不同水平三酰甘油对血红蛋白测定的影响及3种校正方法的研究*

欧财文，林馥嘉，周海涛，林海标，吴晓宾，郑智明，柯培锋

(广州中医药大学第二附属医院检验医学部，广东广州 510120)

血红蛋白(Hb)是全血细胞分析中的一项主要检测指标，与其相关参数平均红细胞血红蛋白(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)对疾病的诊断均有较大帮助,因此,准确检测以上指标显得十分重要。氰化高铁血红蛋测定法(HiCN)为是国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐的Hb检测的首选方法，其原理为将全血样本进行溶血处理后将Hb转化为衍生物，并通过特定波长下对其吸光度的测定来计算Hb水平[1],但是黄疸、溶血与脂血会导致血浆浑浊,严重干扰Hb及其相关指标的检测结果[2]。近年来,伴随着高脂饮食和脂肪乳作为临床常用的肠外营养输入，使脂血标本出现逐年增加的趋势[3-4]，而高脂血标本对血常规等检验结果的准确性有着不同程度的影响[5]。我国成年男女血清三酰甘油(TG) 异常的发生率分别高达13.8% 和8.6%[6]。因此,脂血标本对检验项目的干扰应引起足够的重视。已有研究报道采用血浆置换的方法可明显消除脂血对全血细胞分析仪结果测定的影响[7]。根据用于置换的材料种类，可分为生理盐水置换、仪器稀释液置换和健康人血浆置换。在临床工作中前两种方法较为常用，而健康人血浆置换受配型等条件的限制，一般只用于科研活动中。除此之外，也可根据临床工作中较常使用的校正公式对Hb水平进行估算校正。故此，本研究对3种常用的校正方法准确性进行评价,为日常校正方法的选择提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2017年4—5月广东省中医院体检中心的体检健康者80例，控制男女比例大致相等，年龄18～60岁，平均(30.5±6.9)岁。纳入标准：(1)所有体检健康者无器质性疾病；(2)所有受试对象同一时间抽血所得标本检测的各项生化与血常规指标均在正常参考范围之内，其中TG<1.70 mmol/L,Hb 120～170 g/L。排除标准：(1)经诊断为疾病者；(2)血液标本存在黄疸、溶血、脂血等情况者。

1.2仪器与试剂 深圳迈瑞公司生产的Mindary BC-6800全血细胞分析仪、Roche Modular PPI全自动生化分析仪、TD24-WS台式离心机，其中标本稀释液、清洗液及溶血剂等均是仪器厂家原装配套试剂，质控品及校准品由厂家提供。中长链脂肪乳注射液(C8～24)250 mL由广州百特侨光医疗用品有限公司提供，注射用生理盐水由江西润泽药业有限公司提供，Mindary BC-6800全血细胞分析仪所配套的M-68DS稀释液。

1.3方法

1.3.1人工脂血标本的配置与全血细胞计数(CBC)分析 测定的标本均用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝管，静脉采血2 mL，要求所有标本均无溶血、凝集等。混匀，进行全血细胞分析后，以转速800 r/min低速离心10 min[8]，使血液中红细胞(RBC)、白细胞(WBC)和血小板(PLT)与血浆分离，按表1配制不同TG水平的脂血标本，颠倒混匀8次以上，用相同方法进行CBC分析；分析后的标本以800 r/min再次离心10 min，在Roche Modular PPI全自动生化仪上对TG水平进行测定。所用的仪器在测试前进行室内质控监测，各项指标在控后进行标本测定，记录数据。

表1 不同TG人工脂血标本的配置

1.3.2不同Hb水平受TG的干扰程度的差别 将全血样本按Hb分为120～<130、130～<140、140～<150、150～<160、160～<170 g/L 5组，每组16例，按照《广东省中医院血液检测操作规程》的流程检测加脂前后每组标本的Hb、MCH和MCHC的结果，并对每组加脂前后的Hb、MCH 和MCHC 参数结果进行差异显著性分析，同时计算出差异百分率并进行比较。

