延胡索总生物碱滴丸对犬急性心肌缺血模型心肌酶谱影响

2019-12-24 06:11康天济贾静丽田冰贾永囡田明郑超刘杨季宏与

中医药学报 2019年6期

康天济，贾静丽，田冰，贾永囡，田明，郑超，刘杨，季宏与

(黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨 150040)

心肌缺血是由于心脏冠状动脉血液灌注减少，心肌细胞供氧不足，能量代谢失衡，不能维持心肌正常生理机能而出现的病理状态。冠心病是严重危害人类健康的临床常见病。中药延胡索具有扩张冠脉血管、提高冠脉流量、对心肌缺血、坏死有保护所用[1]，延胡索总生物碱滴丸是其提取精制浓缩的总生物碱有效部位的制剂。本实验对延胡索总生物碱滴丸进行药效学研究，观察其对实验犬急性心肌缺血、心肌梗死的保护作用。

1 实验材料

1.1 实验动物

比格犬，健康成年，体质量12～16 kg，雌雄兼用。由沈阳康平实验动物研究所提供。

1.2 实验药物及仪器

延胡索总生物碱滴丸(规格：35 mg/粒，每粒含延胡索总生物碱5 mg。自制);复方丹参滴丸(规格：每丸重27 mg，批号：Z1095011。天士力制药集团股份有限公司);P11011戊巴比妥纳(Pentobarbital sodium sat)(百杰斯生物公司);枸橼酸钠(惠氏生化有限公司)EDTA-K2 一次性使用真空采血管2 mL;32% 柠檬酸钠一次性真空采血管2 mL;肝素钠一次性真空采血管5 mL(江苏康捷医疗器械有限公司);BL-420生物机能试验系统(成都泰萌科技有限公司);AthlonX GLAMOUR2000全自动生化分析仪AMD(美国MD公司)。

2 实验方法

2.1 实验动物分组及给药方法

取健康成年的实验动物比格犬20只，体质量均在12～16 kg，随机分成5组，每组4只，即(1)模型对照组，(2)延胡索总生物碱滴丸剂高剂量组，(3)延胡索总生物碱滴丸剂中剂量组，(4)延胡索总生物碱滴丸剂低剂量组，(5)丹参滴丸阳性对照组。

模型对照组给予3 mL/kg的生理盐水，延胡索总生物碱滴丸剂高、中、低剂量组和丹参滴丸阳性对照组的给药剂量，均按人和狗间体表面积的等效剂量比折算成等效剂量后，按等效剂量的16、8、2、2设置梯度，即延胡索总生物碱滴丸剂高、中、低剂量组和丹参滴丸阳性组给药剂量分别为：222.0 mg/kg、111.9 mg/kg、27.9 mg/kg、67.2 mg/kg；将延胡索总生碱滴丸剂实验组和丹参滴丸实验组给药剂量，溶于生理盐水，配成至所需浓度，混匀即可。各组实验动物均在冠脉结扎30 min后，经十二指肠给药，给药体积为3 mL/kg。

2.2 犬急性心肌缺血模型的造模方法

上述5组实验动物，每只实验动物分别称重，用戊巴比妥纳(30 mg/kg)静脉注射麻醉后，将犬仰卧并固定于保温手术台上。

首先在腹股沟区切开长约2～3 cm的皮肤，分离剥露出股动脉和股静脉，股动脉远心端结扎成死结，近心端用止血钳夹紧，插入带有三通阀的无菌聚乙烯管，手术线结扎固定，三通阀的一端连结压力换能器，压力换能器的另一端连结用BL-420生物机能实验系统。旋转三通阀，用BL-420生物机能实验系统，测定动脉血压；股静脉按股动脉插管方法插入聚乙烯管，放开动脉夹，三通管的一端连结生理盐水通道，旋转三通阀，建立生理盐水静脉滴住通道，给予生理盐水滴住，防止失液过多，电解质紊乱。

