精乌颗粒薄层鉴别方法

李哲 李菲 郭华静 高杰 郝娟娟 刘铁军

【摘 要】目的：改进精乌颗粒的薄层鉴别方法，完善其质量标准。方法：优化精乌颗粒中何首乌、黄精的样品处理方法及展开条件，同时建立女贞子、墨旱莲的薄层鉴别方法。结果：改进后何首乌，黄精鉴别方法及新建的女贞子，墨旱莲薄层鉴别方法显示在与对照品或对照药材相对应的位置，供试品显示相同颜色的荧光斑点或斑点，且阴性样品无相对应的斑点。结论：本实验建立的薄层鉴别方法操作简便、重现性好，专属性高，可更全面的评价精乌颗粒的质量。

【关键词】精乌颗粒;薄层鉴别;优化

【中图分类号】R282.5 【文献标志码】A 【文章编号】1007-8517（2019）19-0030-04

Abstract：Objective To improve the quality standard of Jingwu Granule.Methods The identification method of Polygonum multijiorum andRhizoma Polygonati in Jingwu granule was optimized by TLC， At the same time， establish the method of Ligustrum Lucidum Ait. and Ecliptae prostrate L. Results The results of the method showed that in the relative positions of the control，the samples showed the same color spots without interference. Conclusion The method was simple with good specificity and reproducibility，which could improve the quality control of .Jingwu Granule.

Key words：Jingwu Granule; TLC;Improvement

精烏颗粒收载于部颁标准中药成方制剂第十五册，由黄精（制）、制何首乌、女贞子（制）、墨旱莲4味饮片制成[1]，可补肝肾，益精血，壮筋骨，临床应用于失眠多梦，耳鸣健忘，头发脱落及须发早白等证[2]。精乌颗粒原质量标准（部颁标准中药成方制剂第十五册WS3-B-3012-98）鉴别一以大黄素对照品进行薄层色谱考察，结果大黄素Rf值大，且展开剂含有毒性较大的试剂苯，苯对人体的危害巨大，有必要对展开剂进行改进;鉴别二为黄精药材薄层鉴别，样品展开后拖尾严重，影响结果判定。为完善精乌颗粒质量标准，我们对何首乌、黄精的样品处理方法及展开条件进行进行优化，同时建立墨旱莲、女贞子的薄层定性鉴别方法。

1 仪器与材料

1.1 仪器 CPA225D分析天平（赛多利斯）、JM-A5002电子天平（余姚市纪铭称重校验设备有限公司）、加热套（北京科伟永兴仪器有限公司），电热恒温水浴锅（北京科伟永兴仪器有限公司），旋转蒸发仪（上海申生科技有限公司）。

1.2 材料 何首乌（批号：120934-201410）、女贞子（批号：121041-201404）、黄精（制）（批号：121553-201202）、墨旱莲（批号：120958-201708）、大黄素（批号：110756-201512）等对照药材及对照品均为中国药品生物制品检定所提供。精乌颗粒（批号：1902131、1902132、1902133，神威药业集团有限公司）。乙醇、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯、正己烷、甲酸、石油醚（60～90 ℃）均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 何首乌的薄层鉴别

2.1.1 原标准存在问题 该方法展开后大黄素的Rf值太大，斑点在溶剂前沿，不易判定结果，结果见图1。

2.1.2 何首乌鉴别方法优化

2.1.2.1 供试品制备方法改进 由于制成的颗粒为无糖颗粒，样品中不含蔗糖粉，将提取溶剂由乙酸乙酯改成乙醇，其他处理方法不变。

2.1.2.2 展开剂摸索 采用三氯甲烷-甲醇（7∶3），展距为3.5 cm，取出晾干，再以三氯甲烷-甲醇（20∶1）重新展开7.5 cm[3]。此方法何首乌的分离度低，重复性低，操作繁琐，需要的展开条件严格。其次采用石油醚（30～60 ℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）为展开剂 [4]。结果何首乌的斑点分离度低，虽然进行了分层，但是展开过程中仍然有分层现象;最后以正已烷-乙酸乙酯-甲酸（3∶1∶0.1）展开。结果何首乌分离度好，斑点清晰，比移值合适。

