文 敏 张 芬 舒 刚* 徐 丹 唐子婷 黄远玲 孙弟芬 杨志勤
(1.四川农业大学动物医学院,四川成都611130;2.四川农业大学动物科技学院,四川成都611130)
鹌鹑产业是仅次于鸡、鸭的第三大养禽业[1],但我国养殖鹌鹑的时间并不长,直到20 世纪70 年代后才得到较快的发展,在此期间引进一些新的蛋用、肉用型家鹑,建立专门的种鹑生产基地[2]。鹌鹑作为一种大规模饲养的禽类具有许多优点,如繁殖能力强、生长速度快、饲养周期短、产蛋量高。鹌鹑蛋、肉的营养丰富,胆固醇含量低,蛋白质含量高;鹌鹑肉质细嫩,含有多种人体必需的氨基酸,具有较高的药用价值。此外,相较于鸡蛋和鸡肉,鹌鹑蛋和鹌鹑肉中的B 族维生素、胆固醇和卵磷脂含量更高[3],在我国素有“动物人参”的美誉[4]。集约化养殖下,受到商业利益的驱使,不少养殖户都长期使用抗生素来预防疾病和促进生长,但使用抗生素会导致农副产品药物残留和细菌耐药性增强。为消除抗生素带来的不利影响,研发新的抗生素替代品以保证动物的健康生长是目前各国研究者研究的热点方向之一,现有不少研究人员将目光投到了我国传统的治疗药物中草药上来,使用中草药代替抗生素,是未来研究的重要方向。丹参为唇形科植物,以干燥根及根茎入药,具有活血化瘀、通经止痛、凉血消痈的作用[5],丹参的活性成分及代谢产物丰富,因具有降血脂、抗氧化、抗肿瘤活性、抗炎和保护肝脏的药理学作用而受到国内外学者的广泛关注[6-10]。
本文通过在鹌鹑饮用水中添加不同水平的丹参水提液,研究丹参水提液对鹌鹑育雏期生长性能、免疫器官和血清生化指标的影响,为丹参作为中草药添加剂提供理论依据,减少抗生素使用造成的农副产品药物残留和细菌耐药性增强等亟待解决的问题。
120只1日龄健康无病的日本雏期鹌鹑购自嘉祥县友民鹌鹑养殖场。
1.2.1 药品
丹参(Salvia miltiorrhiza)干燥根茎(购自四川省成都市金牛区荷花池中药材专业市场,经四川农业大学药学系鉴定为正品参)。丹参水提液的制备:将丹参1 000 g 按煎煮法提取水提液,先用冷水浸没药材并超过药材2~3 cm,浸泡50 min 左右。浸泡后开始第一次煎煮,遵循先“武”后“文”的原则,开始用大火,煮沸后改用小火,保持微沸状态,为防止药物被煎糊,煎煮过程中应不断用玻璃棒进行搅拌。第一次煮沸20 min后用脱脂纱布过滤,收集头煎滤液约2 500 ml。第二次煎煮以刚好浸没药材,煮沸15 min后收集滤液约2 000 ml,然后将头煎和二煎得到的滤液合并、浓缩。制成生药浓度为1 g/ml的丹参水提液。
1.2.2 试剂
谷丙转氨酶(GPT)试剂盒(南京建成生物工程研究所,货号C009-1,批号201811)、谷草转氨酶(GOT)试剂盒(南京建成生物工程研究所,货号C010-1,批号201811)、血尿素氮(BUN)试剂盒(南京建成生物工程研究所,货号C013-2,批号201811)、血清总蛋白(TP)试剂盒(南京建成生物工程研究所,货号A045-4,批号201811)。
AG 135电子天平(赛多利斯公司)、高速冷冻离心机(Thermo Fisher 货号75004380)、多功能酶标仪(varioskan flash ,美国)、移液枪(TopPette 单道移液枪)、恒温培养箱(北京中兴伟业仪器有限公司)。
试验选取120 只状态良好、体重均匀的1 日龄日本雏期鹌鹑,随机分为4 个组,每组3 个重复,每个重复10 只。Ⅰ组为空白对照组,不对其饮用水做处理;Ⅱ组为低剂量组,在饮用水中按照2%添加丹参水提液;Ⅲ组为中剂量组,在饮用水中按照4%添加丹参水提液;Ⅳ组为高剂量组,在饮用水中按照8%添加丹参水提液。试验从雏鸡1 日龄开始,试验期35 d。
饲养方式采用3 层叠层式笼养,自由饮水,自由采食粉料。育雏期的鹌鹑对温度敏感,因此要做好保温工作,试验按照1~3 日龄35~38 ℃,4~7 日龄33~35 ℃,8~14 日龄30~33 ℃。室内恒温保持在28~30 ℃为宜。育雏舍内及育雏设备的消毒和防疫是保证鹌鹑生长健康的重要因素之一,保证鹌鹑舍内保温隔热性能好,湿度合理,空气好采光好通风好。育雏期从1 d 饲喂5 次(每隔3 h 一次)逐渐过渡到1 d 3 次(每隔5 h 一次),每天早上7:00 饲喂第一次,由同一组人员饲养,减少鹌鹑的应激。
