急性脑出血患者血浆微小RNA-130a表达水平对早期神经功能恶化的预测价值

马刘佳，郑云锋，康 平，胡国良

急性脑出血(acute intracerebral hemorrhage，AICH)是神经外科最常见的急危重症之一，起病快，病程不稳定，临床致残率和死亡率较高。早期神经功能恶化(early neurological deterioration，END)是脑出血早期常见的并发症，是指部分患者即使接受积极治疗，但神经功能持续恶化。越来越多研究证据证实脑出血患者END与预后不良密切相关[1～3]。因此，寻找准确性高的END早期预测因子，及时采取针对性治疗，降低END发病率，对改善脑出血患者生活质量，减少家庭社会负担具有重要意义。微小核糖核酸(micro ribonucleic acids，miRNAs)是一类广泛存在于真核生物体内的非编码小RNA，一般长约22 nt，与神经神经系统发育及功能均密切相关[4，5]。近年来，大量研究发现多种miRNAs可能参与脑出血发生及病情进展过程，miR-130a即是其中之一[6～8]。然而关于AICH患者血浆miR-130a表达水平与END关系的研究鲜有报道。本研究拟通过检测AICH患者血浆miR-130a表达水平，分析其与END的关系，旨在为临床工作中END的早期预测和干预治疗提供帮助。

1 对象与方法

1.1 研究对象 本研究通过延安大学附属医院伦理委员会审核批准，连续性选择2017年1月～2019年6月在本院神经外科住院治疗的自发性基底节区AICH患者纳入研究。入组标准：①年龄>18岁；②AICH系首次发病，诊断符合中华医学会神经病学分会，中华医学会神经病学分会脑血管病学组制定的《中国脑出血诊治指南(2014)》[9]，并经头颅CT检查确诊为基底节区脑出血；③发病到入院时间<12 h；④入院时无昏迷症状。排除标准：①继发性脑出血患者，包括外伤，动脉瘤，动静脉畸形，动静脉瘘，烟雾病等导致的脑出血；②住院不满72 h离院的患者；③发病72 h内行手术治疗的患者，包括颅内血肿清除术、侧脑室引流术、脑脊液引流术等；④1 m内诊断颅内感染的患者；⑤伴有其他系统严重疾病，如严重肝肾疾病，恶性肿瘤，内分泌系统疾病，血液系统疾病，风湿免疫系统疾病等；⑥妊娠期女性。本研究纳入AICH患者共145例，包括男82例，女63例，平均年龄(57.15±9.80)岁。另外，随机选择同期在我院体检的50例健康志愿者作为对照组，其中包括男30例，女20例，平均年龄(56.44±10.05)岁。

1.2 方 法

1.2.1 END的定义及分组 所有AICH患者于入院时采用美国国立卫生研究院脑卒中量表(national institutes of health stroke scale，NIHSS)进行评分，并在入院3 d内根据病情变化至少再次行NIHSS评分1次。本研究定义END为与入院时NIHSS基线评分相比，入院3 d内NIHSS运动评分项增加≥1分或NIHSS总分增加≥2分，并以此将AICH患者分为END组和非 END 组。

1.2.2 血浆miR-130a检测 采用含EDTA的离心管采集外周静脉血，1600 r/min离心15 min后使用含EDTA的离心管留取上清液，再4℃条件下15000 r/min离心15 min，使用无RNA酶的冻存管收集上清液，置于-80 ℃冰箱保存备用。采用普洛麦格(北京)生物技术有限公司的EastepTM总RNA提取试剂盒提取总RNA，采用实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR)法检测血浆miR-130按照使用说明书进行。

1.2.3 其他参数采集 收集所有入组研究对象的相关临床资料，主要包括患者性别，年龄，体重指数(body mass index，BMI)，吸烟史，既往高血压、糖尿病、高脂血症、症状性脑梗死、冠心病、心房颤动等疾病史及用药史，入院时体温、收缩压(systolic blood pressure，SBP)、舒张压(diastolic blood pressure，DBP)、随机血糖，以及白细胞计数、血小板计数、血红蛋白、凝血酶原时间(prothrombin time，PT)、活化部分凝血酶原时间(activated partial thromboplastin time，APTT)及纤维蛋白原等血液化验指标。所有AICH患者入院后即刻完成头颅CT检查(美国GE公司64排螺旋CT)，并于发病48 h内至少复查1次头颅CT，血肿体积计算、血肿破入脑室及血肿扩大判定均由至少2名医师独立评估。

2 结 果

2.1 各组一般临床指标比较 如表1，AICH患者(END组和非END组)与对照组患者比较，在高血压，降压药使用，入院时收缩压、舒张压等方面差异具有统计学意义(均P<0.05)；END组和非END组比较，END组入院时NIHSS评分，血肿体积，出血破入脑室及血肿扩大比率均大于非END组(均P<0.05)。

2.2 各组血浆miR-130a表达水平比较 END组，非END组和对照组血浆miR-130a表达水平分别为4.82(4.05，6.93)，3.22(2.75，5.08)和1.02(0.85，1.40)，END组和非END组均高于对照组，END组高于非END组，差异均具有统计学意义(均P<0.001)。

