水溶性番茄浓缩物（Fruitflow?）食用安全性毒理学评价

【摘 要】目的：评价水溶性番茄浓缩物（Fruitflow?）的食用安全性。方法：通过大鼠经口急性毒性试验、遗传毒性试验及大鼠30天喂养试验，评价Fruitflow?的食用安全性。结果：水溶性番茄濃缩物（Fruitflow?）对大鼠的急性经口最大耐受剂量大于20.0g/kg。Ames 试验、小鼠骨髓微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30天喂养试验各项指标也未见明显的中毒症状，也无死亡。结论：水溶性番茄浓缩物（Fruitflow?）为无毒、无致突变作用的保健食品。

【关键词】水溶性番茄浓缩物（Fruitflow?）;毒性试验;安全评价

水溶性番茄浓缩物（Fruitflow?）是经物理工艺去除脂溶性成分后得到一种水溶性浓缩物，含有天然存在的抗血小板化合物，摄入后减少血小板聚集，从而将血液保持在流体和低凝状态。这有助于防止在循环系统中形成微聚集体，以及防止血小板粘附到血管壁或脂肪斑上，从而保持健康的血液流通。但血小板功能没有被完全抑制，并且保持在适当的水平，使得血小板在血管损伤时可以聚集[1]，国外对其功效进行了大量的人体试验研究，但未对该浓缩物物进行毒理学评价。因此，本研究以GB15193.1-2014《食品安全性毒理学评价程序》为依据，对Fruitflow?进行毒理学研究，以评价其安全性，为Fruitflow?在保健食品、功能食品等领域的应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 药物

水溶性番茄浓缩物（Fruitflow?）（批号：201701），由汤臣倍健股份有限公司提供，人体口服推荐剂量为0.15g/天，试验时样品均用蒸馏水配制和稀释。

1.2 动物

SPF级ICR小鼠（体重18～22 g），雌雄各半，昆明小鼠（体重25～30 g）、SD大鼠（体重180～220 g）由广东省医学试验动物中心提供，许可证号SCXK（粤）2013-002。动物饲养在屏障环境，饲养温度为23～25℃，相对湿度在50%～70%之间，自然光照和黑暗交替12h/d，各组自由摄食和饮水，适应性喂养3-5天后随机分组进行试验。

1.3 试验方法

1.3.1 急性毒性试验

采用最大耐受量法，ICR小鼠，雌雄各半，采用最大耐受量 （MTD） 法。试验前动物禁食16h。灌胃体积为0.2 ml/10g体重，折合剂量为20.0g/kg.BW，受试液混悬液经口灌胃2次。灌胃后连续观察14d，观察期间记录小鼠的中毒症状、异常反应与死亡情况。

1.3.2 Ames试验

采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏茵组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株进行试验。采用多氯联苯（PCB）诱导的大鼠肝微粒体酶（S-9）作为体外代谢活化系统。试验设立8、40、200、1000、5000?g/皿5个剂量，同时设立自发回变组、溶剂对照组和阳性对照组。按平板掺入法在加与不加代谢活化系统（±S9）的条件下进行，每组设3个平行皿，重复2次。

1.3.3 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验

昆明种小鼠，雌雄各半，随机分为5组，每组10只，分别为阴性对照（植物油）、阳性对照（环磷酰胺40mg/kg）、fruitflow?（2.5g/kg，5.0g/kg和10g/kg）组。复合提取物用植物油配成相应剂量的受试液给小鼠灌胃。采用间隔 24h 两次经口灌胃法进行试验，按20 ml/kg体重灌胃，末次给样后6小时处死动物，取胸骨骨髓制片。每只动物计数200个嗜多染红细胞（PCE），计算嗜多染红细胞与成熟红细胞的比值 （PCE/NCE）;同时计数1000个PCE中含微核的细胞数，计算微核率。

1.3.4 小鼠精子畸形试验

将雄性昆明小鼠随机分为5组，每组5只，分别为阴性对照（植物油），阳性对照（环磷酰胺40mg/kg），fruitflow?（2.5g/kg，5.0g/kg和10g/kg）组，按20ml/kg体重灌胃给药，每日灌胃一次，连续5d。末次灌胃后第30d处死动物，取双侧附睾，做精子涂片，伊红染色，每只动物计数1000个完整精子，计算精子畸形率。

1.4 数据统计分析

采用SPSS22.0软件进行数据统计。微核试验采用Poisson分布U检验，精子畸形试验采用卡方检验对数据进行统计处理，大鼠 30d喂养试验各数据进行方差分析，以P<0.05作为显著性水平。

