7种杀菌剂对草莓胶孢炭疽菌和灰霉病病菌的室内毒力测定

邬劼 王晓琳 黄洁雪 刁春友 闫晓阳 吉沐祥

摘要：为筛选有效控制草莓炭疽病和灰霉病的新型杀菌剂，采取菌丝生长速率法，测定7种新型杀菌剂对2种病菌的抑菌活性。结果表明，四霉素、氟啶胺、吡唑醚菌酯对胶孢炭疽菌的抑制作用较强，其中四霉素的EC50最小，为0.130 6 μg/mL，毒力最强;氟啶胺的毒力次之，EC50为0.145 8 μg/mL;多抗霉素B最弱，EC50为 44.845 5 μg/mL。氟啶胺、腈苯唑、四霉素均对草莓灰霉病菌抑制作用较强，其中氟啶胺抑制活性最高，EC50为 0.039 6 μg/mL;腈苯唑、四霉素抑菌活性相对较高，EC50分别为0.077 3 μg/mL、0.221 9 μg/mL;多抗霉素B抑菌效果最弱，EC50为3.691 0 μg/mL。因此，供试药剂中四霉素对胶孢炭疽菌病病菌最敏感，氟啶胺对草莓灰霉病病菌最敏感。说明生物药剂四霉素和化学药剂氟啶胺可同时防治炭疽病和灰霉病，腈苯唑更适用于控制灰霉病。

关键词：草莓;胶孢炭疽菌;灰霉病菌;杀菌剂;毒力测定

中图分类号： S436.68 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2019）20-0129-04

草莓（Fragaria×ananassa Duch.）为蔷薇科草莓属聚合果，是多年生草本植物。草莓果实呈心形，色泽鲜红，饱满多汁，酸甜适度，香味宜人，有“水果皇后”的美誉，深受消费者欢迎[1]。随着经济发展，鲜食草莓的需求量增大，我国草莓种植面积也不断扩大，随之而来的病害问题也日益严重，其中灰霉病、炭疽病是草莓生产中的2种重要真菌病害。

草莓炭疽病主要发生在苗期和定植初期，是典型的高温高湿性病害，也是危害严重、防治难度较大的病害之一。草莓炭疽病主要是由胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）、尖孢炭疽菌（Colletotrichum acutatum）、草莓炭疽病菌（Colletotrichum fragariae）引起的，主要危害匍匐茎、叶柄、叶片，花、果实及根部也会受害。发病严重时，病菌侵染短缩茎，导致植株凋萎死亡[2]。草莓灰霉病是全世界范围内的主要病害之一，在我国发生较严重。灰霉病主要是由灰葡萄孢（Botrytis cinerea Pers.）引起的，其具有寄主范围广、遗传变异快、繁殖能力强等特点[3]，症状主要发生在草莓花器、果实、叶片和叶柄，病菌主要从植株伤口和枯死部位侵入，花器和果实染病后腐烂。灰葡萄孢能够随空气、灌溉水、农具以及人员走动传播，其传播能力强和速度快是造成草莓发病广、发病快的主要原因，其导致的草莓烂果使得草莓减产率普遍在 10%～20%，严重时达到50%以上[4]。由于目前主栽品种抗病性较差、种植规模扩大以及长期连作等原因，草莓灰霉病的发生日趋严重。

目前，化学方法仍是防治草莓炭疽病、灰霉病常用且有效的措施之一，主要采用苯并咪唑类、甲氧基丙烯酸酯（QoIs）类和甾醇脱甲基抑制剂类（DMIs）等杀菌剂进行防治。生产上防治炭疽病常用的杀菌剂有多菌灵、代森锰锌、甲基硫菌灵、吡唑醚菌酯、嘧菌酯、咪鲜胺、苯醚甲环唑等;防治灰霉病的常规杀菌剂有腐霉利、嘧霉胺、啶酰菌胺、百菌清、异菌脲、嘧菌环胺等。然而，随着杀菌剂频繁使用与剂量的增加，草莓炭疽病病菌和灰霉病病菌已对多种杀菌剂产生抗药性。有研究表明，杭州市草莓炭疽病病菌已存在高比例的乙霉威和多菌灵双抗菌系[5];江苏草莓灰霉病病菌对多菌灵、异菌脲、乙霉威和嘧霉胺均已产生抗药性[6];多菌灵、嘧菌酯、吡唑醚菌酯对上海地区草莓灰霉病病菌种群已基本无效[7];江苏丘陵地区草莓灰霉病病菌以高抗QoIs类药剂的种群为主导[8];徐州草莓灰霉病病菌对嘧霉胺已产生抗药性[9];湖南省草莓灰霉病病菌已对多菌灵、嘧霉胺和腐霉利产生抗药性，造成实际防治效果并不理想[10]。

