髓源性免疫抑制细胞与晚期胃癌化疗疗效及预后的关系

李 赟，李 勇，巩 平，李小英，李 娜,2*

(1.石河子大学医学院第一附属医院 肿瘤内科，新疆 石河子 832000; 2.遂宁市中心医院 肿瘤二病区，四川 遂宁 629000; 3.遂宁市中心医院 放射科，四川 遂宁 629000)

胃癌(gastriccancer)是中国常见的恶性肿瘤之一。髓源性免疫抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells，MDSCs)是由未成熟的髓细胞组成的异质性细胞群，且目前普遍认为CD33+CD11b+HLA-DR-是其标志特征[1]。此外，早在2012年已证实，在胃癌患者外周血中MDSCs比例升高，但国内外对晚期胃癌外周血中MDSCs与化疗疗效关系的研究较少。本研究通过分析晚期胃癌化疗前后MDSCs比例的变化，以期为晚期胃癌化疗疗效监测和预后评价寻找特异性监测指标。

1 材料与方法

1.1 材料:收集2018年7月1日至2019年2月28日在石河子大学医学院第一附属医院35例明确诊断为晚期胃癌化疗前后外周血；PE-CY7标记的抗CD11b抗体、PE标记的抗CD33抗体和FITC标记的抗HLA-DR抗体(eBioscience公司)。

上述患者标本收集过程均已获取患者知情同意，并签署知情同意书，且获得本单位伦理委员会的审查批准。

1.2 方法

1.2.1 流式细胞计量术检测化疗前后胃癌患者外周血MDSCs的比例：提取外周血单核细胞(peripheral blood mononucleocytes，PBMCs)，取50 μL制备好的PBMCs置于离心管，分别加入5 μL CD11b、CD33、HLA-DR抗体，并加入磷酸盐缓冲液(phosphatebufferedsaline，PBS)，使最终体积达100 μL，4 ℃避光孵育30 min，随后加入2 mL PBS，1 000 r/min离心5 min，弃上清液后加入300 μL PBS，上机检测。

1.2.2 分析MDSCs高低对晚期胃癌患者预后的关系：从患者确诊随访至2019年4月30日。根据入组患者化疗前外周血中MDSCs比例，以中位MDSCs比例值为最佳截断值，分为高、低组。比较两组的无进展生存期(progression free survival, PFS)差异。

2 结果

2.1 晚期胃癌患者化疗前外周血MDSCs比例与临床资料的关系:晚期胃癌患者外周血化疗前MDSCs比例与患者性别、年龄、肿瘤大小不相关，而与肿瘤有无远处转移、TNM分期(tumornodemetastasis，TNM)和肿瘤分化程度相关，且肿瘤TNM分期越高，MDSCs比例也越高(表1)。

表1 晚期胃癌患者外周血前MDSCs比例与临床资料的关系

*P<0.05 compared with moderate ;**P<0.001 compared with No;#P<0.001 compared with Ⅳ.

2.2 MDSCs化疗前后的变化及不同疗效组表达差异:根据标准一线化疗，2周期后疗效评效，其中疾病进展(progressive disease，PD)12例、稳定(stabledisease，SD)12例、部分缓解(partialresponse，PR)11例。配对t检验分析显示，化疗后MDSCs比例较化疗前变化显著，其中PD组化疗前MDSCs比例显著低于化疗后 (P< 0.05)，而SD和PR组化疗前MDSCs比例显著高于化疗后，且PR组尤为明显 (P< 0.05)(图1)。PD、SD和PR组各1例患者MDSCs流式分析图(图2)。

2.3 化疗前MDSCs高低与患者预后的关系:随访时间为1～26个月，中位随访时间为5个月。在随访过程中，有11位患者出现了截尾数据，以中位MDSCs比例值38.10%为最佳截断值，其中，在高比例MDSCs组中，有4例最后1次随访未发现肿瘤进展，低比例MDSCs组有7例最后1次随访未发现肿瘤进展。低比例MDSCs组患者中位PFS(12.0±0.8)月明显长于高比例组(3.0±0.6)月(P< 0.01)(图3)。

A-D.indicated the proportion of MDSCs in the total sample group, PD group, SD group and PR group, respectively, before and after chemotherapy;*P< 0.05,**P< 0.001 compared with before chemotherapy

Representative flow cytometry test of 1 case in different efficacy groups before and after chemotherapy图2 不同疗效组化疗前、后外周血中MDSCs比例Fig 2 Proportion of MDSCs in peripheral blood before and after chemotherapy in different efficacy groups

图3 高、低MDSCs两组肿瘤患者PFS生存曲线Fig 3 PFS survival curve of tumor patients with high and low MDSCs

3 讨论

肿瘤发展过程中存在多种因素和多种免疫调节步骤，致使肿瘤发生发展过程中免疫调节机制的复杂化。MDSCs在肿瘤发生、发展中起重要的免疫抑制作用。肿瘤化疗可以通过产生一系列不同的机制来增强机体抗肿瘤免疫能力。既往研究证实MDSCs与肿瘤的进展及化疗疗效相关[2]。

本文通过研究发现，MDSCs比例与胃癌肿瘤患者的疾病进展密切相关；化疗能降低MDSCs比例，减低MDSCs介导的免疫抑制作用。其中，化疗后SD组和PR组MDSCs比例降低，而化疗后PD组MDSCs比例却较化疗前升高，这与报道[3]研究结果一致。可见化疗疗效越好MDSCs比例降低越明显。此外，发现低比例MDSCs组患者PFS明显长于高比例组，与报道一致[4]。可见，在晚期胃癌化疗前高比例MDSCs患者的预后较差。

综上所述，晚期胃癌外周血中MDSCs比例与晚期胃癌的预后呈负相关，且化疗疗效越好，MDSCs比例降低越明显。因此，MDSCs可作为晚期胃癌化疗疗效及预后的监测指标。