1.3.3等量置换测定 将上述已测定TG水平的标本小心颠倒混匀8次以上，均分为两份，以800 r/min离心10 min后吸掉上层浑浊血浆部分，一管用等量生理盐水进行置换(生理盐水置换组)，另一管用等量仪器配套稀释液进行置换(稀释液置换组)，混匀后分别再次进行CBC分析，记录数据。

1.3.4估算公式校正 根据《广东省中医院血液检测操作规程》文件所列Hb估算公式进行校正。

Hb修正值=Hb修正前-(Hb脂血血浆-Hb脂血血浆×HCT修正前)，其中“Hb脂血血浆×HCT修正前”为RBC所占比例部分；MCH修正值=Hb修正值/RBC修正前；MCHC修正值=Hb修正值/HCT修正前，Hb脂血血浆由前一步骤收集所置换的浑浊血浆进行CBC计数得到，计算并记录结果。

2 结 果

2.1脂血水平对Hb及其相关参数测定的影响 正常血标本加入不同水平TG后，Hb、MCH和MCHC的测定值增高，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。干扰程度由差异百分率表示，差异百分率(%)=(脂血值或校正值-真实值)/真实值×100%。正常血标本随着加入TG水平增高，Hb、MCH和MCHC的结果差异百分率增高，Hb、MCH和MCHC结果随着TG水平增高受干扰程度越大，见表3。

表2 不同水平TG对Hb及其相关参数的影响

续表2 不同水平TG对Hb及其相关参数的影响

注：与加脂前比较，*P<0.05

表3 不同TG水平对Hb、MCH、MCHC的干扰程度的差异百分率(%)

2.2不同Hb水平受TG的干扰程度的差别 其中各组加脂前后Hb、MCH、MCHC参数比较差异均有统计学意义(P<0.05)，见表4。Hb受干扰的程度与Hb 水平呈负相关(r=-0.77，P<0.05)，MCH 受干扰的程度与Hb 水平呈负相关(r=-0.92，P<0.05)。Hb水平越高，受干扰的程度越小，其真实值与加脂后脂血的Hb、MCH的差异百分率，随着Hb水平增大而减小。MCHC受干扰的程度与Hb 水平呈正相关(r=0.70，P<0.5)，Hb水平越高，受影响的程度越大，见表5。

表4 不同Hb水平组的Hb及相关参数受TG的影响

注：与加脂前比较，*P<0.05

2.3各组不同校正方法Hb、MCH与MCHC参数比较 对加脂后Hb结果在140～<160 g/L的每个标本充分混匀后平均分成3份样本，1份通过生理盐水置换血浆方法检测其Hb、MCH和MCHC结果，另1份通过稀释液置换血浆的方法检测其Hb、MCH和MCHC结果，最后1份则通过公式估算法计算其Hb、MCH和MCHC结果。经统计分析，生理盐水置换组、稀释液置换组和公式估算组的Hb、MCH与MCHC参数测定结果均明显低于人工脂血组，差异均有统计学意义(P<0.05)。生理盐水置换组Hb、MCH与MCHC测定结果与直接测定组相比较，差异有统计学意义(P<0.05)；稀释液置换组与公式估算组除MCHC外，其余参数与直接测定组比较差异均无统计学意义(P>0.05)；生理盐水置换组、稀释液置换组和公式估算组之间Hb、MCH与MCHC的结果进行两两比较，除MCHC外，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表6。

表5 不同Hb水平组的Hb及相关参数受TG的干扰程度(%)