2.1.3 改进前后的质量标准对比 改进后质量标准在与对照药材和对照品相对应的位置，供试品显相同颜色的荧光斑点，且阴性对照在相对应位置无干扰。结果见表1、图2。

2.2 黄精的薄层鉴别

2.2.1 原标准中存在问题 由于样品中辅料蔗糖影响黄精斑点的分离度，致使斑点呈条带状，无法判定结果，结果见图3。

2.2.2 黄精鉴别方法优化

2.2.2.1 供试品制备方法改进 由于样品中多糖等成分的影响，致使斑点分离度低，因此供试品处理方法增加精制过程，首先将提取后的滤液用水饱和的正丁醇40mL分两次洗涤，最终正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，结果黄精斑点显色清晰。

2.2.2.2 展开剂摸索 首先尝试石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯-甲酸-甲醇（5∶4∶1∶1），结果黄精样品斑点显色不清晰，样品的分离度低。且展开剂出现分层现象，导致斑点错乱，将展开剂进行分层之后重新展开，薄层板出现分层现象，所显示的斑点依然不明显。其次考察展开剂石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-甲醇（5∶4∶1），结果显色后黄精斑点出现拖尾现象;将该展开剂中甲醇换成甲酸，其他条件不变，结果黄精的Rf值太大，且出现分层现象。将石油醚（60～90 ℃）、乙酸乙酯、甲酸的比例调整为5∶2∶0.1[5]，结果样品分离度好，斑点清晰，但黄精Rf值太小;最终将三者的比例调整为5∶3∶0.1，结果黄精的斑点清晰，分离度高。

2.2.3 改进前后质量标准对比 改进后质量标准在与对照药材相对应的位置，供试品显相同颜色的斑点，且阴性对照在相对应位置无干扰。结果见表2、图4。

2.3 墨旱莲、女贞子鉴别方法摸索

2.3.1 供试品制备方法建立 墨旱莲、女贞子中有效成分为脂溶性，因此样品制备过程中先将精乌颗粒加水溶解，过滤后将滤液用乙酸乙酯萃取，挥干溶剂，残渣分别用无水乙醇-三氯甲烷（3∶2）、甲醇1mL溶解，结果甲醇溶解效果较好。

2.3.2 墨旱莲鉴别展开条件摸索 以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（9∶2∶2∶0.5）的上层溶液展开，结果墨旱莲的分离度低，而且出现分层现象。在做何首乌鉴别时，发现墨旱莲用何首乌的展开剂的分离度较好，所以将墨旱莲的展开剂改为何首乌的展开剂。结果墨旱莲斑点清晰，分离度好，Rf值合适。

2.3.3 女贞子鉴别展开条件摸索 根据查阅文献，考察以环己烷-丙酮-乙酸乙酯（5∶2∶1）[6]为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，结果显色依然不清晰，且斑点分离度低;将展开剂换成三氯甲烷-甲醇-甲酸（40∶1∶1）[7-8]，显色剂不变，结果斑点显色清晰，但比移值太小;以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-甲酸（6∶4∶0.1）为展开剂，显色剂不变，结果斑点明显，分离度高。由于在进行黄精的鉴别实验时，发现女贞子的显色更明显，所以最终显色剂为5%香草醛的硫酸溶液。

2.3.4 新建墨旱莲、女贞子薄层鉴别方法 由表3、图5、图6可知，墨旱莲、女贞子质量标准在与对照药材在相对应的位置上，供试品显相同颜色的荧光斑点和斑点，且阴性样品无干扰。