因此，为丰富药剂品种，延缓抗药性的产生，本研究开展防治草莓炭疽病和灰霉病的新药剂筛选工作。本研究选择7种相对新型的低毒低残留杀菌剂进行室内毒力测定，以期筛选出适用于目前已产生抗药性病菌的防治药剂，为生产上有效防治草莓炭疽病和灰霉病提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

分别引起草莓炭疽病和灰霉病的胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）、灰霉病病菌（Botrytis cinerea Pers.）由江苏丘陵地区镇江农业科学研究所生态农业研究室分离，并保存于4 ℃冰箱中备用。

1.2 供试培养基

马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）用于胶孢炭疽菌、灰霉病病菌的分离、保存以及毒力测定。

1.3 供试药剂

25%吡唑醚菌酯懸浮剂（suspensionconcentrates，简称SC）（江苏东台东南化工有限公司）、500 g/L氟啶胺SC（宁波石原金牛农业科技有限公司）、24%腈苯唑SC（美国陶氏益农公司）、41.7%氟吡菌酰胺SC（拜耳生物科技有限公司）、40%酚菌酮水乳剂（emulsion in water，简称EW）（江苏腾龙生物药业有限公司）、0.3%四霉素（aqueous solutions，简称AS）（辽宁微科生物工程股份有限公司），16%多抗霉素B[兴农药业（中国）公司]。各药剂均用无菌水配制成10 000 μg/mL的母液。

1.4 试验时间与地点

于2018年9月10—18日于江苏丘陵地区镇江农业科学研究所中心实验室开展本试验。

1.5 含药培养基的制备

分别将上述7种供试药剂的母液依次稀释至一定浓度，再将1 mL药液与9 mL PDA培养基在培养皿内混匀，制成含系列梯度浓度药剂的PDA培养基（表1），以无菌水作空白对照（CK），各处理重复3次。

草莓生产中的病害种类多，发生情况复杂，科学合理的防治成为草莓生产中的关键点[13]。化学防治仍是控制草莓炭疽病、灰霉病发生和减少损失的主要途径，但由于可选药剂有限，杀菌剂单剂重复和过量使用造成病原菌对杀菌剂产生抗性，导致使用量无限扩大的恶性循环，因此迫切需要筛选防治草莓灰霉病和炭疽病的杀菌剂来减缓杀菌剂的抗药性。

氟啶胺为二甲基苯胺类杀菌剂，中国农药信息网显示氟啶胺登记在马铃薯晚疫病、番茄灰霉病、辣椒疫病等，在发病前或者发病初期用药。科研工作者在灰霉病的防治方面做了一些研究，汪汉成等研究氟啶胺、咪鲜胺、苯醚甲环唑和代森锰锌等4种杀菌剂对烟草灰霉病病菌的毒力试验，发现氟啶胺和咪鲜胺对烟草灰霉病菌菌丝生长活性抑制最强[14]。赵杨等在海城地区进行温室蔬菜灰霉病种菌试验发现，6种杀菌剂对蔬菜灰霉病病菌效果最好的是氟啶胺，EC50范围为0.013～0.066 μg/mL[15]。刘妍等试验发现，氟啶胺对湖南地区草莓灰霉病菌的EC50为0.028 3 μg/mL[16]，与本研究结果相似，氟啶胺对句容地区草莓灰霉病病菌的EC50为 0.039 6 μg/mL。