育雏期鹌鹑的免疫程序是保证鹌鹑健康生长的必要程序,免疫程序如下:7 d,新城疫传染性支气管炎二联苗,二倍量滴鼻点眼;12 d,法氏囊多价苗,二倍量饮水;19 d 新城疫Ⅳ系,二倍量饮水。基础日粮及营养水平见表1。
表1 基础日粮及营养水平(以风干基记)
1.6.1 生长性能测定
试验期间每天观察、记录各组试验鹌鹑的精神、活动、采食及饮水等基本情况。试验全程监测记录各组鹌鹑的死亡情况,并在试验第35 d 称量鹌鹑体重,计算平均日增重。按如下公式计算:平均日增重=(终末体重-初始体重)/饲养日龄。
1.6.2 脏器指数测定
分别于试验第35 d,每组每个重复随机选取8 只,解剖并分离心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、法氏囊、胸腺,剥离周围脂肪后用滤纸吸干水分后称重。按如下公式计算:器官指数(g/kg)=器官重(g)/体重(kg)
1.6.3 血清生化指标监测
分别在试验第35 d,每组每个重复随机选取8只,翅静脉采血1 ml,置于无抗凝剂的采血管中,静置2 h,3 000 r/min 离心10 min,分离血清,置于-20 ℃保存备用。用试剂盒测定血清GPT、GOT、BUN、TP含量。
试验数据利用SPSS19.0 单因素方差分析(oneway ANO-VA),用Duncan's 法多重检验分析组间差异显著性,数据以“平均数±标准差”组成,P<0.05作为差异显著性判断标准。
整个试验过程鹌鹑未出现死亡或食欲不振、精神萎靡等异常情况,所有鹌鹑采食和饮水情况正常。
表2 丹参水提液对生长性能的影响(g/只)
由表2可知,与空白组相比,在饮用水中添加低、中、高水平的丹参水提液后,鹌鹑体重分别提高了5.4%、4.4%、5.2%,差异显著(P<0.05);平均日增重分别提高了7%、5.7%、6.7%,差异显著(P<0.05)。
由表3可得,与空白组相比,中剂量和高剂量组鹌鹑心脏、肝脏、肺脏、肾脏指数均显著性的降低(P<0.05),低剂量组心脏、肝脏指数有所降低但并不显著(P>0.05),肾脏指数显著降低(P<0.05)。在饮用水中添加低、中、高水平的丹参水提液,鹌鹑的胸腺指数分别提高了4.3%、8.7%、25%(P<0.05);各试验组的法氏囊指数差异不显著(P>0.05);中剂量组和高剂量组脾脏指数较空白组分别提高了70.9%、90.9%,差异显著(P<0.05)。
表3 丹参水提液对脏器指数的影响(g/kg)
表4 丹参水提液对血清生化指标的影响
由表4可知,中剂量组TP含量相比于空白组升高13.60%,差异显著(P<0.05);低剂量组和高剂量组有增加趋势但差异不显著(P>0.05)。对于血清GOT、GPT、BUN 的含量,各试验组之间差异不显著(P>0.05)。中剂量组GOT、GPT 含量和高剂量组GPT、BUN含量均呈下降趋势(P>0.05)。
有研究表明以中草药作为饲料添加剂, 可以明显的改善动物生产性能[11]。虽然目前研究报道丹参对鹌鹑生产性能的影响文章并不多,但有一些关于将丹参作为饲料添加剂在饲料中添加19.5%可以使鸡鸭产蛋率提高10%~15%,增加肉鸡的体重的报道[11-12]。靖吉强等[13]在丹参复方中药制剂对肉鸡生产性能及新城疫抗体效价的影响研究中,给肉鸡饲喂丹参复方中药制剂的结果表明肉鸡的生长性能、抗病能力以及成活率均得到了不同程度的提高。林仁穗等[14]的中草药制剂与丁香罗勒对鹌鹑产蛋性能影响的研究中,在复方中药制剂中添加当归、川芎、山楂、淫羊藿等补气益血等中药能改善鹌鹑精神、羽毛状态,增强机体功能,改善生长性能。本研究结果与上述报道中的结果一致,在鹌鹑饮用水中添加不同水平的丹参水提液,可显著提高鹌鹑日增重,促进鹌鹑的生长,改善鹌鹑的生长性能。丹参活血化瘀、通经止痛,可以促进血液循环, 气为血帅, 血为气母,使气血调畅以令机体功能得以增强,这或许是丹参改善生长性能的原因之一。
