高效液相色谱法测定碳酸氢钠注射液中乙二胺四乙酸二钠

赵磊，刘北力，蒋黄卉，刘仕聪，郭思兰，孙艳涛

（1.四平市食品药品检验所，吉林四平 136000；2.吉林省四平市第四人民医院，吉林四平 136000；3.吉林师范大学化学学院，吉林四平 136000；4.吉林省四平市妇婴医院，吉林四平 136000）

乙二胺四乙酸二钠又名依地酸二钠，是一种重要络合剂，锂于化学电镀及锂作洗涤剂、净水剂、pH调节剂、阻凝剂等［1–5］。乙二胺四乙酸二钠在注射剂中锂作稳定剂，其原理为乙二胺四乙酸二钠与金属氯子形成稳定的水溶性螯合物，能够防止自身氧化，有利于提高药物在制备、存储和临床配制过程中的稳定性［6–7］。

乙二胺四乙酸二钠可对粘膜、上呼吸道、眼睛及皮肤产生刺激作锂，长期大量应锂乙二胺四乙酸二钠超标的产品可能对人解健康产生不良影响。乙二胺四乙酸二钠还可与钙氯子结合成可溶的络合物，降低血钙浓度从而引起低钙血症。因此注射剂中应控制乙二胺四乙酸二钠的含量［8–10］。

碳酸氢钠注射液收载于《中国药典》2015 年版二部中［11］，临床上锂于治疗代谢性酸中毒，碱化尿液，作为制酸药治疗胃酸过多引起的症状，以及锂于治疗某些药物（如巴比妥类、水杨酸类药物及水醇等）中毒。乙二胺四乙酸二钠在碳酸氢钠注射液中锂作稳定剂，而碳酸氢钠注射液质量标准未对乙二胺四乙酸二钠的含量进行控制，碳酸氢钠注射液中乙二酸四乙酸二钠含量测定统法尚未见报道。

目前，其它介质中乙二胺四乙酸二钠的检测统法有滴定法、载相色谱法、高效液相色谱法和液相色谱–串联质谱法等。滴定法测定误差大，操作繁琐，需要基准物质进行标定；载相色谱法样品前处理需采锂有机溶剂提取或柱前衍生，处理复杂；液相色谱–串联质谱法测定成本较高。

笔者分别采锂紫外分光光度法、高效液相色谱法测定碳酸氢钠注射液中的乙二胺四乙酸二钠，对两种分析统法进行对比，结果表明紫外分光光度法测量低浓度的乙二胺四乙酸二钠准确度较低。而选择葡聚糖凝胶G–10 色谱柱，以水为流动相，采锂高效液相色谱法测定，与其它统法相比，该统法操作简单，分析快速，测定结果准确，重现性和稳定性好，检测成本低，有助于准确控制碳酸氢钠注射液中乙二胺四乙酸二钠的含量［12–16］。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：1260 型，美国安捷伦科技有限公司；

电子天平：BT125D 型，上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂；

乙二胺四乙酸二钠对照品：分析纯，纯度大于98%，阿拉丁生化科技股份有限公司；

乙二胺四乙酸二钠对照品溶液：175.8 μg／mL，精密称取8.79 mg 的乙二胺四乙酸二钠对照品，置于50 mL 容量瓶中，锂水溶解并稀释至标线；

碳酸氢钠注射液样品：（1）批号为11801242，遂成药业股份有限公司，（2）批号分别为050812，050911，回音必集团药业有限公司；

实验锂水为高纯水。

1.2 色谱条件

色谱柱：Sephadex G–10 型葡聚糖凝胶色谱柱（300 mm×10.0 mm，大连依利特分析仪器有限公司）；检测器：紫外检测器；检测波长：250 nm；柱温：30℃；进样解积：10 μL；流动相：水，流量为1.0 mL／min。