2 结果

2.1 急性毒性试验

由表1可见，以20.0g/kg剂量给两种性别的ICR种小鼠灌胃后未见明显中毒症状，观察14天未出现死亡。观察期末将动物处死进行解剖检查，肝、脾、胃、肠、心、肺等主要脏器，未见明显的异常改变。表明Fruitflow?对雌、雄ICR小鼠的最大耐受剂量均大于20.00g/kg，属无毒级。

2.2 Ames试验

由表2可见，在Ames试验中无论是否加S9， Fruitflow?各剂量组的回变菌落数都没有超过自发对照组的2倍，并且各剂量组之间未出现剂量—反应关系。说明Fruitflow?不具有致突变作用。

2.3 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验

由表3可见，与阴性对照组相比， Fruitflow?各剂量组的微核率未出现显著性差异（P>0.05），而环磷酰胺阳性组的微核率差异显著（P<0.05）。Fruitflow?各剂量组嗜多染红细胞 （PCE）与成熟红细胞 （NCE） 的比值未少于阴性对照组的20%，说明Fruitflow?未表现出细胞毒性。

2.4 小鼠精子畸形试验

由表4可见，与阴性对照组相比， Fruitflow?各剂量组的小鼠精子畸形发生率未见显著性差异（P>0.05），而环磷酰胺阳性对照组差异显著（P<0.05）。说明Fruitflow?对小鼠精子无致畸作用。

3 结论

水溶性番茄浓缩物（Fruitflow?）是第一个获得欧洲食品安全局（EFSA）13.5健康声称条款批准的天然健康安全配料，经多个科学研究证明可促进健康血液循环，可广泛应用于保健食品、功能食品等健康产品领域。研究表明，血小板在动脉粥样硬化的形成过程中起着非常重要的作用，可诱导、加速动脉粥样硬化的发生和发展。炎症等因素的刺激下，活化的血小板粘附血管内皮，释放一系列生物活性物质，增强白细胞募集、活化和迁移，增加脂质在血管壁的沉积，诱导动脉粥样硬化斑块的形成，阻碍血流的正常运行[2]。对于已发生动脉粥样硬化的患者而言，他们的血管壁上会出现许多斑块，这些斑块一旦破裂，生理性止血反应便会被“放大”，形成 病理性血栓[3]，堵塞血管，发生 脑缺血、 脑卒中、 心绞痛、 心肌梗塞等一系列严重的心血管事件。流行病学研究证据也表明，动脉粥样硬化性心血管病（冠心病[4]、脑卒中[5]、周围动脉疾病[6]）患者血小板聚集率、血小板活化后分泌的生物活性物质显著升高。除此以外，动脉弹性的减弱也与血小板的异常活化有关[7]。因此，维持正常血小板功能（防止异常活化和聚集）是防治动脉粥样硬化及心血管疾病的基础。Fruitflow?具有“维持正常的血小板聚集，有助于血流健康”的功效，其安全性在動物试验中也得到了进一步的验证。

在本实验室条件下， Fruitflow?对ICR小鼠的急性经口最大耐受量（MTD）大于20.00g/kg; Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形试验结果未见Fruitflow?有致突变作用。因此，本研究结果表明Fruitflow?未见明显毒副作用，为水溶性番茄浓缩物（Fruitflow?）作为保健食品的研究开发提供了重要的毒理学科学依据。

参考文献

[1]The EFSA Journal （2009）1101， 1-15.

[2]项荣等.血小板：动脉粥样硬化的诱导者和推动[J].中国细胞生物学学报，2010，32（5）：777-780.

[3]李佳蓓，黄岚.血小板在动脉粥样硬化血栓形成中的作用[J].中华心血管病杂志，2014，42（2）：175-177.

[4]马建林等.血小板膜糖蛋白和血小板凝集率变化与冠心病的临床意义，2010，12（1）：34-36.

[5]张江山等.缺血性脑卒中患者血小板功能与缺血性血管事件复发的相关性研究，2016，49（6）：451-457

[6]Takashi Kudoh et al. Relation between platelet microaggregates and ankle brachial index in patients with

[7]peripheral arterial disease. Thrombosis Research， 2006，117，263-269.

作者简介

汪玉芳（1982-），女，安徽省太湖县人。硕士研究生学历。职称：执业中药师、执业医师。主要研究方向为药品与保健食品研发。