脏器指数是反映动物机体系统发育情况的重要指标,脏器指数的高低与脏器发育的正常与否密切相关,脏器发育正常直接决定了脏器的正常功能。此外,脏器指数直接体现了机体的代谢水平,其越高说明脏器的代谢作用越强,有利于机体的发育。现有许多学者研究丹参对脏器作用效果和影响机理,罗红等[15]研究证实丹参的使用可以显著减少细胞中Ⅲ型胶原的生成,从而发挥抗心肌纤维化的作用。肝纤维化发生的关键环节是肝星状细胞的活化,而丹参可以促使肝细胞程序性的死亡,同时抑制肝组织基因的表达,由此达到防治肝纤维化的作用[16-18]。张旭等[19]的研究表明丹参可明显减轻糖尿病大鼠肾纤维化,改善肾功能。这些研究都表明丹参对动物体的作用都是有利的,可以不同程度的改善动物体脏器的状态,从而影响脏器指数。在本研究结果中,与空白对照组相比,丹参低剂量对鹌鹑心脏、肝脏、肺脏和肾脏指数均无显著影响,中剂量和高剂量对脏器指数有降低作用。
免疫器官发育是否良好以及机能强弱直接决定了禽类的免疫水平,Rivas 等[20]和Montzouris 等[21]研究表明,器官指数的高低决定了其中淋巴细胞增殖的程度,可用于评价免疫功能的强弱,其指数越大,表明机体的细胞免疫和体液免疫力越强。胸腺和法氏囊是重要的中枢免疫器官,胸腺的主要功能是产生T淋巴细胞和分泌胸腺素,参与细胞免疫[22-23];法氏囊是B淋巴细胞发育和分化的主要场所,对维持机体的体液免疫功能很重要[24-25]。脾脏是外周免疫器官,主要是参与免疫应答,形成针对血液中抗原的抗体[26]。本试验结果表明,在饮用水中添加低、中、高水平丹参水提液均能促进鹌鹑法氏囊、胸腺和脾脏的发育,从而提高免疫力,增强对疾病的抵抗能力,其中高剂量组效果最显著。
动物机体血清生化指标的变化直接反映了动物健康及代谢情况,血清中总蛋白(TP)主要用于机体能量供给和组织修补,是衡量蛋白质在体内代谢状况的主要指标,在维持血浆渗透压、缓冲血液pH 值等调节机体稳态方面具有重要功能[27]。该试验结果显示丹参水提液可提高鹌鹑血液中的TP 含量,说明在饮用水中添加丹参可以促进鹌鹑机体蛋白质合成代谢增强,组织蛋白沉积能力上升, 氨基酸降解作用减弱。
血清GOT 和GPT 活性是动物机体肝脏功能正常的一种体现,肝细胞受损会导致血中GOT和GPT含量升高,引起肝脏代谢和解毒能力降低,导致机体内的毒素不能及时排出体外。本研究结果表明,饮用水中添加丹参水提液对GOT和GPT的活性无显著影响,说明丹参对鹌鹑肝功能无不良影响。
血清尿素氮(BUN)通过鸟氨酸循环途径生成, 可作为蛋白质、氨基酸代谢的终产物衡量标准。刘彦慈等[28]研究发现BUN 是检测动物体内氨基酸降解状况的重要指标,反映了动物体内蛋白质代谢情况和日粮氨基酸之间的代谢平衡情况。Takahashi S 等[29]的研究发现血液尿素氮含量与蛋白质的利用率之间呈显著的负相关,蛋白质代谢异常时,血液尿素氮浓度升高,蛋白质代谢良好时,血液尿素氮在血清中含量维持在一定范围内。堵光莹等[30]的研究表明当动物机体BUN含量较低时,说明氨基酸代谢稳定,机体内蛋白质合成代谢功能较强,动物日粮中氮利用率高。此外,BUN 含量的高低还是衡量肾功能正常与否的重要指标。正常情况下,BUN的生成和排泄处于动态平衡状态并保持在正常的生理水平;而且肾脏的代偿与储备能力强,只有当肾功能明显受损时,血清中尿素氮才会明显升高。本试验结果显示,低剂量和高剂量组在一定程度上降低了血清BUN含量,说明丹参水提液可以使鹌鹑体内蛋白质的代谢保持在较强状态,提高鹌鹑对日粮中氨基酸的利用率,并保持肾功能正常。
在鹌鹑饮用水中添加一定浓度的丹参水提液可促进鹌鹑机体蛋白质的合成代谢,提高鹌鹑对饲料中氨基酸的利用率,从而促进鹌鹑的生长,提高育雏期鹌鹑的生长性能,可以促进鹌鹑免疫系统器官的发育,增强机体的免疫机能。综合考虑,在鹌鹑的饮用水中添加4%丹参水提液较适宜。