2.3 END的危险因素分析 见表2，以是否发生END为因变量，以单因素分析P<0.05的变量，包括入院时NIHSS评分，血肿体积，出血破入脑室，血肿扩大及血浆miR-130a等为自变量，采用Logistic回归分析结果显示高血浆miR-130a表达水平(OR=1.566；95%CI1.228～1.997；P=0.002)和血肿扩大(OR=2.581；95%CI2.056～3.242；P=0.000)均是AICH患者发生END的独立危险因素。

表1 各组一般临床指标比较

注：aP<0.05，vs END组，bP<0.05，vs非END组

表2 END的危险因素分析

2.4 血浆miR-130a对END的预测价值 如图1，绘制血浆miR-130a预测AICH患者发生END的ROC曲线，AUC为0.884(0.815，0.953)，按照约登指数最大原则，cut-off值为4.05，对应的敏感性和特异性分别为75.8%和88.4%。

图1 血浆miR-130a对END的预测价值

3 讨 论

END是卒中患者早期最常见的并发症之一，发生率约在20%～40%左右，本研究145例AICH患者共33例发生END，发生率为22.76%，与既往研究报道一致[3]。越来越多研究结果证实END与AICH患者预后密切相关，早期准确预测，及时针对性干预，对降低患者死亡率和致残率具有重要意义[1～3]。因此，近年来对于END危险因素的研究国内外学者进行了大量报道，先后发现基质金属蛋白-9、高敏C-反应蛋白、瘦素、出血破入脑室、血肿扩大等指标对END具有一定预测价值[10～13]，但由于缺乏统一的END诊断标准，研究对象纳入排除标准亦存在差异，导致多数研究结果彼此差别较大，甚至完全相反，限制其临床推广应用。

MiRNAs可通过调控基因表达，广泛参与机体细胞增殖、分化、凋亡、代谢等病理生理过程。长期以来，miRNAs研究主要集中在肿瘤学领域，大量研究证据显示miRNAs在多种肿瘤疾病的发生发展进程中起到至关重要作用[14，15]。近年来，有研究发现miRNAs与神经系统发育及功能密切相关，多种miRNAs可能参与脑血管病发病及病情进展，与早期预后相关[4，5]。Liu等[16]发现脑出血大鼠动物模型脑组织miRNAs表达水平较对照组存在显著差异，且外周血与脑组织呈近乎平行的miRNAs表达谱，提示外周血miRNAs水平对脑出血早期病理状态具有一定评估价值。Sepramaniam等[17]在脑缺血大鼠模型中发现miR-320a可通过抑制水通道蛋白-1，-4表达以扩大局部脑水肿程度。Tan等[18]发现miR-21和miR-181b可通过调控靶基因基质金属蛋白-9表达，促进血脑屏障破坏，影响早期预后。这些研究结果表明miRNAs可能参与脑出血早期病理改变，与END发病密切相关。因此，继续探索miRNAs对END的预测作用，有助于进一步揭示miRNAs参与END的分子生物学机制。

Wang等[6]研究发现AICH患者血浆miR-130a表达水平显著升高，与血肿周边水肿体积呈正相关关系，并对脑深部脑出血患者预后具有一定预测价值。此外，该研究还在大鼠动物模型中发现血肿周边脑组织和血清中miR-130a表达水平均明显上升，与Liu等研究结论相互验证；并指出miR-130a 可作用于小凹蛋白-1/基质金属蛋白-2，-9通路影响血脑屏障通透性，抑制miR-130a表达可明显改善血脑屏障通透性，减轻脑水肿程度，提高动物行为学评分，为临床治疗提供新思路。本研究结果显示AICH患者血浆miR-130a表达水平显著高于对照组，与既往文献报道一致，再次提示miR-130a可能参与AICH患者早期病情变化过程，有充分理由推测血浆miR-130a表达水平与END发病密切相关。进一步比较END组和非END组血浆miR-130a表达水平，结果显示END组表达水平明显高于非END组，多因素分析结果也表明血浆miR-130a升高是END发病的独立危险因素，ROC曲线分析结果显示血浆miR-130a预测END的AUC为0.884(0.815，0.953)，证实了本研究前期推测，表明血浆miR-130a表达水平对END具有较高的预测价值。另外，需指出本研究cut-off值对应的敏感性和特异性分别为75.8%和88.4%，建议临床预测END时仍需参考其他参数，提高预测准确性。

综上所述，本研究发现血浆miR-130a表达水平与AICH患者END密切相关，有可能成为早期预测AICH患者发生END的新指标。本研究仍存在不足之处：首先，作为单中心小样本研究，本研究所得到的结果可能与真实世界存在偏差，有待进一步研究证实；其次，限于条件本研究未就AICH患者急性期及恢复期血浆miR-130a水平进行动态监测；最后，miR-130a参与END发病的具体生物学机制尚不明确，期待后续研究继续深入探讨。