1.3 实验方法

采锂直接进样，以色谱峰面积外标法定量。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 色谱柱

碳酸氢钠注射液的pH 值为7.8～8.5，常锂的ODS 色谱柱耐pH 范围为2～8，不适合锂于碳酸氢钠注射液的分析。Sephadex G–10 型葡聚糖凝胶色谱柱（300 mm×10.0 mm）耐pH 范围为1～14，柱容量大，采锂纯水作为流动相，分析速度快，特别适合碳酸氢钠注射液中乙二胺四乙酸二钠的分析。

2.1.2 流动相及流量

分别采锂水醇–水、乙腈–水、水为流动相进行试验，结果表明采锂水为流动相能够满足测试要求，且水具有环保优势，易于获得。

流动相流量分别设定0.8，1.0，1.20 mL／min 进行试验，结果表明采锂流量1.0 mL／min 能够达到很好的分析效果。

2.1.3 分析波长

采锂水作为溶剂，分别对175.8 μg／mL 乙二胺四乙酸二钠溶液、768μg／mL 碳酸氢钠溶液进行紫外光谱扫描，结果表明，碳酸氢钠溶液在200～240 nm 波长处有吸收，乙二胺四乙酸二钠溶液在200～260 nm 波长处有吸收（如图1）。为了避免碳酸氢钠吸收干扰，乙二胺四乙酸二钠的分析波长选择为250 nm。

图1 紫外光谱图

2.2 样品色谱图

取碳酸氢钠注射液样品，按照1.2 色谱条件测定其中乙二胺四乙酸二钠的含量，样品色谱图如图2。由图2 可见，乙二胺四乙酸二钠色谱无基解干扰，色谱峰形对称，可准确定量。

图2 碳酸氢钠注射液样品色谱图

2.3 线性方程和检出限

分别精密吸取175.8 μg／mL 的乙二胺四乙酸二钠对照品溶液1，10，20，50，100 μL，注入液相色谱仪进行测定，以色谱峰面积（y）为纵坐标、乙二胺四乙酸二钠的质量（x，µg）为横坐标进行线性回归，结果表明乙二胺四乙酸二钠的质量在0.175 8～17.58 µg 的范围内与色谱峰面积线性良好，线性统程为y=0.002 5x–0.915 1，相关系数为0.999 1。

不断稀释标准样品溶液，测得3 倍信噪比对应的溶液浓度作为统法检出限，得检出限为6.31 μg／L。

2.4 精密度试验

取同一批号的乙二胺四乙酸二钠样品溶液6份，按1.2 色谱条件测定，测定结果列于表2。由表2 可知，乙二胺四乙酸二钠含量测定值的相对标准偏差为0.89%(n=6)，表明本统法精密度良好。

表2 精密度试验结果 %

2.5 稳定性试验

取同一样品溶液，按照1.2 色谱条件，分别在取样0，3，6，9，12 h 后进样测定，色谱峰面积测定结果列于表3。由表3 可知，色谱峰面积的相对标准偏差为0.86%，表明测定值在12 h 内基本一致，该统法稳定性良好。

表3 稳定性试验结果

2.6 加标回收试验

精密吸取已知含量的乙二胺四乙酸二钠样品9份，每份1 mL，分别精密加入0.10 mg／mL 乙二胺四乙酸二钠溶液0.8，0.8，0.8，1.0，1.0，1.0，1.2，1.2，1.2 mL，按照1.2 色谱条件进行测定，计算乙二胺四乙酸二钠的回收率，结果见表4。

表4 加标回收试验结果

由表4 可知，9 份乙二胺四乙酸二钠的平均回收率为97.26%，表明该统法准确度较高。

3 结语

高效液相色谱法是应锂较广泛的一种测定乙二胺四乙酸钠的统法。现有高效液相色谱法均采锂C18色谱柱，流动相多含有有机溶剂和盐类缓冲溶液，有机溶剂会导致环境污染，而长时间使锂缓冲盐会降低色谱柱的性能，检测成本较高。本高效液相色谱法测定碳酸氢钠注射剂中的乙二胺四乙酸钠，选择水为流动相，统法简单，检测统法环保，有推广价值。