地中海贫血孕妇基因学诊断结果分析

李菁 陈丽珍

[摘要] 目的 探討地中海贫血孕妇基因学诊断结果，提高分娩质量，有效防控重型地中海贫血患儿的出生。 方法 选取2019年5月～2020年2月在我院门诊进行血常规初筛检测提示贫血的孕妇50例为研究对象，采集夫妻双方标本，通过聚合酶链反应（PCR）+反向斑点杂交法检测确认地中海贫血基因类型，对地中海贫血阳性标本进行基因诊断，判断其是否患有地中海贫血及所属基因类型，对夫妻为同型地中海贫血者行产前诊断，统计地中海贫血筛查结果、基因诊断结果及产前诊断结果。 结果 （1）50例孕妇地中海贫血筛查中阳性12例（24.00%），其中α-地中海贫血8例（16.00%），β-地中海贫血3例（6.00%），αβ混合地中海贫血1例（2.00%）。（2）α-地中海贫血确诊7例（14.00%），均为缺失型，其中-SEA 3例，-α3.7 2例，-α4.2 2例;β-地中海贫血确诊2例（4.00%），CD41-42、IVS-Ⅱ-654各1例;αβ混合地中海贫血（-α3.7合并-28/N）确诊1例（2.00%）。（3）夫妻为同型地中海贫血3例，经产前基因诊断，重症地中海贫血1例（33.33%），自愿终止妊娠后再次基因诊断与产前基因诊断结果相符。 结论 通过对孕妇实施地中海贫血产前基因诊断，有助于及时发现重症地中海贫血胎儿，提高分娩质量。

[关键词] 孕妇;地中海贫血;基因学;诊断

[中图分类号] R556          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2020）31-0066-03

[Abstract] Objective To investigate the genetic diagnosis results of pregnant women with thalassemia， improve the delivery quality of pregnant women， and effectively prevent and control the birth of children with severe thalassemia. Methods A total of 50 pregnant women with anemia admitted to our hospital and indicated by blood routine screening test from May 2019 to February 2020 were selected as the research objects， and samples from both husband and wife were collected. The gene types of thalassemia were confirmed by polymerase chain reaction（PCR） combined with reverse dot blot， and the positive samples of thalassemia were diagnosed to determine whether there were thalassemia and their gene types. The couple with the same type of thalassemia were diagnosed prenatal. Meanwhile， thalassemia screening results， genetic diagnosis results and prenatal diagnosis results were statistically recorded. Results （1）12 cases（24.00%） of 50 pregnant women were positive for thalassemia screening， including 8 cases（16.00%） of α-thalassemia， 3 cases（6.00%） of β-thalassemia and 1 case（2.00%） of αβ mixed thalassemia.（2） 7 cases（14.00%） of α-thalassemia were diagnosed as deletion type， including 3 cases of-SEA， 2 cases of -α3.7 and 2 cases of -α4.2. Meanwhile， 2 cases（4.00%） of β-thalassemia were diagnosed， including 1 case of CD41-42 and 1 case of IVS-Ⅱ-654 respectively. And 1 case（2.00%） of αβ mixed thalassemia（-α3.7 complicated with-28/N） was diagnosed. （3）There were 3 cases of thalassemia of the same type， and 1 case（33.33%） of severe thalassemia was diagnosed by prenatal gene diagnosis. The results of genetic diagnosis after voluntary termination of pregnancy were consistent with those of prenatal gene diagnosis. Conclusion Prenatal gene diagnosis of thalassemia for pregnant women is helpful to discover fetuses with severe thalassemia in time and improve the delivery quality.

[Key words] Pregnant woman; Thalassemia; Genetics; Diagnosis

地中海贫血为临床上常见的一种遗传性血液病，广东、广西及其他沿海地区为该病的高发地区，轻型与静止型一般不会表现出临床症状，地中海贫血可表现为轻到中度贫血，重型地中海贫血新生儿往往难以存活，中间型地中海贫血新生儿通常在6个月后会出现贫血，且大多数需要依靠输血来维持生命[1-2]。因此对育龄人群，特别是孕妇，应当进行地中海贫血产前筛查及基因诊断，对高风险的妊娠应当进行产前诊断，尽可能减少重型地中海贫血新生儿的出生[3]。本研究对2019年5月～2020年2月我院门诊年龄18～39岁江西省景德镇市孕龄为3个月的贫血孕妇50例進行地中海贫血基因诊断，为地中海贫血的临床咨询及防控提供依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年5月～2020年2月我院门诊血常规初筛检测提示贫血的孕妇50例作为研究对象，所有患者均根据血常规及血红蛋白（Hemoglobin，Hb）电泳结果，判断地中海贫血筛查阳性或阴性，如果血红蛋白区带异常或HbF升高及HbA2>3.5%，则可判断为阳性;红细胞平均血红蛋白量（Mean corpuscular hemoglobin，MCH）<27 pg及平均红细胞体积（Mean corpuscular volume，MCV）<82 fl可诊断为地中海贫血筛查阳性[4]。纳入标准：（1）年龄18～39岁;（2）江西省景德镇市人;（3）孕龄≥3个月[5]。排除标准：（1）合并重要器官功能障碍者;（2）存在精神行为异常者[5]。本研究获得我院医学伦理委员会批准，且所有孕妇均签署知情同意书。

