郑州市中原区汉族育龄女性MTHFR和MTRR基因多态性

郭婷婷，刘 芳，归 婧，杨小风

(郑州大学附属郑州中心医院 妇产科，河南 郑州 450000)

中国是出生缺陷高发国家，每年约有90万缺陷儿出生。研究证实孕妇机体叶酸水平不足是导致出生缺陷的主要原因，叶酸缺乏一般由补充不足和利用能力差两方面因素引起;遗传因素会影响叶酸的利用能力，如叶酸相关代谢基因功能异常，即便按正常量补充叶酸，也会造成机体叶酸水平不足。个体遗传因素不同会导致机体对叶酸代谢能力的差异，利用基因检测技术筛查出叶酸利用能力差的高风险人群，依据检测结果合理补充叶酸，可大大降低神经管缺陷的发病风险，另外也可降低孕妇贫血、妊娠高血压、早期流产、早产等的发生风险[1-3]。本研究从影响叶酸代谢相关的基因(MTHFR、MTRR)多态性检测出发，分析育龄女性叶酸代谢能力的强弱，从而为孕期叶酸补充指导提供遗传学依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2017年12月至2018年10月来郑州大学附属郑州中心医院妇产科门诊进行孕前或孕期叶酸代谢能力检测的育龄女性，年龄17～48岁，平均年龄(28.6±3.9)岁。所有如选者均郑州市中原区的汉族人，无血缘关系和异族通婚史。在签署孕前优生检测知情同意书后，采集静脉血进行DNA 抽提，共获得有效样本2 652例。

1.2 方法

采集受检测女性的外周血，抽提各样本中DNA。采用Taqman-MGB方法测定各基因位点的SNP分型，相关仪器和试剂均购买自美国AB公司。分别对MTHFRC667T、A1298C、MTRRA66G这3个位点进行荧光定量PCR检测。每个PCR反应体系共计为10 μL，其中加入3.5 μL去离子水，1 μL浓度为20 ng/μL的DNA模板，0.5 μL 20×Taqman-MGB 探针，5 μL 2×Taqman Universal Master Mix。反应条件：95 ℃预变性10 min，92 ℃变性15 s，60 ℃延伸1 min，20个循环;89 ℃变性15 s，60 ℃延伸90 s，30个循环。反应结束后，把各反应孔放置于ABI7900 型荧光定量PCR仪上，分别读取各反应孔的终点荧光，然后利用分析软件检测3个位点中的基因分型。

1.3 统计学分析

对本研究人群样本进行Hardy-Weinberg遗传平衡检验，然后使用SPSS19.0统计软件进行统计学处理，并采用拟合优度χ2检验。

2 结果

样本人群中MTHFR、MTRR的基因频数与基因频率统计分析，统计全部育龄女性检测的MTHFRC667T、MTHFRA1298C、MTRRA66G位点，根据年龄将每个位点的基因型、基因频率分为两组，MTHFRC667T两年龄组均以纯合突变CT型为主，但30岁以下育龄女性MTHFR野生型所占比例更高 (表1)。MTHFRA1298C、MTRRA66G位点中两年龄组均以野生型为主，但30岁以上育龄女性野生型所占比例更高 (表2，3)。

3 讨论

中国是出生缺陷高发的国家，叶酸代谢障碍与胎儿神经管畸形、先天性心脏病、习惯性流产及唐氏综合征等多种疾病密切相关。尽管现在国家采取了免费发放叶酸药物的福利措施，但仍有部分妇女即便补充了叶酸，胎儿仍会发生神经管缺陷。主要原因是叶酸代谢高风险人群对叶酸的利用能力低，常规剂量的叶酸补充满足不了需求。

表1 郑州市育龄女性MTHFR C677T位点基因型、等位基因频数与频率分布

表2 郑州市育龄女性MTHFR A1298C 位点基因型、等位基因频数与频率分布

表3 郑州市育龄女性MTRR A66G位点基因型、等位基因频数与频率分布

中国地域辽阔，各地饮食习惯、自然环境等差别较大，各民族和人群分布情况复杂，MTHFRC667T、MTHFRA1298C、MTRRA66G 3个位点基因型频率分布有很大地域差异，本研究统计了尚志、辽源、吉林、乌鲁木齐、天津、江苏等11个地区，并与本地区数据进行比较，郑州市中原区育龄女性MTHFR C667T位点基因型与尚志、辽源、吉林、乌鲁木齐、天津、江苏、张家港、眉山、雅安、佛山、珠海等地不一致；MTHFRA1298C位点基因型，郑州市中原区与乌鲁木齐、天津、张家港、眉山、雅安、珠海等地不一致，与尚志、辽源、吉林、郑州本地、江苏、佛山等地一致；MTRR位点基因型，郑州市中原区与乌鲁木齐、张家港、珠海等地不一致，与尚志、辽源、吉林、天津、郑州、江苏、眉山、雅安、佛山等地一致。表明本地区MTHFRC667T多态性分布具有明显地域特征。MTHFR是叶酸代谢通路的关键酶之一，C677T位点突变是中国人群中最常见且研究最多的位点，C突变为T使得丙氨酸被缬氨酸代替，从而引起该酶活性的改变，其中杂合型酶活性降至65%，纯合型降至30%，增加了出生缺陷的发生，也增加了孕期可能发生习惯性流产、妊娠期高血压等疾病的风险。研究表明，与CC型野生型相比，携带TT基因型是孕妇生育神经管畸形患儿、先天性心脏病患儿的重要危险因素。

因此，对育龄女性进行叶酸代谢能力的遗传基因检测，筛选出叶酸代谢能力异常的高危人群，对不同基因型的育龄妇女制定个体化的叶酸增补方案是未来临床发展的必然趋势。根据本研究结果，建议育龄女性进行MTHFR、MTRR位点基因多态性检测，并结合孕产史、家族史、饮食结构等综合评估叶酸代谢能力，给予合理的叶酸增补方案，对叶酸代谢障碍的高危孕妇给予重点关注。本文对郑州市中原区MTHFR、MTRR基因多态性的研究有助于制定更合理的育龄女性叶酸增补方案，对突变基因型的妇女进行早期干预，从一级预防的水平减少出生缺陷，减少孕期疾病的发生。