3 讨论

3.1 精乌颗粒何首乌的薄层鉴别方法研究 精乌颗粒原标准中大黄素鉴别方法展开剂为苯-乙醇，毒性较大，对人体的危害巨大;同时大黄素对照品的Rf值太大，斑点在溶剂前沿，不易判定结果，因此本实验对供试品溶液处理方法及展开剂进行优化意义重大，改进后的方法以何首乌对照药材、大黄素对照品同时作为对照，控制指标更全面。样品的点样量由10μL减少到1～3μL，操作更简便快捷;最终确定展开剂为正已烷-乙酸乙酯-甲酸（3∶1∶0.1），样品斑点清晰，分离度高，阴性样品无干扰，该方法可用于何首乌的鉴别。

3.2 精乌颗粒黄精的薄层鉴别方法研究 精乌颗粒原标准中黄精鉴别样品处理方法简单，由于辅料蔗糖的影响，展开后斑点拖尾严重，甚至呈条带状，首先对样品处理方法进行优化，增加正丁醇萃取，由图3、图4对比结果可见，方法改进后薄层色谱中各斑点无拖尾现象。其次对展开剂进行摸索，分别考察石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-甲酸不同比例，最终确定比例为5∶3∶0.1时，黄精斑点清晰，分离度高，且阴性对照无干扰，该方法可用于黄精的鉴别。

3.3 精乌颗粒墨旱莲、女贞子的薄层鉴别方法研究 墨旱莲、女贞子的鉴别采用同一供试品溶液，简化了操作流程，节约检验成本。起初二者采用同一展开剂，结果与墨旱莲对照药材相对应斑点的比移值太大，而与女贞子对照药材相对应斑点的比移值太小，二者不能兼顾，经过摸索确定墨旱莲的展开剂同何首乌鉴别方法。女贞子的展开剂为石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-甲酸（6∶4∶0.1）。

3.4 薄层鉴别方法耐用性研究 本实验所建立的精乌颗粒4味饮片薄层鉴别方法均经过方法学验证，分别对环境温湿度及薄层板耐用性进行考察，环境温湿度包括低温（2 ℃）、常温（25 ℃）、高温高湿（温度40 ℃，湿度75%）三种条件，薄层板耐用性分别考察烟台江友硅胶开发有限公司预制G板、青岛海洋化工厂分厂预制G板以及青岛海洋化工厂硅胶G自制板三种载体，均得到满意的分离效果，说明新建的薄层鉴别方法耐用性良好。

综上，改进后精乌颗粒质量标准中何首乌，黄精的薄层鉴别方法以及新建的女贞子、墨旱莲的薄层鉴别方法操作简便，重现性好，专属性高，可更全面的评价精乌颗粒的质量。

参考文献

[1]李哲，戎艳艳，杨斯斯，等.多指标综合评分法优化精乌颗粒成型工艺[J].海峡药学，2018，30（1）：23-24.

[2]李虎亮，高永宾，修亚丽.精乌颗粒微生物限度检查方法验证[J].临床心身疾病杂志，2015，12（21）：18-19.

[3]卢婉妃，顾超群，马佳丽，等.补肾祛瘀颗粒的质量标准研究[J].中国药房，2019，30（9）：1230-1235.

[4]国家药典委员会，中华人民共和國药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：886.

[5]王薇，张义生，范彦博，等.天地精丸质量标准的建立[J].中国药师，2016，19（10）：1954-1956.

[6]赵婷婷，张淹，李士栋，等. 双黄平喘颗粒中的成分鉴别及含量测定研究[J].世界中西医结合杂质，2016，11（5）：653-659.

[7]王红波，郭冬，王齐，等.添子胶囊的质量标准的建立[J].中国药师，2018，21（7）：1289-1291.

[8]徐芳琴，马晨超，曹金一，等.露源胶囊中枸杞子、女贞子的薄层色谱鉴别研究[J].中国药业，2016，25（20）：57-59.

（收稿日期：2019-07-10 编辑：刘斌）