1.2方法

抽取EDTA抗凝外周静脉血，基因诊断采用潮州凯提供的地中海贫血基因诊断试剂盒，其中α-地中海贫血采用跨越断点PCR（Gap-PCR）法，β-地中海贫血采用PCR-RDB法，在导流杂交仪上将扩增产物与标记不同突变型或缺失型地中海贫血探针的尼龙膜进行导流杂交，检测地中海贫血基因类型，具体操作步骤严格按照说明书进行。检测3种常见缺失型α地中海贫血（-SEA、-α3.7和-α4.2）、3种突变型α地中海贫血（CS、WS和QS）及11种突变型β地中海贫血（CD41-42、CD43、IVS-Ⅱ-654、CD17、CD14-15、-28、-29、CD71-72、βE、IVSⅠ-1、CD27-28）。

夫妻双方均携带同一类型地中海贫血基因，且至少其中一方为中间型或轻型地中海贫血为产前诊断地中海贫血的条件，同时在妊娠16～24周抽取羊水，妊娠24～32周抽取胎儿脐带血对胎儿地中海贫血基因进行检测，若为中间型地中海贫血，则立即告知孕妇及其家属，并建议尽量避免胎儿出生;若为重型地中海贫血，则建议及时终止妊娠。

1.3 观察指标

观察50例贫血孕妇的地中海贫血筛查情况、地中海贫血基因确诊情况及产前基因诊断情况。

1.4 统计学方法

数据应用SPSS22.0统计学软件进行分析，计数资料用[n（%）]表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1地中海贫血筛查结果

50例孕妇地中海贫血筛查阳性12例（24.00%），其中α-地中海贫血8例（16.00%），β-地中海贫血3例（6.00%），αβ混合地中海贫血1例（2.00%）。见表1。

2.2地中海贫血基因确诊结果

α-地中海贫血确诊7例（14.00%），均为缺失型，其中-SEA 3例，-α3.7 2例，-α4.2 2例;β-地中海贫血确诊2例（4.00%），CD41-42、IVS-Ⅱ-654各1例;αβ混合地中海贫血（-α3.7合并-28/N）确诊1例（2.00%）。见表2。

2.3产前基因诊断结果

夫妻为同型地中海贫血3例，经产前基因诊断，重症地中海贫血1例（33.33%），对家属进行充分遗传咨询后，自愿终止妊娠，且再次基因诊断与产前基因诊断结果相符。

3讨论

地中海贫血又被称为海洋性贫血，是一种因珠蛋白肽链合成障碍所引起的遗传性溶血性贫血。世界卫生组织（World health organization，WHO）调查研究结果显示，全球范围内携带血红蛋白病致病基因者大约占4.5%，每年至少有20万的重型地中海贫血新生儿出生[6]。目前地中海贫血的治疗费用昂贵，成为患者及其家庭的巨大经济负担。地中海贫血为危害人类健康的6种常见遗传病之一，对人类健康造成严重影响[7]，如在妊娠期合并地中海贫血，则会导致胎儿生长受限，出现早产，甚至导致胎死宫内等，同时还可能导致内分泌功能异常、心脏病变、血栓栓塞等并发症的发生。根据地中海贫血基因合成障碍肽链的不同，可以将其分为α-地中海贫血与β-地中海贫血[8]。α-地中海贫血的主要病因是α-珠蛋白基因缺失，β-地中海贫血的主要病因为β-珠蛋白基因突变[9]。通过及时进行产前筛查、产前诊断，并进行有效治疗妊娠合并地中海贫血，对于母胎妊娠结局的改善意义重大，还可有效指导临床产前诊断及干预，避免重型地中海贫血新生儿的出生。

本研究中，先对所有入选孕妇进行地中海贫血筛查，再对筛查阳性的孕妇进行基因学诊断。结果显示，50例孕妇地中海贫血筛查阳性12例（24.00%），其中α-地中海贫血8例（16.00%），β-地中海贫血3例（6.00%），αβ混合地中海贫血1例（2.00%）。并通过基因学诊断，α-地中海贫血确诊7例（14.00%），均为缺失型，其中-SEA 3例、-α3.7 2例、-α4.2 2例;β-地中海贫血确诊2例（4.00%），CD41-42、IVS-Ⅱ-654各1例;αβ混合地中海贫血（-α3.7合并-28/N）确诊1例（2.00%）。本研究中α-地中海贫血均为缺失型，推测江西地区α-地中海贫血以缺失型为主。现阶段全球发现β-地中海贫血大约有200多种突变，其中我国90%以CD41-42、CD17、IVS-Ⅱ-654-28、βE、CD71-72、CD43、-29这7种突变型为主。本研究中2例β-地中海贫血分别为CD41-42、IVS-Ⅱ-654。本研究中地中海贫血的筛查阳性率及确诊率均较高，且基因类型也与其他研究有一定差异性[10-12]，可能是由于地中海贫血的地区差异性，也可能与本研究的样本量较少有关。

本研究中地中海贫血筛查诊断效果明显，且筛查时只需行血红蛋白电泳及血细胞分析，检测方便，操作技术要求不高，可操作性强[13]。当前血红蛋白电泳、血细胞分析筛查地中海贫血的费用较低，而直接进行地中海贫血基因检测的费用则较高[14]。故先进行地中海贫血的筛查可有效减少费用，减少医疗支出。通过判断孕妇的地中海贫血类型，发现高危孕妇，然后再对其丈夫进行基因诊断，及时发现同型地中海贫血夫妻，再获取羊水、脐带血进行产前基因诊断，可及时发现重症地中海贫血胎儿，从而及时终止妊娠，提高分娩质量[15]。本研究通过产前基因诊断，发现1例重症地中海贫血胎儿，对家属进行充分遗传咨询后，自愿终止妊娠，再次基因诊断与产前基因诊断结果相符，进一步说明基因学诊断在地中海贫血孕妇中的良好应用价值。

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（收稿日期：2020-05-29）