增 随着分子生物学技术的发展， 也逐渐的应用于布氏杆菌的检测。 PCR 检测技术具有快速、准确、高效的特点，其在检测、鉴定布氏杆菌方面越来越受到重视，把菌体基因组以及基因组外的某些特定序列作为检测的基因序列， 可以确定布氏杆菌的属、种，有良好的发展前景。

3.2 免疫学诊断

3.2.1 凝集试验 试管凝集试验、 平板凝集试验这是传统的检测方法，现在已经很少使用。 现在常用卡片试验、虎红平板凝集试验和缓冲平板凝集试验。 这些检测方法主要是基于抗体对抗原表面脂多糖0-链的检测。凝集试验操作简单，方便、快速，在养殖场中普遍推广应用。

3.2.2 补体结合试验(CFT) CFT 是目前应用最广泛的一种检测方法，敏感特异性较高，是国际贸易指定的检测牛、羊、绵羊副睾种布氏杆菌病的方法。 在一些慢性病牛中，当血清凝集价已经降为阴性或者可疑的情况时，补体结合反应仍然为阳性，由此也说明了CFT 检测布病的特殊意义。

3.2.3 乳环试验(MRT) MRT 是检测奶牛布氏杆菌病的主要方法，这种方法操作简便、快速、对奶牛不会产生刺激，也不会影响生产，受到养殖户的好评。 MRT 不仅可以检疫个体乳样，也可以检疫混合乳样，尤其适合于大规模的例常检疫，能迅速的筛选某个牛群或区域。 但是这种方法有时会出现假阳性，影响检测效果。

3.2.4 酶联免疫吸附试验(ELISA) ELISA 法与CFT 检测效果都很显著，但ELISA 法更方便，既可以用于血清学诊断，也可以用于乳汁检查。 不仅可以作为确证实验， 也可以作为筛选实验，是一种发展前景很好的诊断方法。 ELISA 法的关键就是选用抗原。 牛种布氏杆菌病ELISA 法已经标准化，使用S-LPS 抗原。

4 结语

布氏杆菌病没有明显的临床症状，诊断要结合细菌学、血清学诊断才可以确诊。 养殖生产中，要结合用途和具体情况采用适合的诊断方法。 细菌学诊断主要有涂片染色镜检、 病原分离鉴定；血清学诊断主要有凝集反应、沉淀反应、补体结合反应、酶联免疫吸附试验等。 普查布病常用平板凝集试验、试管凝集试验和补体结合试验等。