胆胃宁颗粒剂对大鼠实验性胃溃疡模型的影响Δ

吴 育，顾庆华，蔡亚云，石美琴，张海琦，王训香

(1.南通市中医院药剂科，江苏 南通 226000； 2.南通市中医院脾胃科，江苏 南通 226000； 3.南通大学药学院，江苏 南通 226000)

胆胃宁颗粒剂为南通市中医院院内制剂，其批准文号为苏药制字Z040021991，该方由院内脾胃科名老中医经长年临床实践优化改良形成的经验方加减而来，含有炒柴胡、炒黄芩、炒枳壳、川厚朴及法半夏等中药，具有和胃化湿、疏肝利胆及健脾助运等功效。该制剂在临床上主要用于治疗胆汁反流引起的溃疡。胃溃疡的发病机制较多，是由多种因素综合影响的结果，其中胃黏膜屏障的损害是最重要的机制之一。因为胆汁中的胆汁酸和胆盐能破坏胃黏液屏障，继而溶解胃黏膜的磷脂，增加胃黏膜的通透性造成H+反渗等作用，故胆汁反流与胃溃疡有密切关系。庄瑞斐等[1]探讨了胆胃宁颗粒剂治疗胆胃不和型胆汁反流性胃炎的临床疗效，结果显示，胆胃宁颗粒剂不仅能明显减轻患者的临床症状，减少胆汁反流，其作用机制可能与提高血浆胃动素(MTL)水平有关。樊锦河等[2]探讨了胆胃宁颗粒对湿热中阻型胃溃疡愈合质量的影响，指出胆胃宁颗粒能改善溃疡愈合质量，其原因可能与提高溃疡边缘黏膜表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)表达量有关。胆汁反流性胃溃疡是现代临床常见病之一，中药在脾胃病治疗中占据不可忽视的地位，中医学“金元四大家”之一的李杲提倡升阳益气、补脾健胃，后代视为“补土派”。治疗胆汁反流、反酸，采用疏肝和胃、理气健脾，以治少阳病为主，常使用柴胡、黄芩、厚朴、枳壳及半夏等中药。胆汁反流可导致胃黏膜甚至食道黏膜产生炎症病变，临床症状主要为胃脘痛、反酸、嘈杂、口苦和呕吐等，可归属于中医“胃脘痛”“呕吐”等范畴[3]。本研究探讨了胆胃宁颗粒剂对大鼠实验性胃溃疡模型的影响。

1 材料

1.1 实验动物

SD大鼠，体质量180～220 g，雌雄各半，合格证号：SCXK(苏)2013-2015，由南通大学动物实验中心提供。

1.2 仪器

酶标仪(北京普朗医疗)；pH测定仪(大连贝尔分析仪器)；82-1型离心机(北京分析仪器厂)；电热恒温水温箱(上海亚荣生化仪器厂)。

1.3 药品与试剂

胆胃宁颗粒剂(南通市中医院，院内制剂，批准文号：苏药制字Z04001991)；奥美拉唑镁肠溶片(阿斯利康制药有限公司，批准文号：国药准字J20130092)配成4 mg/ml水溶液；胃蛋白酶活性试剂盒由南京建成生物有限公司提供；甲醛、乙醇和冰乙酸均为分析纯。

2 方法

2.1 幽门结扎型胃溃疡大鼠模型的建立

SD大鼠40只，雌雄各半，将其随机分为5组，每组8只，分别为模型组(蒸馏水0.1 ml/kg)、阳性组(奥美拉唑水溶液18 mg/kg)[4]和胆胃宁颗粒剂低剂量组(胆胃宁颗粒剂用水溶后给药7.5 mg/kg)、中剂量组(胆胃宁颗粒剂15 mg/kg)及高剂量组(胆胃宁颗粒剂30 mg/kg)。每日上午固定时间段灌胃给药1次，共10 d，第8日给药后禁食不禁水48 h，第9、10日正常给药。末次给药后2 h结扎幽门(术中勿伤血管，勿牵扯幽门，勿钳夹胃壁)。术后禁食禁水18 h后将大鼠处死，结扎贲门，摘取胃并收集胃液，计胃液总体积，在3 000 r/min下离心10 min，离心后的上清液进行胃蛋白酶活性及胃酸测定，胃蛋白酶活性通过试剂盒测定，胃酸采用pH测定仪测定。采用1%甲醛溶液10 ml固定胃，30 min后沿胃大弯剖开，测量每只大鼠腺胃部所有溃疡的长径和短径，并计算溃疡面积(mm2)和溃疡抑制率；溃疡抑制率(%)=(模型组溃疡面积-治疗组溃疡面积)/模型组溃疡面积×100%[5]。

