疫苗免疫剂量及次数对鸭病毒性肝炎母源抗体的影响

朱俊平，潘柳婷

（山东畜牧兽医职业学院，山东潍坊 261061）

近几年，我国鸭养殖业迅速发展，但仍以“小规模、大群体”的养殖模式为主，使得鸭病流行较为广泛[1]。鸭病毒性肝炎（DVH）主要引起20 日龄内雏鸭的严重死亡，给养鸭业造成严重经济损失。目前主要采取对种鸭或1 日龄雏鸭免疫疫苗的方式来预防DVH[2]。但许多地区采取主动或被动免疫后，仍无法有效控制该病的发生和流行，这可能与免疫程序是否有效有很大关系[3]。目前，对于疫苗免疫剂量和次数对鸭DVH 抗体影响的研究较少。本研究旨在了解免疫剂量和次数对枫叶鸭种鸭DVH 抗体产生的影响，以期为种鸭场免疫程序制定提供依据。

1 材料

1.1 试验动物

2 月龄体质量均等的枫叶种鸭120 只（试验组），1 日龄体质量均等的无母源抗体枫叶雏鸭120 只（对照组），均购自山东永惠枫叶种鸭有限公司，按照常规饲养管理。

1.2 试验试剂

DVH 弱毒活疫苗（CH60 株），由哈药集团生物疫苗有限公司生产；DVH 抗体（DVh-Ab）ELISA 检测试剂盒，上海泛柯实业有限公司生产；鸭肝炎病毒AV2111 株，购自中国兽药监察所。

2 方法

2.1 试验分组及免疫方案

将购买的120 只种鸭随机分为3 组（A1、A2、A3），每组40 只。按照疫苗使用说明书稀释疫苗。各组按不同免疫程序免疫DVH 弱毒苗，对免疫后收获的第1 周及第4 周种蛋，按常规方法孵化。

A1 组：留种蛋前3 周，腿部肌内注射DVH弱毒苗0.5 mL；A2 组：留种蛋前5 周和前3 周，各腿部肌内注射DVH 弱毒苗0.5 mL；A3 组：留种蛋前5 周和前3 周，分别腿部肌内注射DVH 弱毒苗0.5 mL 和1 mL。

2.2 雏鸭抗体水平检测和攻毒保护试验

2.2.1 第1 周种蛋孵化雏鸭（B 组）将A1、A2、A3 组种鸭免疫后收获的第1 周种蛋孵出的雏鸭，对应编号B1、B2、B3 组，每组120 只；另设对照组，为购买的120 只1 日龄无母源抗体雏鸭。试验组和对照组雏鸭分别在1、4、7、10 d 时心脏采血，采用ELISA 方法进行抗体检测；同时于1、4、7、10 d 分别随机取30 只，皮下注射0.1 mL 鸭肝炎病毒进行攻毒试验，剩余雏鸭和对照组同期皮下注射生理盐水0.1 mL。隔离常规饲养，观察并记录各组雏鸭发病死亡数量。

2.2.2 第4 周种蛋孵化雏鸭（C 组）将A1、A2、A3 组种鸭免疫后收获的第4 周种蛋孵出的雏鸭，对应编号C1、C2、C3 组，每组120 只。试验方法同B 组。

3 结果与分析

3.1 B 组试验

种鸭接种DVH 疫苗后，分别检测B1、B2、B3 组各日龄雏鸭的ELISA 抗体效价，计算平均值。结果显示：B1 组平均抗体效价为0.52～0.57，雏鸭攻毒保护率为73.3%～93.3%；B2 组平均抗体效价为0.54～0.59，雏鸭攻毒保护率为86.7%～100%；B3 组平均抗体效价为0.56～0.63，雏鸭攻毒保护率为90.0%～100%。从结果中可以看出，各组的OD值1 日龄最高，之后随日龄增长逐渐减少，雏鸭攻毒保护率也随之降低（表1）。试验过程中无其他情况导致的死亡。

表1 B 组雏鸭抗体水平测定和攻毒试验结果

3.2 C 组试验

种鸭接种DVH 疫苗后，分别检测C1、C2、C3 组各日龄雏鸭的ELISA 抗体效价，计算平均值。结果显示：C1 组平均抗体效价为0.40～0.46，雏鸭攻毒保护率为40.0%～56.7%；C2组平均抗体效价为0.42～0.47，雏鸭攻毒保护率为50.0%～60.0%；C3 组平均抗体效价为0.45～0.50，雏鸭攻毒保护率为56.7%～70.0%（表2）。试验过程中无其他情况导致雏鸭死亡。从结果中能够看出，随日龄增长，C1、C2、C3 组雏鸭抗体效价均呈下降趋势。

