母水牛同期发情中多卵泡发育的排卵监测

陈明棠 李辉 黄健 谭正准 赵朝步 钟华配 覃广胜

摘要 用“GnRH + PGc + GnRH”法同期化处理水牛，利用B超对多卵泡发育和排卵进行监测。结果表明，经同期化处理的母水牛多卵泡发育发生率为6.43%（42/653），排卵率为72.73%（24/33）。母水牛多卵泡发育的发生与品种、年龄、季节等因素无关。

关键词 水牛;同期发情;B超;多卵泡发育;排卵监测;影响因素

中图分类号 S823.3文献标识码 A

文章编号 0517-6611（2019）22-0083-02

Abstract “GnRH + PGc + GnRH” treatment was used to make estrus synchronization on buffaloes. And the development of ovarian follicles were observed by ultra sound method. The results showed that the multifollicle growth rate of synchronized buffalo was 6.43%（42/653）， and the ovulation rate was 72.73%（24/33）. The development of multifollicle had no correlation with variety， age， season， etc.

Key words Buffalo;Estrus synchronization;Ultra sound;Development of multifollicle;Ovulation monitoring;Influencing factors

水牛是单胎动物，通常情况下母水牛一次发情只排1枚卵子，自然状态下水牛的双胎率极低，双胎多出现在胚胎移植。随着水牛同期发情技术的推广应用，常用的处理程序是否会增加多卵泡发育和多排卵的问题尚未见报道。笔者用促黄体素释放激素A3+氯前列醇同期化处理母水牛，使用便携式兽用B超仪观测卵泡发育和排卵情况，记录其中多卵泡发育和多排卵现象，分析品种、年龄和季节等因素对母水牛多卵泡发育发生的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验牛。广西区内饲养的摩拉水牛、尼里/拉菲水牛、地中海水牛及其他杂交水牛。

1.1.2 试剂和器材。氯前列醇（PGc）、促黄体素释放激素A3（哥娜、GnRH）为丹东市绿丹和华动物药有限公司生产;便携式兽用B超仪（HONDA，HS-101V），日本产。

1.2 方法

1.2.1 同期化发情处理。

试验母水牛采用“促黄体素释放激素A3+氯前列醇”方法进行同期化处理[1]。试验开始当天记为“0 d”，当天肌肉注射GnRH 100 μg/头，第7 天肌肉注射PGc 0.4 mg/头，第9 天肌肉注射GnRH 100 μg/头，此后24 h起开始检查发情和监测排卵。

1.2.2 发情和排卵监测。

全部试验母水牛在第9 天肌注GnRH后24 h进行第一次发情和排卵监测，记录卵巢上直径≥9 mm卵泡数目。监测频率为1～2次/d，使用B超儀经直肠逐头扫描母水牛卵巢，60 h内不排卵的不再监测并记为不排卵。

1.2.3 数据统计与分析。试验数据显著性分析采用卡方检验（χ2）分析，P<0.05表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 多卵泡发育和排卵的总体情况

试验监测了母水牛多卵泡发育和排卵情况，总样本653头，一次发情优势卵泡数达到2个的母水牛有40头，一次发情优势卵泡数达到3个的有2头， 2个优势卵泡与3个优势卵泡的发生率差异显著（P<0.05）。2个优势卵泡的母水牛排卵率为70.97%（22/31），但均为单排卵，无双排卵现象，有3个优势卵泡的母水牛出现1头多排卵。多卵泡发育和排卵情况具体见表1。

2.2 多卵泡发育与年龄的关系

将全部样本按年龄段（青年、成年）进行分类统计，发现青年水牛和成年水牛多卵泡发育发生率差异不显著（P>0.05）（表2）。

2.3 多卵泡发育与品种的关系

将全部样本按品种进行分类统计，发现各品种水牛多卵泡发育的发生率差异不显著（P>0.05）（表3）。

2.4 多卵泡发育与季节的关系

将样本按开展试验的季节进行分类统计，发现夏季多卵泡发育发生率最高，而冬季最低，但各季节间差异不显著（P>0.05）（表4）。

3 讨论

在牛的直肠检查操作中，有一些关键操作环节只能依靠操作者的经验和感觉来完成，不同操作者间会存在判断误差。该试验采用B超技术来解决这些问题具有很强的特异性和实用性[2-3]。

