刺梨原汁酒总糖的含量测定

杨春艳 叶玉华 邹兰

刺梨原汁酒是贵州得天独厚的野生刺梨资源优势，选用优质刺梨鲜果经过原料→破碎（压榨）→发酵→分离→贮存（澄清处理）→原汁酒。刺梨具有丰富的营养成分，是药食同源的品种之一，由其开发而得的刺梨原汁酒基本保持了原有的营养价值，而总糖含量决定了发酵程度的好坏和成品酒的品质，建立刺梨原汁酒总糖的测定方法为评价酒的品质和改进工艺關健点提供了一定的实验依据。

仪器和试剂

TU-1901紫外分光光度计（北京普析）；赛多利斯AUY220电子天平（万分之一）；CPA2250电子天平（十万分之一）；TAISITE数显电热恒温水浴锅；KQ- 300VDE型双频数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

刺梨原汁酒6批；D-无水葡萄糖对照品（中国食品药品检定研究院 批号：110833-201205），其它试剂均为分析纯；实验室用水为二级纯化水。

方法

刺梨原汁酒总糖的提取。精密吸取刺梨原汁酒0.5ml至250ml容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，即得。

最大吸收波长的确定。精密称取18.80mg的D-无水葡萄糖对照品溶液置于100ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，再精密吸取20ml至100ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密吸取1.0ml对照溶液按照蒽酮-硫酸试剂显色方法显色，将葡萄糖标准溶液于500～750nm范围扫描，确定在625nm处有最大吸收。

标准曲线的制备。精密称取D-无水葡萄糖18.80mg，置100 mL量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀 ，再精密吸取10ml，置50ml量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀，制得0.0376mg/ml的D-无水葡萄糖标准贮备液。精密量取葡萄糖对照品溶液0.2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml，于25 mL比色管中，加水定容至10ml。精密加入蒽酮-硫酸溶液（精密取蒽酮0.21g，加浓硫酸溶液100ml使溶解，摇匀）5ml，摇匀，置水浴中加热15分钟，取出，放入冰浴中冷却至室温，测定得到回归方程。

结果

最大吸收波长。葡萄糖标准溶液经蒽酮-硫酸显色后用TU- 1901型紫外可见分光光度计在500～750nm范围扫描。扫描结果表明：葡萄糖标准溶液均在625nm处有最大吸收，确定该波长为测定波长。

标准曲线的绘制。以D-无水葡萄糖溶液浓度为横坐标，吸收度为纵坐标绘制标准曲，并得出回归方程y=5.773x+0.008，R2=0.997，线性范围为0.00752- 0.0376mg/ml，其中，y为吸收度，x为D-无水葡萄糖浓度。

精密度实验。精密吸取样品试液1份，按2.1的方法制得供试品溶液，各1.0ml置25ml比色管中，按蒽酮-硫酸法制备，测试6次，相对标准偏差RSD=0.61%，结果表明精密度良好。结果见表1。

稳定性实验。精密吸取样品溶液0.5mL，按蒽酮-硫酸法制备，每隔20min 测定一次吸收度，连续2h 考察其稳定性，计算RSD值=0.32 %，实验结果表明，供试品溶液在2h 内稳定。结果见表2。

重复性实验。精密称取同一批样品6 份，按2.1的方法制得供试品溶液，精密吸取0.5ml，置10ml比色管中，按蒽酮-硫酸法制备，分别测定其吸收度，计算RSD 值（ n = 6） 为0. 97%，表明该方法重复性好。结果见表3。

加样回收实验。取同一份样品6份，每份精密量取1.0ml，分别加入3ml浓度为0.0376mg/ml的葡萄糖标准品，按照蒽酮-硫酸法处理后测定吸收值，计算回收率平均值为97.4%，本方法准确度良好。结果见表4。

总糖测定。精确称取6批刺梨原汁酒样品，各0.5ml，按照2.1的方法制备总糖，精密吸取样品溶液1.0ml置25ml比色管中，按蒽酮-硫酸法制备，分别测定其吸收度，根据回归方程，计算样品总糖含量，结果如下表：

讨论

蒽酮-硫酸法测定总糖含量， 是利用总糖在浓硫酸作用下水解生成单糖， 并迅速脱水生成羟甲基糠醛， 羟甲基糠醛与蒽酮综合成蓝色化合物， 比色该化合物颜色的深浅来计算总糖浓度的高低。该方法具有稳定、快速、简便、重复性好等特点，可作为刺梨原汁酒总糖的测定方法。

基金项目：贵州省黔西南州科技项目，课题任务书编号：2016- 1- 22。