肝细胞癌患者TACE术后miR-122水平与CT灌注参数间的相关性分析

李天纵，安天志，周 石

1.贵州医科大学医学影像学院，贵州 贵阳 550004； 2.贵州医科大学附属医院介入科

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是临床消化系统常见恶性肿瘤之一，其发病率、死亡率、复发率高，在全球肿瘤相关死因中居第3位[1]。外科手术为HCC治疗首选，然而约75%的患者确诊时已为中晚期，仅少部分适合手术治疗。肝动脉化疗栓塞(transcatheter arterial chemoembolization，TACE)是无法实施手术治疗的HCC患者首选治疗方法之一，近期治疗效果显著，但长期疗效不佳[2]。微小RNA(microRNA，miRNA)为近年肿瘤研究的热点，参与多种肿瘤疾病的发生、发展，与肿瘤诊断、治疗及预后相关，miR-122为肝脏特异性miRNA，约为肝脏总miRNA的70%，参与HCC发生、发展与转归[3]。而CT灌注成像技术是一种无创、定量检测方法，在肿瘤血管生成评估中得到广泛应用[4]。但临床中关于HCC患者TACE术后miR-122水平与CT灌注参数及预后复发相关性的研究报道较少，因此，本研究旨在对HCC患者TACE术后miR-122水平与CT灌注参数及术后复发相关性分析，为其治疗和预后评估提供参考资料。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2015年1月至2016年12月贵州医科大学附属医院介入科收治的行TACE术治疗的78例HCC患者为研究对象，选取同期70例肝良性病变患者(肝炎、肝硬化等)作为对照组，纳入标准：(1)经组织病理学确诊为HCC患者；(2)在本院行TACE治疗者；(3)患者及家属对本研究知情，并签署知情同意书；(4)经本院伦理委员会审核批准。排除标准：(1)年龄<18岁者；(2)生命预期低于3个月者；(3)首次治疗非TACE治疗者；(4)有严重心、肝、肾等器官代谢障碍或衰竭者；(5)合并凝血功能障碍者；(6)CT检查对比剂过敏者；(7)合并其他恶性肿瘤者；(8)妊娠期或哺乳期妇女。HCC患者男63例，女15例；年龄(54.84±5.57)岁(37～77岁)；肿瘤直径(7.04±2.03)cm(2.5～14.83 cm)；甲胎蛋白(AFP)≥400 μl/L 38例，<400 μl/L 40例；肝功能Child-Pugh评分A级45例，B级33例；对照组：男50例，女20例；年龄(53.62±5.45)岁(35～76岁)，两组受试者性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 试剂与仪器 TrizolRN0402购自Aidlab公司，逆转录、AceQ qPCR SYBR Green Master Mix(Q131-02)荧光定量试剂盒购自Vazyme公司，碘佛醇注射液购自上海莱科信谊药业有限责任公司，DR6000紫外分光光度计购自美国哈希公司，StrataGene Mx3005P实时荧光定量PCR仪购自美国Agilen公司，SOMATOM Definition Flash 128层双源CT机购自德国西门子公司，引物序列由上海生工公司合成。

1.3 方法(1)血清miR-122检测：采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清miR-122水平，总RNA提取：Trizol法提取总RNA，检测RNA浓度和纯度；逆转录cDNA合成：配制反应体系，反应条件：25 ℃ 5 min，50 ℃ 15 min，85 ℃ 5 min；qRT-PCR：以U6为内参基因，配制反应体系进行PCR扩增，反应条件：50 ℃ 2 min、95 ℃ 10 min、95 ℃ 30 s、60 ℃ 30 s、40个循环，采用2-ΔΔCT方法计算miR-122相对表达量，引物序列见表1。(2)CT灌注扫描：术前进行常规增强CT扫描，2 h后进行CT灌注扫描，术后1个月进行第2次CT灌注扫描，扫描部位为整个肝脏，进行多层动态灌注扫描，80 kV管电压，80 mA管电流，512X512矩阵，0.6螺距，5 mm厚度，扫描时间51.5 s，肘静脉注射碘对比剂(碘佛醇370 mg/ml)50 ml，流速5 ml/s，跟加50 ml生理盐水，流速5 ml，对比剂注射后延长6 s启动扫描，扫描图片传至Syngo Muti Modality Workplace工作站，软件计算肝血流量(hepatic blood flow，HBF)、肝动脉灌注量(hepatic arterial perfusion，HAP)、门静脉灌注量(portal venous perfusion，PVP)及肝动脉灌注指数(hepatic perfusion index，HPI)参数的伪彩图，记录各灌注参数值。

2 结果

2.1 HCC患者手术前后及与对照组血清miR-122水平比较HCC患者术前、术后血清miR-122水平高于对照组(P<0.05)，而术后患者血清miR-122水平低于术前(P<0.05，见表2)。

表2 HCC患者手术前后及与对照组血清miR-122水平比较Tab 2 Comparison of serum miR-122 levels in patients with HCC before and after operation and control group

注：与对照组比较，*P<0.05；与术前比较，#P<0.05。

2.2 HCC患者手术前后及与对照组CT灌注参数比较HCC患者术前、术后患者HBF、HAP、HPI均高于对照组(P<0.05)，术后HBF、HAP、HPI低于术前(P<0.05)；术前、术后患者PVP低于对照组(P<0.05)，术后高于术前(P<0.05，见表3)。