水牛是单胎动物，一次发情只排出1枚卵子。该试验发现6.43%（42/653）的母水牛在同期发情处理后出现多卵泡发育现象（Φ≥9 mm），排卵率为69.70%（24/33），与陈明棠等[4]、马会明[5]报道的同期发情试验的排卵率（72.88%、75%）差异不显著（P<0.05）。该试验结果发现，多排卵率为0.26%（1/384），出现概率极低，说明“促黄体素释放激素A3+氯前列醇”处理方案没有造成母水牛排卵异常，表明水牛的双胎现象与同期发情处理没有必然关联。

姚晓磊等[6]研究了卵泡发育相关基因在牛发情周期内第一卵泡波中优势卵泡（dominant follicles，DF）和从属卵泡（subordinate follicles，SF）颗粒细胞中的表达差异，发现与卵泡发育相关基因（SFRP2、CPEB1、PRKAG2、MAPK8、PPP2R2A和PRSS23）在DF和SF中都有不同程度表达，其中CPEB1和PRKAG2对卵泡的发育可能有促进作用，SFRP2和MAPK8对卵泡的发育可能有抑制作用。

Messer等[7]报道了视黄酸受体（rretinoic acid receptor，RAR）基因在法国超高产仔大白猪中窝产仔数平均加性效应是每窝增加0.21头，在法国对照大白猪中则是每窝增加0.14头。郭晓红等[8]发现RARG基因CC基因型小尾寒羊平均产羔数比CD基因型多0.55只（P<0.05）。张路培等[9]研究了生长分化因子 9（growth differentiation factor 9，GDF9）基因的遺传变异与牛双胎性状的关系，发现在鲁西牛中GDF9基因的3UTR出现缺失突变，单胎牛群体与双胎牛群体基因型分布有极显著差异（P=0.006），双胎牛群体的B等位基因频率明显大于单胎牛群体。黄萌等[10]将鲁西牛群体的视黄素X受体基因（retinoid X receptorgamma，RXRG）A1941G位点的基因型效应与双胎性状进行相关分析，发现基因型分布在鲁西单、双胎牛群体上存在极显著差异（P<0.01），表明基因型对牛双胎现象有较大影响，但并未发现基因型效应与双胎性状相关，且在其他品种群体中没有发现类似现象。

该研究试验对象来自广西区内数个奶水牛场牛群，经同期化处理后有0.26%（1/384）的多排卵现象，但没有出现双胎，而水牛双胎性状是否存在关联基因型则有待进一步研究。

4 结论

奶水牛经同期化处理后出现6.43%的多卵泡发育现象，但只有0.26%形成多排卵，多卵泡发育水牛的排卵率与单优势卵泡发育水牛的排卵率差异不显著，没有出现多胎情况。多卵泡发育与品种、季节、年龄等因素无关。

参考文献

[1] 陈明棠，李辉，谭正准，等.母水牛同期发情的排卵监测[J].黑龙江畜牧兽医，2018（18）：206-208.

[2] 赵凯，田文儒，刘焕奇，等.超声诊断技术在兽医产科上的应用[J].黑龙江畜牧兽医，2000（9）：39-40.

[3] 顾红兵，詹国英，张月昔，等.用超声诊断仪检测牛黄体的研究进展[J].山东畜牧兽医，2002（2）：36-37.

[4] 陈明棠，谭正准，黄健，等.不同处理方法对水牛同期发情效果的观察[J].中国牛业科学， 2014，40（4）：16-17，20.

[5] 马会明.B超监测母牛同期发情和超数排卵中卵巢动态变化的研究[D].石河子：石河子大学，2005.

[6] 姚晓磊，李鹏飞，姜晓龙，等.卵泡发育相关基因在牛优势和从属卵泡颗粒细胞中表达的研究[J].畜牧兽医学报，2014，45（12）：1957-1963.

[7] MESSER L，WANG L，LEGAULT C，et al.Mapping and investigation of candidate genes for litter size in French Large White pigs[J].Animal genetics，1996，27（S2）：101-119.

[8] 郭晓红，储明星，周忠孝，等.小尾寒羊高繁殖力候选基因RARG的研究[J].畜牧兽医学报，2006，37（8）：756-760.

[9] 张路培，张小辉，许尚忠，等.牛GDF9和BMP15基因遗传变异与双胎性状的关系研究[J].畜牧兽医学报，2007，38（8）：800-805.

[10] 黄萌，许尚忠，昝林森，等.牛RXRG基因遗传变异与双胎性状的关联分析[J].遗传，2008，30（2）：190-194.