在沿着腹部正中线切开上腹部皮肤，掏出十二指肠，在十二指肠上剪开一小口，插入橡胶软管，进行荷包式缝合，以备给予实验动物受试药物。

切开颈部皮肤，分离气管，进行气管剪口插管，接动物呼吸机，进行人工呼吸，呼吸频率16～18次/min,吸气-呼气1∶2，潮气量350～550 mL,并根据血气分析调整通气。

在气管外侧，剥离出颈外静脉，远心端结扎，近心端用动脉夹夹紧，在静脉中央煎一小口，插入带有三通阀的聚乙烯插管，止血钳轻轻夹住没入血管的插管部分，打开动脉夹，慢慢旋转插管，直至插管进入冠状静脉窦，手术线结扎，放止血钳。取血时候，旋转三通，血液即由导管口流出，以便于各个时时的采血，每次采血前应放出少量血以防止枸橼酸钠影响指标测定。

最后沿胸骨左缘切开皮肤及肌肉，切断左第四肋骨胸骨端，暴露心脏，于离膈神经前约1 cm处剪开心包膜，并将心包膜边缘缝于胸壁上，使心脏左侧壁充分暴露，找出心脏表面最粗大的横行走向的血管(为冠状动脉左前降支)。分离冠状动脉左前降支中断(离前降支起点下1/3处选一结扎点)，穿线以备结扎，造成急性实验性心肌缺血模型。

针灸针分别插入犬左上、右上、左下肢皮肤表层，放置心电图肢本导联电极，通过BL-420F生物机能实验系统观测标准n导联心电图。

缝置多点固定式心外膜电极，连结十六道生理记录仪，描记心外膜电图(ST段升高的电极数表示心肌梗死范围的大小，以ST段升高量作为心肌损伤程度)。

手术稳定20 min后，结扎冠脉，结扎线以下，心肌立即出现黑紫色变化，同时心电图上出现缺血改变。

结扎30 min后，并立即经十二指肠给予实验药物或生理盐水[1-4]。

2.3 造模成功的判断方法

造模成功的判断标准，以心电图上出现的缺血改变为主，各实验组动物，结扎时，心外膜心电图上ST抬高大于2 mv，肢体导联电极心电图上J点抬高，或出现病理性Q波，即为造模成功。

2.4 血液样本的采集方法

各实验组动物，分别与结扎前30 min(正常值)、结扎后30 min(缺血前即药前)、十二指肠给药30 min、60 min、120 min、180 min进行抽血，抽血时，每个时间点均用5 mL肝素钠抗凝管2个，2 mL 32%柠檬酸钠抗凝管2个、2 mL EDTA-K抗凝管1个抽血，并立即进行血气分析。抽血时，轻轻颠倒摇晃血液。

2.5 血浆心肌酶的测定方法

分别按肌酸激酶同工酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、谷草转氨酶(AST)、羟丁酸脱氢酶(HBDH)等测定试剂盒的说明书配制好反应液，并放置在AthlonX GLAMOUR2000全自动生化分析仪机器盘中；取2.5项下各时间段的枸橼酸钠抗凝管血液样本，放置在离心机中，以2 500 r/min的速度，离心5 min，取血清，放入1.5 mLEP管中，放在AthlonX GLAMOUR2000全自动生化分析仪机器盘中，利用Autoanalyzer操作软件，设置好参数，进行测定，并记录。

2.6 统计学处理

3 实验结果

3.1 肌酸激酶同工酶(CK)测定

由表1可知，模型组随着冠脉结扎时间的延长逐渐升高；延胡索总生物碱滴丸剂高、中、低剂量组和丹参滴丸阳性组，都能明显抑制心肌缺血引起的CK升高，与模型组比较，其相对变化率明显低于模型对照组(P<0.05)。

3.2 乳酸脱氢酶(LDH)活性的测定

由表2可知，随着冠脉结扎时间的延长，乳酸脱氢酶LDH含量持续升高，延胡索总生物碱滴丸剂高、中、低剂量组和丹参滴丸阳性组，均能明显抑制LDH的升高,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。