2.2 冰醋酸型胃溃疡大鼠模型的建立

取SD大鼠40只，雌雄各半，随机分为5组，分别为模型组(蒸馏水0.1 ml/kg)、阳性组(奥美拉唑水溶液18 mg/kg)和胆胃宁颗粒剂低剂量组(胆胃宁颗粒剂7.5 mg/kg)、中剂量组(胆胃宁颗粒剂15 mg/kg)及高剂量组(胆胃宁颗粒剂30 mg/kg)。将100%冰醋酸溶液0.01 ml注入大鼠腺胃部前壁浆膜下。造模第2日后开始每日上午固定时间段灌胃给药1次，共10 d。末次给药后2 h将大鼠处死，剖腹结扎贲门和幽门，采用1%甲醛溶液10 ml固定胃，30 min后沿胃大弯剖开，测量每只大鼠腺胃部所有溃疡的长径和短径，并计算溃疡面积(mm2)和溃疡抑制率。

3 结果

3.1 五组幽门结扎型胃溃疡大鼠溃疡面积及溃疡抑制率比较

与模型组比较，低、中及高剂量组幽门结扎型胃溃疡大鼠溃疡面积明显减少，差异有统计学意义(P<0.05)，并且随剂量增加呈明显的剂量依赖性，其中高剂量组与阳性组的作用相当，见表1。

表1 五组幽门结扎型胃溃疡大鼠溃疡面积及溃疡抑制率比较Tab 1 Comparison of area and inhibition rates of ulcer among five groups of rats with pyloric ligation gastric ulcer

注：与模型组比较，*P<0.05；“—”代表无溃疡发生

Note: compared with the model group,*P<0.05；“—”means no ulcer occurs

3.2 五组幽门结扎型胃溃疡大鼠胃液量、胃酸及胃蛋白酶活性比较

与模型组比较，低、中及高剂量组幽门结扎型胃溃疡大鼠胃酸和胃蛋白酶活性明显降低，差异均有统计学意义(P<0.05)，其中高剂量组与阳性组的作用相当，见表2。

表2 五组幽门结扎型胃溃疡大鼠胃液量、胃酸及胃蛋白酶活性比较Tab 2 Comparison of volume of gastric secretion, activities of gastric acid and pepsin among five groups of rats with pyloric ligation gastric ulcer

注：与模型组比较，*P<0.05

Note: compared with the model group,*P<0.05

3.3 五组醋酸型胃溃疡大鼠溃疡面积及抑制率比较

与模型组比较，低、中及高剂量组醋酸型胃溃疡大鼠溃疡面积明显减少，差异均有统计学意义(P<0.05)；其中,中剂量组与阳性组的差异有统计学意义(P<0.05)，效果优于阳性组，见表3。

表3 五组醋酸型胃溃疡大鼠溃疡面积及抑制率比较Tab 3 Comparison of area and inhibition rates of ulcer among five groups of rats with acetic acid gastric ulcer

注：与模型组比较，*P<0.05；“—”代表无溃疡发生

Note: compared with the model group,*P<0.05；“—”means no ulcer occurs

4 讨论

胃溃疡的发病机制较为复杂，当前认为该病的发生常与胃黏膜损伤因子及自身防御因子失衡有关，关于胃黏膜损伤机制的研究已取得了很大的进展。胃溃疡主要由感染(幽门螺杆菌)、胃酸与胃蛋白酶的侵袭及胃黏膜防御功能减弱等原因引起。皮质类固醇、非甾体抗炎药以及酗酒、吸烟等均会诱发胃溃疡的形成。本研究通过不同动物模型考察院内制剂胆胃宁颗粒剂治疗胃溃疡的效果，观察胃酸、胃蛋白酶活及溃疡面积等指标，直观反映出胆胃宁颗粒剂的治疗效果。胆胃宁颗粒剂高剂量的治疗效果与阳性药相当，能显著减少溃疡面积，提高溃疡抑制率，降低胃蛋白酶活性，减少胃内酸度，最终促进溃疡的愈合。

