龙眼叶乙酸乙酯提取物抗氧化活性研究

鄢宏俊，覃 茜，韦 玮，陈俊平，李培源

(广西中医药大学 药学院，广西 南宁 530001)

龙眼俗名“桂圆”，别名益智、羊眼、龙目等，它作为我国长期栽培植物，多种植于广西、广东和福建，不仅有较高的经济效益，还具有良好的药用价值[1]。龙眼多以叶入药，性平味微苦，有清热解毒，解表利湿之效，内用可治感冒、肠炎等疾病，外用治阴囊湿疹[2]。黄酮类化合物多存在于自然植物的根、茎、叶等中，是重要的一类天然有机化合物[3]。研究表明，黄酮类化合物具有抗炎抑菌,抗氧化 抗辐射,抗癌,抗肿瘤等药理作用，其中抗氧化成为近年研究的主要内容之一[4]。黄酮类化合物多溶于强极性溶剂中，例如丙酮、乙醇、甲醇、乙酸乙酯等。在往年龙眼叶的研究中，以确定丙酮或乙醇为溶剂提取的龙眼叶总黄酮对自由基均具有较强的清除能力[5-6]。但关于乙酸乙酯为溶剂的龙眼叶提取物仅停留于降血糖实验，并未对乙酸乙酯龙眼叶提取物进行自由基清除能力评定[7-8]。因此，本实验通过以乙酸乙酯为溶剂提取龙眼叶中的总黄酮类化合物，考察龙眼叶乙酸乙酯提取物的抗氧化活性和对自由基的清除能力，从而为今后龙眼叶的开发与应用提供参考数据。

1 材料与仪器

UV1901型紫外可见分光光度计(北京普析电子科技有限公司)。

2 方法

2.1 龙眼叶乙酸乙酯提取物制备

称取20 g龙眼叶粉末，加入200 mL乙酸乙酯(95%)，冷浸72 h。重复上述操作3次，合并提取液。旋转蒸发回收溶剂，得到龙眼叶乙酸乙酯提取物。

2.2 二苯基苦味肼基自由基(DPPH)体系[9]

取不同浓度龙眼叶乙酸乙酯提取物提取物溶液(0.2、0.5、0.8、1.2、1.5、1.8和2.0 mg/mL)加入8 mL DPPH(0.004%)溶液中。在最大波长处(517 nm)测吸光度，直到平衡为止。清除率计算公式如下：S % = (1-A样品)/ A空白 × 100%。其中，A空白为未加药液的DPPH溶液的吸光度，A样品为加入药液的DPPH溶液的吸光度。

2.3 还原能力测定[10]

在锥形瓶中加入0.2 mL龙眼叶乙酸乙酯提取物提取物溶液，2.5 mL pH值=7.4的PBS溶液以及2.5 mL浓度为1% 的KFe(CN)4溶液，混合均匀后放于50℃水浴20 min，加入2.5 mL浓度为10%的三氯乙酸溶液，离心10 min。取上清液和蒸馏水各2.5 mL，加入0.5 mL浓度为1%的FeCl3，将溶液混合后在700 nm处测定吸光度。

3 结果

3.1 龙眼叶乙酸乙酯提取物对DPPH自由基的清除能力

3.1.1 不同浓度提取物对DPPH自由基的清除能力

图1考察了龙眼叶乙酸乙酯提取物在不同药液溶度下对DPPH自由基清除能力的影响。如图1所示，龙眼叶乙酸乙酯提取物药液溶度为0.2 mg/mL，所测得的DPPH自由基抑制率为13.66%，当药液浓度逐渐提高为1.8 mg/mL，其对DPPH自由基抑制率增加至1.92倍，表明龙眼叶乙酸乙酯提取物浓度在0.2～1.8 mg/mL范围内，对DPPH自由基清除率随药液浓度的提高而增大缓慢。当药液浓度加至为2.0 mg/mL，其对DPPH自由基抑制率分别增加至1.8 mg/mL的1.76倍、0.2 mg/mL的27.78倍，表明龙眼叶乙酸乙酯提取物浓度在1.8～2.0 mg/mL范围内，对DPPH自由基清除率迅速增大，其清除率最高可达46.14%。

图1 不同浓度龙眼叶乙酸乙酯提取物对DPPH自由基的 清除能力

3.1.2 不同时间提取物对DPPH自由基的清除能力

图2考察了同浓度龙眼叶乙酸乙酯提取物在不同提取时间下对DPPH自由基清除能力的影响。如图2所示，药液浓度为1.5 mg/mL的龙眼叶乙酸乙酯提取物，在10 min时，测得DPPH自由基清除率为19.67%；在20 min时，测得DPPH自由基清除率为23.01%，相对10 min的清除率增加至1.17倍；在30min时，测得DPPH自由基清除率为24.13%，相对20 min与10 min的清除率分别增加至1.05倍与1.22倍。表明同浓度的龙眼叶乙酸乙酯提取物，在提取时间10～30 min条件下，DPPH自由基清除率随提取时间的增长而增高缓慢。

图2 不同时间龙眼叶乙酸乙酯提取物对DPPH自由基的 清除能力(浓度=1.5 mg/mL)

3.2 龙眼叶乙酸乙酯提取物的还原能力

图3考察了龙眼叶乙酸乙酯提取物在不同药液溶度下对羟基自由基还原能力的影响。如图3所示，随着龙眼叶乙酸乙酯提取物药液溶度从0.2 mg/mL增加至1.0 mg/mL，吸光度处于迅速上升趋势；药液浓度从1.0 mg/mL增加至1.5 mg/mL时，吸光度增加缓慢；药液浓度达到2.0 mg/mL时，测得最大吸光度为0.19272，分别为1.0 mg/mL的13.34倍和0.2 mg/mL的3.23倍。吸光度越大，还原能力越强，表明吸光度随龙眼叶乙酸乙酯提取物药液浓度的增大而增大，其药液浓度与还原能力两者间具有一定量效关联，且对羟自由基具有较强的还原能力。

图3 龙眼叶乙酸乙酯提取物对羟基自由基的还原能力

4 结论

本实验以乙酸乙酯为溶剂，通过冷侵提取，旋转蒸发得到龙眼叶乙酸乙酯提取物，并采采用苯基苦味肼基自由基(DPPH)法与还原能力测定法评测其对自由基的清除能力。当药液浓度较低时，其对DPPH自由基具有一定的清除能力；随药液浓度逐渐增大，其对DPPH自由基也逐渐表现出更强的清除能力，并且与提取时间无关。在还原能力实验中，药液浓度与还原能力两者间具有一定量效关联，且对羟自由基具有较强的还原能力。实验结果表明，龙眼叶乙酸乙酯提取物不仅具有一定的抗氧化活性和优异的自由基清除能力，其还原能力与乙酸乙酯提取浓度还存在一定量效关联。