重组禽流感H5+H7二价灭活疫苗的免疫效果评估与分析

(贵州省大方县动物疫病预防控制中心，贵州 大方 551600)

禽流感(Avian influenza，AI)是由正黏病毒科的甲型流感病毒(Avian influenza virus，AIV)引起禽类的高度接触性传染病[1，2]。根据病毒外膜血凝素(H)和神经氨酸酶(N)蛋白抗原性的不同，分为16个 H亚型(H1～H16)和9个N亚型(N1～N9)[3]。H5和H7亚型属于高致病性禽流感，具有潜伏期短、传播快、发病急、发病率和死亡率高等特点，不仅对家禽造成严重危害，还对人类健康构成 严重威胁，并对国际贸易产生严重影响[4]。本试验对重组禽流感H5+H7二价灭活疫苗(H5N1Re-8株+H7N9Re-1株)的免疫效果进行评估，了解其抗体变化和影响因素，为本地区禽流感的免疫预防工作提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验试剂(1)禽流感病毒(H5+H7)H5N1Re-8株+H7N9Re-1株二价灭活疫苗(批号2017025)，购自乾元浩生物股份有限公司；禽流感病毒H5N1Re-8株HI抗原(批号2017002)、禽流感病毒H5N1Re-8株HI阳性血清(批号2016004)，购自哈尔滨维科生物技术开发公司。(2)3只健康公鸡心脏血(无AI抗体)，洗涤3次配制1%红细胞悬液，由大方县动物疫病预防控制中心兽医生物实验室制备。(3)H5亚型禽流感病毒ELISA抗体检测试剂盒(批号171106)、禽流感病毒H7亚型竞争ELISA抗体检测试剂盒(批号171204)，购自湖北武汉科前生物股份有限公司。

1.2 试验鸡及免疫在某蛋鸡养殖场选择21日龄蛋鸡100羽(要求饲养管理方法一致，日龄、品种、批次相同，母源抗体低且水平较整齐，本底情况较一致)，免疫前采集鸡血清和双腔拭子进行AIV(H5、H7)核酸和抗体检测，AIV核酸检测结果为阴性、抗体效价小于24者作为免疫试验鸡。试验鸡按禽流感疫苗免疫程序和相关产品说明书进行免疫注射，2017年11月28日进行首次免疫，12月25日加强免疫1次。

1.3 样品采集样品采集参照《高致病性禽流感样品采集、保存及运输技术规范》(NY/T 765—2004)进行。采样时间分别为免疫后第0、21、42、72、102、132、162、192、222、252 d，共计采样10次。

1.4 样品检测(1)血凝抑制试验(HI)：根据《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T 18936—2003)规定，采用HI试验进行AIV(H5、H7)免疫抗体检测，详细记录相关的检测结果。以完全抑制4个单位抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。抗体滴度>24为免疫抗体合格。所有免疫鸡的平均免疫抗体合格率≥70%判定为群体免疫合格。(2)酶联免疫吸附试验(ELISA)：严格按照禽流感ELISA检测试剂盒说明书操作方法及结果判定。

2 结果

2.1HI检测结果由表1可见：免疫重组禽流感H5+H7二价灭活疫苗的鸡群在免疫后21～252 d，H5抗体合格率为74%～100%，H7抗体合格率为78%～100%。

表1 H5、H7亚型禽流感免疫抗体HI检测结果

2.2ELISA检测结果由表2可见：免疫重组禽流感H5+H7二价灭活疫苗的鸡群在免疫后21～252 d，H5抗体合格率为74%～100%，H7抗体合格率为76%～100%。

表2 H5、H7亚型禽流感免疫抗体ELISA检测结果

3 讨论

3.1通过HI检测表明，重组禽流感H5+H7二价灭活疫苗首次免疫后21 d，H5、H7亚型免疫抗体合格率均达到100%，至162 d有所下降。252 d时 H5亚型抗体合格率降至74%，H7抗体合格率降至78%，但均达到国家规定≥70%的要求，免疫效果好。H5亚型102 d抗体合格率为98%，而132 d 抗体合格率为100%，说明HI试验过程中还存在一定误差。

3.2为了验证HI试验的准确性，通过ELISA试验进行比较，结果显示：在同一时间上，ELISA试验与HI试验检测禽流感H5、H7免疫抗体合格率升降趋势基本相同，由于ELISA试验较灵敏，整体检测合格率略高。目前国内一些厂家生产的禽流感诊断抗原效价较低，HI试验稳定性相对较差，而用 ELISA 检测方法更加敏感和方便，因此在进行禽流感抗体监测时可优先选用 ELISA方法。

3.3我国禽流感的防制工作采用全面强制免疫政策，使本病在很大程度上得到了控制，杜绝了大面积暴发的可能。但仍不能放松禽流感的免疫与监测工作，定期进行抗体水平监测、评估免疫效果仍是今后禽流感防控工作中的重点之一。在做好抗体监测、保障群体良好抗体水平的同时，还应当注重养禽业的其他重要环节，建立积极主动、卓有成效的综合防控体系，结合品种、环境卫生状况、季节和气温、免疫接种次数等进行综合分析[5]。在禽流感免疫接种过程中，要注重疫苗的选择和免疫次数的要求。购买正规厂家生产的质量好的疫苗，并按严格要求保存、运输、接种。

4 结论

本试验结果表明，重组禽流感H5+H7二价灭活疫苗(H5N1Re-8株+H7N9Re-1株)免疫效果良好，在毕节大方地区可以推广使用。