表2 C 组雏鸭抗体水平测定和攻毒试验结果

3.3 数据对比

将两组的检测和试验数据进行对比发现，OD值B3＞B2＞B1，C3＞C2＞C1，说明鸭DVH弱毒苗（CH60 株）免疫剂量和免疫次数的确能够影响鸭肝炎抗体水平。同时，攻毒保护试验显示，雏鸭保护率B3＞B2＞B1＞对照组，C3＞C2＞C1，与雏鸭抗体效价呈正相关，说明种鸭免疫后产生的母源抗体，能够保护雏鸭不受鸭肝炎病毒侵害。C 组OD 值低于B 组，说明母源抗体会随着种鸭免疫时间延长逐渐减少，从而降低对雏鸭的保护力。种鸭免疫后第4 周种蛋孵出雏鸭的攻毒保护率仍能够达到50%以上，说明DVH 弱毒苗（CH60株）免疫效果确实有效。

4 讨论

目前检测DVH 抗体的方法主要有间接血凝抑制试验、血清中和试验、免疫扩散试验、间接酶联免疫吸附试验等。国标 GB/T 17999.5—1999 检测DHV-Ⅰ及其抗体的方法为血清中和试验[4]。虽然血清中和试验是公认的权威性、高特异性方法，但其操作繁琐、耗时。为此，研究人员开始建立其他检测方法。如赵新柳等[5]首次建立了间接ELISA方法用于检测鸭肝炎抗体，检出阳性率为100%。近几年很多学者不断优化间接 ELISA 试验条件，使该法的敏感性和特异性逐步提高[6]。因此，本试验选择ELISA 检测雏鸭母源抗体。本试验检测结果略高于孙泉云等[7]的间接ELISA 检测结果，说明本研究所用疫苗效果较好。

由于DVH 病毒主要侵害20 日龄以内，尤其是10 日龄内的雏鸭，因此做好20 日龄以内雏鸭的防疫工作非常重要。目前预防DVH 常用疫苗主要为灭活苗和弱毒苗。本试验选用DVH 弱毒活疫苗（CH60 株），是因为该疫苗可以通过接种种鸭和雏鸭两种方式进行DVH 防控。

有文献[8]表示，若在雏鸭孵出后再对其免疫，则雏鸭在抗体产生过程中易感染DVH 病毒，因此应对种鸭进行免疫，将母源抗体通过卵传递给雏鸭，使雏鸭获得保护。本试验即通过对种鸭免疫，检测雏鸭体内的母源抗体效价，以此判断母源抗体能否保护雏鸭不受DVH 病毒感染。攻毒保护试验结果表明，有母源抗体的雏鸭组抗体效价明显多于无母源抗体的雏鸭组，且攻毒后保护率较高，说明母源抗体能够保护雏鸭不受DVH 病毒感染，且雏鸭体内的抗体水平直接影响攻毒后对雏鸭的保护率。

攻毒试验结果证明，间隔2 周再免疫同等剂量DVH 弱毒活疫苗（CH60）种鸭，比免疫1 次产生的抗体效价要高，说明免疫次数能够影响产生鸭肝炎抗体水平。Rispensls[9]研究表明，种鸭免疫后第6 周进行2 次弱毒疫苗免疫，免疫后9 个月左右时间内，其孵出的雏鸭能获得较好的天然被动免疫。丛秋实[10]研究表明，在22 周进行初次免疫，24 周二次接种加强免疫，将会产生更为强的免疫效力。Hwang 等[11]也证实，为保证后代雏鸭有足够高的抗体水平，对种鸭必须进行2 次或3 次弱毒苗免疫。本试验结果也基本与上述研究结果相符。

即使仅免疫1 次，且免疫量为1 剂量/羽份，雏鸭攻毒保护率也能达到60%以上，说明DVH 弱毒苗（CH60 株）非常有效。

综上所述，DVH 的免疫接种非常重要，能够有效减少养鸭业经济损失，可以采用种鸭、雏鸭共同免疫的方法。但对雏鸭免疫，还需考虑免疫时雏鸭体内是否有母源抗体的干扰。有文献[12]表明，若母源抗体较高，则说明母源抗体还具有很好的保护性，雏鸭可在7～10 日龄免疫；若较低，则说明母源抗体已不能起到保护作用，应及时进行免疫，需要在1～3 日龄免疫。另外，国内外不同学者所测不同疫苗达到较好免疫效果所用的免疫剂量和次数有所不同，这可能与疫苗种类有关。

因此，不同养鸭场在免疫前，应考虑不同疫苗间的免疫效果及相互作用，结合鸭肝炎母源抗体在雏鸭体内的消长规律，测定本场雏鸭体内抗体水平，最终制定出适合本场的DVH 免疫程序，这样可最大程度减少DVH 引起的经济损失。

4 结论

研究表明：对种鸭进行DVH 疫苗免疫的次数和剂量，均能影响雏鸭体内抗体水平的高低，进而影响对雏鸭的保护力；雏鸭母源抗体会随着种鸭免疫时间延长逐渐减少，从而降低对雏鸭的保护力；对种鸭免疫DVH 弱毒苗（CH60 株）能够对孵出的雏鸭提供较高的母源抗体。因此，为避免母源抗体干扰，建议对种鸭进行DVH 弱毒苗（CH60 株）免疫，为保证对雏鸭提供较强免疫的保护，最好对种鸭进行加强免疫。