沉水樟芝抗肝癌药效学研究

王 宫，王 瑾，陈耀金

（福建省中医药研究院，福建 福州 350003）

肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是全球第六大常见肿瘤，且是癌症中死亡的第三大常见原因［1］，患者的5年相对生存率只有7%。因此，筛选潜在、有效的抗肝癌药物，是目前医学界的重要任务。樟芝（Antrodia camphorata Zang&Su）属于担子菌纲（Basidiomycetes），多孔菌目（Polyporales），多孔菌科（Polyporaceae），薄孔菌属（Antrodia），是 20 世纪 90年代在台湾发现的食（药）用真菌［2］。近年来的研究证实其具有解毒保肝、消除肿瘤、补肾强心、益胃整肠、强化免疫、镇痛抗菌等作用［3-8］。牛樟树作为自然界中樟芝的唯一宿主，只在台湾地区有分布，数量极为稀少，加上野生牛樟芝生长缓慢，资源严重短缺，价格十分昂贵。其高昂的价格严重制约了樟芝这种具有极大药用价值的菌类的应用和开发。我们利用福建地区资源丰富的沉水樟树作为樟芝的新宿主，培育出沉水樟芝。为推动这一新兴名贵食（药）用菌的开发及深入研究，本文对其抗肝癌作用的初步药效学进行研究。

1 实验材料

1.1 实验药物 沉水樟芝（福建永安，人工培育）；氟脲嘧啶（天津金耀氨基酸有限公司，批号：09032 61）。

1.2 实验动物及瘤株 SPF级健康成年雌性ICR小鼠，6～8 周龄，体质量（20±2）g，购于上海斯莱克实验动物有限公司，许可证号：SCXK（沪）2007-0005，由福建中医药大学实验动物中心饲养，实验期间自由进食、饮水。H22肝癌实体瘤细胞由厦门大学实验动物中心提供，实验动物使用许可证号为：SYXK（闽）2005-0004。

2 实验方法

2.1 沉水樟芝药液制备 取沉水樟芝粉碎至粗粉，按料液比1∶10加入95%乙醇溶液，加热回流提取2次，每次1.5 h，合并提取液，抽滤，滤液于旋转蒸发仪中浓缩至一定体积后水浴蒸干，得沉水樟芝95%乙醇提取物，待使用时配制成高、中、低3个剂量组的灌胃液。

2.2 H22细胞株接种 取20只ICR小鼠腹腔接种H22细胞株，9 d后选择腹水生长良好的小鼠作为腹水瘤源小鼠，颈椎脱臼处死，无菌抽取乳白色腹水液，800 r／min离心10 min，加入PBS溶液制成瘤细胞悬液。另取50只ICR小鼠，每只侧腋窝皮下接种0.2 mL（2×106细胞）瘤细胞悬液，建立肝癌小鼠模型，接种瘤细胞24 h后进行灌胃给药［9］。

2.3 分组及干预 将肝癌荷瘤小鼠随机分为模型组、氟脲嘧啶组及沉水樟芝高、中、低剂量组各10只。沉水樟芝高、中、低剂量组分别按 16、8、4 g／（kg·d）予沉水樟芝药液灌胃，氟脲嘧啶组按0.025 g／（kg·d）予氟脲嘧啶腹腔注射，模型组予同等体积生理盐水灌胃。每日1次，连续给药10 d。

2.4 取材和指标测定 末次给药24 h后，称取小鼠重量，颈椎脱臼处死小鼠，剥离瘤块并取脾脏和胸腺，滤纸吸干后称其质量。

2.5 统计学方法 采用SPSS 16.0软件进行统计学分析。计量资料符合正态分布以（）表示，采用单因素方差分析。

3 结 果

3.1 5组瘤质量及抑瘤率比较 见表1。

表1 5组瘤质量及抑瘤率比较（）

表1 5组瘤质量及抑瘤率比较（）

注：与模型组比，1） P＜0.01；与氟脲嘧啶组比较，2） P＜0.01。

组别模型组氟脲嘧啶组沉水樟芝低剂量组沉水樟芝中剂量组沉水樟芝高剂量组n 10 10 10 10 10瘤质量／g 2.813±0.694 0.931±0.4471）2.387±0.5352）1.703±0.3481）2）1.134±0.5211）抑瘤率／%—66.90 15.142）39.462）59.69

3.2 5组胸腺指数、脾指数比较 见表2。

表2 5组胸腺指数、脾指数比较（）mg／g

表2 5组胸腺指数、脾指数比较（）mg／g

注：与模型组比，1） P＜0.05，2） P＜0.01。

组别模型组氟脲嘧啶组沉水樟芝低剂量组沉水樟芝中剂量组沉水樟芝高剂量组n 10 10 10 10 10胸腺指数3.112±0.639 2.541±0.3941）3.241±0.530 3.293±0.347 3.153±1.515脾指数5.562±1.258 4.693±0.9371）5.569±1.028 6.326±1.1201）6.897±1.4222）

4 讨 论

沉水樟芝在抗肝癌方面的研究报道较少，本实验结果显示沉水樟芝95%乙醇提取物对肝癌H22荷瘤小鼠的移植瘤具有一定的生长抑制作用，抑瘤率为15.14%～59.69%。当灌胃给药量达到相当于沉水樟芝药材量16 g／（kg·d）时，抑瘤率达到最高，为59.69%，且通过称取瘤质量，发现与氟脲嘧啶组小鼠的瘤质量比较差异无统计学意义（P＞0.05），说明其对肝癌H22荷瘤小鼠模型的移植瘤抑制效果与氟脲嘧啶相当。

大量研究资料表明，机体的免疫功能会由于肿瘤的进行性生长而被抑制，导致胸腺和脾脏指数出现异常［10］。因此，本实验通过测定小鼠的胸腺指数和脾脏指数，初步评价沉水樟芝提取物对肝癌H22荷瘤小鼠非特异性免疫功能的影响。实验结果表明，氟脲嘧啶的抑瘤率虽高达66.90%，能有效抑制肿瘤细胞的生长，但会降低荷瘤小鼠的胸腺指数和脾脏指数（P＜0.05），说明氟脲嘧啶在杀伤肿瘤细胞的同时，也对小鼠胸腺和脾脏的生长发育起到抑制作用，使肝癌H22荷瘤小鼠的免疫功能更加低下。而沉水樟芝提取物各剂量组小鼠的胸腺指数与模型组比较无显著性差异（P＞0.05），说明沉水樟芝提取物对于该小鼠模型的胸腺生长发育影响不大。与模型组相比，沉水樟芝提取物中、高剂量组小鼠的脾指数增加（P＜0.05），提示沉水樟芝提取物具有一定的增强免疫作用，能通过对该小鼠模型脾脏的保护作用而在一定程度上改善其非特异性免疫功能。

综上所述，沉水樟芝95%乙醇提取物对肝癌H22荷瘤小鼠既有抑制移植瘤生长的作用，又能在一定程度上改善其非特异性免疫功能，且不影响小鼠模型的胸腺生长发育，其抗肿瘤作用值得更深入研究。