表6 3种校正方法Hb、MCH与MCHC参数比较

注：*与直接测定组相比，P<0.05

3 讨 论

本研究利用Mindary BC-6800全血细胞分析仪，以十二烷基磺酸钠比色法(SLS-Hb)对Hb进行测定。全血细胞分析仪对干扰物质的存在较为敏感,易产生系统误差，如血液中胆红素水平增高使测定的本底改变及脂血标本中的乳糜微粒(CM)和极低密度脂蛋白(VLDL)等产生的散射光均可影响Hb测量结果的准确性：在高脂蛋白血症患者标本中,CM和VLDL由大量的TG(CM中的TG占80%～90%，VLDL中的TG占50%～70%)与较少的载脂蛋白(CM中的载脂蛋白占1%，VLDL中的载脂蛋白占5%～7%)组成悬浮颗粒,它们在血浆中以混悬的状态存在，造成类似于牛奶中见到的雾状浑浊,能够产生较强的散射光，而SLS-Hb法采用光传导传输信号变化，故高脂血可使由Hb比色方法获得的Hb结果假性升高[9]。MCH和MCHC是基于Hb、HCT和RBC结果计算出的参数，Hb假性升高时MCH和MCHC也会随之假性升高。而作为贫血鉴别诊断指标的MCH和MCHC检测对缺铁性贫血、巨幼红细胞性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、溶血性贫血的诊断和鉴别诊断十分重要[10]。

本研究结果表明，当血液中TG>4.14 mmol/L时，加脂后的Hb、MCH和MCHC数值较加脂前升高，且受干扰的程度随着TG 水平的增高而增大，这与国内外报道一致[11-13],因此,对于脂血液标本的血常规检查,相关参数的校正十分必要。研究者发现3种校正方法均可对不同程度地消除TG对测量结果的影响，对结果进行校正。但与稀释液置换法和公式估算法相比，生理盐水置换法仅可在一定程度上消除TG对Hb及其参数测定地影响，无法对结果进行准确校正，与正常血标本之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。稀释液置换与公式估算法可对Hb及MCH两个参数进行较准确的校正，但无法对MCHC进行校正，从实验结果可以发现，MCHC经校正后，数值较正常标本测定结果高，差异具有统计学意义(P<0.05)，这与预料的不一致，可能因为MCHC是基于红细胞平均体积(MCV)、RBC、Hb的数值计算所得。在对脂浊血浆进行置换时虽然置换的体积相同，但生理盐水和仪器稀释液的渗透压、张力与样本中血浆有所差别，这样使得置换之后红细胞体积变小，即MCV数值减小，导致了MCHC的计算结果增高。

相对来说，仪器稀释液置换的校正效果优于生理盐水置换与公式矫正法，因为仪器稀释液中所添加的表面活性剂以及pH缓冲剂可使血细胞维持在正常的酸碱度与渗透压环境中，所以血液样本中的各细胞组分更加稳定，这一点在实验过程(溶血发生率)及数据分析得出的结论中也有所体现，而同样作为校正方法之一的公式估算法，则需要收集被置换的上层脂浊血浆进行CBC分析，虽降低了渗透压差异所造成的细胞体积改变甚至溶血的发生率，但步骤较为复杂，还应注意在吸取血浆时避免混入少量红细胞影响校正结果，因此，从操作的简便性来看，仪器稀释液置换的校正方法也比较可取。

值得一提的是，在探究不同Hb水平受TG影响程度的过程中，发现Hb受TG影响的程度与其自身的水平呈负相关(r=-0.77，P<0.05)，即Hb水平越低，受影响的程度越大。这使得在临床工作中对待贫血患者的标本需慎重处理，尤其是本身营养状况不佳同时有脂肪乳作为肠外营养输注情况的住院患者，其Hb水平可能在贫血诊断或分度数值附近，较低水平TG干扰就会造成Hb假性增高，特别是可能对危急值漏检，掩盖病情，延误医生的诊疗时机甚至造成医疗事故[14]。因此，建议在日常工作中如发现此次检测结果与历史结果有出入或与临床诊断与表现不符者，可对标本进行低速离心或自然沉降后观察上层血浆是否浑浊来判断是否需要进行置换处理，以得到较准确的检验结果。

4 结 论

根据本研究实验数据结果分析，当血液中TG>4.14 mmol/L时，Hb及其相关参数会假性增高，需要进行校正，且干扰随TG水平的增高而增强。通过生理盐水、仪器稀释液置换与公式估算可消除高脂血的干扰，并对受干扰结果进行校正。