2.3 HCC患者血清miR-122与CT灌注参数相关性HCC患者血清miR-122与HBF、HAP、 HPI呈正相关(P<0.05)，与PVP呈负相关(P<0.05)。

表3 HCC患者手术前后及与对照组CT灌注参数比较Tab 3 Comparison of CT perfusion parameters in patients with HCC before and after operation and control

注：与对照组比较，*P<0.05；与术前比较，#P<0.05。

表4 HCC患者血清miR-122与CT灌注参数相关性Tab 4 Correlation between serum miR-122 and CT perfusion parameters in patients with HCC

2.4 血清miR-122与HCC患者术后复发关系HCC术后2年，复发58例，复发率为74.36%，复发患者血清miR-122水平高于未复发患者(P<0.05，见表5)。

表5 血清miR-122与HCC患者术后复发关系Tab 5 Relationship between serum miR-122 and recurrence of HCC patients

3 讨论

HCC是严重影响全球卫生和健康的重要疾病之一，每年新增病例约78万，死亡病例75万，全世界以中国与日本HCC发病率最高，其中40%以上新增病例与死亡病例来自中国，给社会带来极大经济负担[5-6]。TACE是中晚期HCC患者局部治疗最主要的方法，目前国内采用TACE治疗患者约为总HCC患者的61.9%，其主要是通过灌注高浓度抗肿瘤药物并栓塞肿瘤血管，既能起到局部杀肿瘤细胞作用，又能提高肿瘤缺血坏死程度，起到双重抗肿瘤作用[7]。但TACE术后组织残留率高，远期疗效不理想，预后复发率高。因此，本研究通过对HCC患者TACE术后血清miR-122水平检测，并对其与CT灌注参数、预后复发关系进行研究，为HCC治疗和预后复发评估提高资料支持。

miRNA是一类长度为19～25个核苷酸的高保守非编码单链小分子RNA，在各种生物体中广泛存在，通过介导转录后调控，参与机体发育、细胞增殖、分化、凋亡等过程。近年来大量研究发现，miRNA在肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移及肿瘤疾病早期诊断、靶向治疗及预后评估中发挥重要作用。GUO等[8]研究发现，原发性肝癌组织中miR-21水平高于癌旁组织，血清miR-21水平高于健康对照者，诊断灵敏度为82.1%，特异度为83.9%，并与临床分期、远处转移相关，可作为其早期诊断血清检测指标。miR-122是被发现的第1个肝脏特异性表达miRNA，在肝细胞生长、病毒感染、肝纤维化、HCC等过程中发挥调控作用。尚冰等[9]研究发现，miR-122在HCC患者血清中高表达，与临床分期、组织分化程度、肿瘤大小及肝硬化相关，手术患者血清miR-122水平低于手术前，对其诊断和病情评估有重要意义。SUEHIRO等[10]研究证实，HCC患者TACE术后血清mir-122水平降低，并与肿瘤直径、Child-Pugh评分相关，可作为HCC肝硬化患者预后评估的血清检测指标。本研究结果显示，HCC患者术前、术后血清miR-122水平高于对照组，而术后患者血清miR-122水平低于术前，与李华民[11]研究结果相似，提示HCC患者TACE术后血清miR-122水平降低。有研究[10]表明，miR-122与肝损伤严重程度相关，TACE术后血清miR-122水平降低，提示TACE术可减轻肝损伤。

CT灌注成像是一种新型成像技术，其主要是通过对肿瘤供血特点和内循环灌注情况进行评估，以确切反映TACE术后治疗效果。CT灌注主要通过评估肿瘤血流灌注情况来评价肿瘤治疗效果，而非肿瘤大小变化，因此CT灌注被认为是评价HCC血流动力变化最佳检查方法[12]。梁长华等[13]研究发现，CT灌注参数可定量反映不同分化程度HCC患者肿瘤新生血管状况及血流动力学特点，可作为肿瘤恶化程度和肿瘤血管生成检查方法。本研究结果显示，HCC患者术前、术后患者HBF、HAP、HPI均高于对照组，术后低于术前；术前、术后患者PVP低于对照组，术后高于术前，与吕茜婷等[14]研究结果相似，提示TACE术可减少HCC患者肿瘤血管生成。进一步通过相关性分析显示，HCC患者血清miR-122与HBF、HAP、HPI呈正相关，提示血清miR-122和CT灌注参数可反映HCC生物学特性，二者对TACE疗效评价及指导抗血管治疗药物使用具有重要意义。另外，HCC确诊时多为中晚期患者，常选择TACE治疗，而TACE术后可肿瘤组织中形成缺氧环境，缺氧条件可导致肿瘤新血管生成，引起患者复发。最后本研究显示，HCC患者TACE术后2年复发率为74.36%，复发组患者血清miR-122水平高于未复发组，与辛海荣等[15]研究结果相似，提示HCC患者TACE术后复发率高，miR-122可能作为其术后复发的预测指标。

综上所述，本研究发现HCC患者TACE术后血清miR-122水平降低，与CT灌注参数间相关，且高水平miR-122患者术后易复发，可作为其术后复发评估的检测指标。本研究有一定不足之处，即本研究为单中心选样，且样本量有限，可能会产生一定结果误差，在进一步研究中尽可能开展多中心研究，扩展样本量，以提高研究的准确性。