四霉素为不吸水链霉菌梧州亚种的发酵代谢产物，目前在花生根腐病、水稻立枯病、小麦赤霉病和白粉病等作物病害上登记，四霉素通过抑制菌丝体的生长，诱导作物产生抗性而达到防治作物病害的目的[17]。宋莹莹采用菌丝生长速率法测得四霉素对山东165灰霉菌株的EC50分布范围为 0.04～1.09 μg/mL[18]，四霉素对句容地区草莓灰霉病病菌的EC50为0.221 9 μg/mL，在山东地区的测定结果范围内，说明四霉素对草莓灰霉病病菌具有很好的抑制效果。在胶孢炭疽菌的抑制方面还未见氟啶胺与四霉素的报道，因此，建议进一步开展氟啶胺和四霉素及其相关复配产品在防治草莓炭疽病、灰霉病的试验研究和农药开发登记，对于缓解目前草莓上登记农药品种少和防止抗药性风险等具有积极意义。此外，培养皿内的抑菌活性不能完全代表田间防治效果，下一步将开展氟啶胺和四霉素的田间防治效果试验。

参考文献：

[1]张国珍，钟 珊. 草莓灰霉病研究进展[J]. 植物保护，2018，44（2）：1-10.

[2]徐 英，马 森，杨 奎，等. 40%戊唑醇悬浮剂对草莓炭疽病的毒力测定及田间防效[J]. 农药，2017，56（11）：853-855.

[3]Leroux P，Fritz R，Debieu D，et al. Mechanisms of resistance to fungicides in field strains of Botrytis cinerea[J]. Pest Management Science，2002，58（9）：876-888.

[4]Cordova L G，Amiri A，Peres N A . Effectiveness of fungicide treatments following the Strawberry Advisory System for control of Botrytis fruit rot in Florida[J]. Crop Protection，2017，100：163-167.

[5]韩国兴，礼 茜，孙飞洲，等. 杭州地区草莓炭疽病病原鉴定及其对多菌灵和乙霉威的抗药性[J]. 浙江农业科学，2009（6）：1169-1172.

[6]潘以楼，朱桂梅，郭 建. 江苏草莓灰霉病菌对5种杀菌剂的抗药性[J]. 江苏农业学报，2013，29（2）：299-304.

[7]肖 婷，成 玮，颜伟中，等. 上海地区草莓灰霉病病菌种群抗药性研究[J]. 江苏农业科学，2018，46（20）：117-120.

[8]肖 婷，许 媛，陈宏州，等. 江苏丘陵地区草莓灰霉病菌（Botrytis cinerea）对QoIs类杀菌剂的抗药性研究[J]. 果树学报，2017，34（5）：603-610.

[9]白耀博，陈学进，凤舞剑，等. 徐州市草莓灰霉病菌对嘧霉胺的抗药性[J]. 安徽农业科学，2016，44（35）：162-164.

[10]张 亚，王 翀，刘双清，等. 湖南省草莓灰霉病菌对4种杀菌剂的抗药性检测[J]. 植物保护，2016，42（5）：181-187.

[11]朱春雨，吴文平，张 弘，等. 农药室内生物测定试验准则（杀菌剂）：第2部分抑制病原真菌菌丝生长试验平皿法[S]. 北京：中国农业出版社，2006.

[12]黄彰欣. 植物化学保护实验指导[M]. 北京：农业出版社，1993：57.

[13]陆 丹，曹婷婷，黄耀亮，等. 草莓炭疽病、灰霉病、白粉病发生规律的调查[J]. 浙江农业科学，2018，59（12）：2177-2178.

[14]汪汉成，李丽翠，张之矾，等. 四种杀菌剂对烟草灰霉病菌的毒力及对烟草灰霉病的抑制作用[J]. 植物保护学报，2019，46（2）：377-384.

[15]赵 杨，孙柏欣，陈 乐，等. 海城地区温室蔬菜灰霉病菌对6种药剂的抗药性检测[J]. 辽宁农业科学，2019（1）：42-44.

[16]刘 妍，张 亚，项雅琴，等. 啶酰菌胺与氟啶胺复配物对水稻纹枯病菌和草莓灰霉病菌的增效作用研究[J]. 植物保护，2018，44（2）：235-240.

[17]刘 刚. 四霉素登记产品和防治对象继续增加[J]. 农药市场信息，2018（22）：36.

[18]宋瑩莹. 山东省灰霉病菌对常用杀菌剂的抗性监测及对吡唑萘菌胺和四霉素的敏感性[D]. 泰安：山东农业大学，2016：36-38.