幽门结扎型胃溃疡是由于刺激幽门窦黏膜的压力感受器，引起迷走-迷走反射，导致高胃酸分泌，使致溃疡因素增加而形成[6-7]。本研究采用幽门结扎型胃溃疡大鼠模型，使其胆汁反流入胃，胆汁可以改变胃黏液的性质并破坏黏膜屏障，加剧H+的渗入，刺激肥大细胞释放组胺，扩张血管使得黏膜血流量和毛细血管渗透性增加，黏膜发生水肿、出血和炎症，甚至发生急性糜烂。结果显示，胆胃宁颗粒剂能显著降低大鼠胃液胃蛋白酶活性，使大鼠胃内游离酸、总酸度减少，最终使溃疡状态下胃蛋白酶活性不过度激活，对胃黏膜起到保护作用。胆胃宁颗粒剂对大鼠幽门结扎所致胃溃疡有抑制作用，呈量效关系，这说明其抗溃疡作用的实现与其抑制胃酸的分泌和胃蛋白酶的活性有关。醋酸型胃溃疡是以醋酸直接损伤胃壁组织，并引起局部血液循环障碍而形成的慢性溃疡模型，酷似人胃溃疡[8-9]。胆胃宁颗粒剂对醋酸型胃溃疡有显著的疗效，醋酸造成溃疡面明显，本研究结果可较好反映出胆胃宁颗粒剂的抗溃疡效果。周晓伟等[8]研究结果显示，大鼠溃疡与其p38炎症信号通路相关，与肿瘤坏死因子α和白细胞介素6等炎性因子有关，故胆胃宁颗粒剂很可能通过调节炎性因子而发挥胃黏膜保护作用，还可能抑制幽门螺杆菌感染，其确切机制还有待深入研究。

胃溃疡属于现代医学概念，根据其临床特点，可将其归属于中医学“胃脘痛”“痞证”和“肝胃气痛”等范畴。《黄帝内经》最早记载“胃脘痛”症状。陈育忠等[10]总结出脾胃亏虚是发病的根本因素，痰湿、疲血及寒热等为标，外感邪气、饮食不节及情绪不畅为主要病因。临床较常用补益药、理气药、清热药、止血药及活血化瘀药等治疗胃溃疡。胆胃宁颗粒剂含柴胡、白芍、白术、黄芩、郁金、厚朴、枳壳及半夏等中药，为大柴胡汤加减方[11]。柴胡疏肝利胆，能疏泄、散精，使胃肠积滞得除；白芍养血敛阴，柔肝止痛，二者常相须为用。郁金为“血分之气药”，黄芩苦寒，入胆经，两者相伍善于清泄少阳半表半里之热，二药佐柴胡又能清火解郁，疏利肝胆。枳壳理气宽中；半夏燥湿化痰，降逆止呕；厚朴下气除满；方中体现胆胃同治、健脾通降和清热化湿之治法，三药行气散结，开达中焦。白术健脾燥湿利水，扶土以抑木；佐以甘草补脾益气，调和诸药。如此，有攻有补，祛邪而不伤正，“通降”之法贯穿全方，清湿热，振脾阳，复胃气，肝随脾升，胆随胃降，则诸症自愈，体现了中医“腑病以调气为先”“六腑以通为补”和“腑以通降为用”的学术思想[12]。阳性药奥美拉唑为质子泵抑制剂，特异性地作用于胃壁细胞质子泵(H+-K+-ATP酶)所在部位，抑制H+-K+-ATP酶的活性，使壁细胞内的H+不能转运到胃腔中从而阻断胃酸分泌，使胃酸含量大为减少。但其不良反应常见：(1)胃肠道不良反应，包括口干、轻度恶心、呕吐和腹胀等；(2)肝肾功能异常也有发生，包括丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶和胆红素升高；(3)代谢/内分泌系统紊乱，长期应用奥美拉唑可导致维生素B12缺乏；(4)神经精神异常[13]。中医药以整体观念、辨证论治为主导，能有效调节相关攻击因子与防御因子之间的失衡，调整紊乱的消化功能，在预防溃疡复发、提高疗效等方面有着广阔的前景[14]。