黑木耳液体培养基及培养条件优化*

车星星，许 晶，李素玲，刘 虹

（山西省农业科学院食用菌研究所，山西 太原 030031）

黑木耳[Auricularia auricula(L.ex Hook.) Underw.]，别名木耳、细耳、云耳、黑叶、木蛾，隶属于真菌界（Fungi） 真菌门（Eumycota） 异担子菌纲（Heterobasidiomycetes） 木耳目（Auriculariales） 木耳科（Auriculariaceae） 木耳属（Auricularia）[1-2]。质地柔软、味道鲜美，是一种营养丰富的食用菌，有着“素中之荤”及“菌中瑰宝”之美誉[3-4]；同时，黑木耳也是一种价值很高的药用菌，《本草纲目》中记载木耳治痔、性平、味甘、补气血、止血活血，有滋润、强壮、通便之功能[5]。近年来，随着黑木耳产业设施化和集约化程度的提高，黑木耳栽培企业、合作社和菇农对黑木耳液体菌种培养技术的要求越来越高。通过对黑木耳液体培养基配方进行优化，并在最佳培养基的基础上对培养基的pH、培养温度、培养时间进行筛选，为进一步探讨黑木耳的深层发酵工艺提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 供试菌种

供试菌种为黑15，由山西省农业科学院食用菌研究所提供[6]。

1.2 培养基

1.2.1 母种培养基

PDA 培养基。

1.2.2 液体培养基配方

配方1：马铃薯200 g、麦麸30 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、磷酸二氢钾2.0 g、硫酸镁1.0 g、维生素B 一片，水1 000 mL。

配方2：马铃薯200 g、木屑30 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、磷酸二氢钾2.0 g、硫酸镁1.0 g、维生素B 一片，水1 000 mL。

配方3：马铃薯200 g、玉米粉30 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、磷酸二氢钾2.0 g、硫酸镁1.0 g、维生素B 一片，水1 000 mL。

配方4：马铃薯200 g、棉籽壳30 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、磷酸二氢钾2.0 g、硫酸镁1.0 g、维生素B 一片，水1 000 mL。

配方5（CK）：马铃薯200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、磷酸二氢钾3.0 g、硫酸镁1.5 g，水1 000 mL。

马铃薯、麦麸、玉米粉、木屑、棉籽壳需开水煮沸30 min 后，用纱布过滤，取其过滤液使用。

1.3 试验方法

取250 mL 三角瓶，分别盛装各液体培养基100 mL，121℃高压灭菌30 min，于冷却室冷却后，无菌条件下接入等量母种，静置培养24 h 后置于23℃～30℃，摇床培养7 d。通过测定不同培养基配方、pH、培养温度下黑木耳液体培养基菌丝生物量，确定最佳的液体培养基配方、pH、培养温度。试验设3 次重复。

1.3.1 pH 的测定

三角瓶液体培养基灭菌后，将液体培养基的pH分别调至3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0，接种培养7 d 后测定菌丝体生物量。

1.3.2 培养温度

液体培养基接种后分别置于21℃、23℃、25℃、27℃、29℃、31℃下摇床培养7 d 后，测定菌丝体生物量。

1.3.3 菌丝体生物量测定方法

培养结束后，将每瓶发酵液用蒸馏水冲洗2 次，真空抽滤，收集菌丝体，在60℃下鼓风干燥至恒重，用电子天平称重。

1.3.4 数据处理及统计分析

相关数据采用Excel 2003、DPS 9.0、LSD 法进行数据处理和统计分析。

2 结果与分析

2.1 不同液体培养基处理对黑木耳菌丝生长的影响

不同液体培养基对黑木耳菌丝生物量的影响见表1。

表1 不同液体培养基对黑木耳菌丝生物量的影响Tab.1 Effects of different liquid mediums on mycelial biomass of Auricularia auricula

由表1 可知，从培养液的颜色来看，配方1、配方2 和配方5 澄清，配方3 较差，而配方4 呈浑浊状态；从菌丝球的颜色来看，配方1、配方2 和配方5 菌丝洁白，配方3 菌丝呈浅黄色，而配方4的菌丝呈污黄色；从菌丝球的均匀情况来看，配方1、配方2、配方3 和配方5 分布均匀，配方4 分布较均匀；从菌丝生物量来看，配方1 和配方2 的菌丝生物量差异不显著，但与配方5（CK） 差异显著，分别达1.63 g·100-1mL-1和1.59 g·100-1mL-1；配方4菌丝生物量最少，为1.14 g·100-1mL-1。

2.2 不同pH 液体培养基对黑木耳菌丝生长的影响

不同pH 的液体培养基对黑木耳菌丝生长的影响见表2。

表2 不同pH 液体培养基对黑木耳菌丝生物量的影响Tab.2 The effects of different pH on mycelial biomass of Auricularia auricula

从表2 可以看出，黑木耳液体菌种菌丝在pH 5.0～8.0 之间，均可以较好地生长。pH 7.0 时菌丝生长速度最快，菌丝生物量最多，达1.60 g·100-1mL-1，培养液颜色澄清、菌丝球生长势强、大小均匀；pH 6.0 时菌丝生长情况较好，与pH 7.0 时相比差异不显著；当pH＞7.0 时，菌丝生长速度随着pH 的升高而减慢，生长势逐渐减弱，生物量随之降低，菌丝球也变得不再均匀；而当pH＜6.0 时，菌丝生长速度随着pH 的降低而减慢，生长势逐渐减弱，生物量随之降低，菌丝球也变得不再均匀。

2.3 不同培养温度对黑木耳菌丝生长的影响

不同培养温度对黑木耳菌丝生长的影响结果见表3。

表3 不同培养温度对黑木耳菌丝生物量的影响Tab.3 The effects of different temperature on mycelial biomassof Auricularia auricular

不同培养温度对黑木耳菌丝的生长有很大的影响。从表3 可以看出，黑木耳菌丝生长的适宜温度在25℃～27℃之间，而以25℃为最适宜温度。25℃下，菌丝生长势强、大小和分布均匀、菌丝生物量最高，达1.62 g·100-1mL-1，除与27℃相比差异不显著外，与其他处理相比差异均达显著水平。而当培养温度高于27℃时，菌丝生长缓慢或不生长，生长势也逐渐减弱，菌丝生物量随之减少，温度过高菌丝体活力下降，易感染杂菌。

3 结论与讨论

在黑木耳液体培养过程中，不同的配方对黑木耳菌丝的生长影响各不相同。试验结果表明，配方1 最适宜于黑木耳液体培养，菌丝生长速度快，长势强，菌丝生物量高，与其他配方相比差异达显著水平；配方2 虽不及配方1，但综合性状表现良好，除了与配方1 相比菌丝生物量差异不显著外，与其他配方的差异均达显著水平，也是值得参考的黑木耳液体培养基的配方。

不同pH 对黑木耳菌丝的生长的试验结果表明，黑木耳液体菌种最适宜的pH 为6.0～7.0，偏酸或偏碱均不适宜黑木耳菌丝的生长。

黑木耳液体菌种的最适宜培养温度为25℃～27℃，温度过低或过高均可以使菌丝体活力下降，并容易感染杂菌。