酸枣仁-五味子提取物对小鼠的镇静催眠作用研究＊

巨帅，张英英，潘婷婷

酸枣仁-五味子提取物对小鼠的镇静催眠作用研究＊

巨帅，张英英，潘婷婷

（商洛学院 生物医药与食品工程学院，陕西 商洛 726000）

以酸枣仁、五味子为主要原料制备了醇水提取物，并通过药理实验对其镇静催眠效果进行评价。结果表明，与阴性对照组相比，低、中、高剂量酸枣仁-五味子提取物均能有效缩短巴比妥钠造成的睡眠潜伏期，显著延长了阈上剂量戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间，显著提高了戊巴比妥钠阈下剂量诱导小鼠睡眠发生率，具有明显的镇静催眠效果。

酸枣仁；五味子；镇静催眠；藤本植物

酸枣仁为鼠李科植物酸枣Ziziphus jujuba Mill.var.spinosa（Bge）Hu ex H. F. Chou的干燥成熟种子[1]。现代研究表明，酸枣仁有镇静催眠、抗抑郁、抗惊厥、抗焦虑、增强免疫力、改善记忆力、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、保护视网膜细胞、降血脂、抗动脉粥样硬化等作用，并对心肌及脑缺氧、缺血有保护作用，酸枣仁中皂苷类、黄酮类、生物碱类、酚酸类、挥发油类等均为镇静催眠的主要活性成分[2-5]。五味子为木兰科多年生落叶木质藤本植物五味子Schisandra Chinese（Turcz.）Baill.的成熟果实[6]。

现代药理研究表明，五味子具有抗氧化、免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、保肝、保护神经、体外抑菌与杀虫、抗衰老与抗疲劳、降血糖与降血脂、抑制肌肉萎缩与增强骨骼肌、镇静催眠、抗焦虑、改善记忆障碍、镇咳等作用，且五味子中的五味子醇甲、五味子酯甲和五味子乙素等均为镇静催眠的主要活性成分[7-13]。酸枣仁、五味子均有较好的镇静催眠作用，本研究旨在对酸枣仁-五味子药提取物对昆明鼠镇静催眠效果进行评价。

1 材料与方法

1.1 实验药物

实验药物为酸枣仁、五味子，产地为陕西商洛，购自商洛市国药控股有限责任公司。

1.2 实验动物

实验动物为昆明鼠，体重20～22 g，购自空军军医大学实验动物中心。

1.3 实验试剂

实验试剂有戊巴比妥钠，分析纯，国药控股化学试剂有限公司；阿普唑仑，金花企业（集团）股份有限公司；生理盐水，上海优选生物科技有限公司；乙醇，利安隆博华（天津）医药化学有限公司。

1.4 仪器

仪器主要有KQ-250E多功能粉碎机，铂欧五金厂；DHG-9030A（101）电热恒温鼓风干燥箱，上海齐欣科学仪器有限公司；S1-2002电子天平，丹佛仪器（北京）有限公司；RE52-99旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；SHZ-Ⅲ循环水式多用真空泵，上海亚荣生化仪器厂；100目分级筛，新乡市同心机械有限责任公司；KQ-250E超声波清洗机，昆山市超声仪器有限公司。

1.5 实验方法

1.5.1 酸枣仁-五味子醇水提取物的制备

取2个1 000 mL的圆底烧瓶，依次放入30 g的酸枣仁和五味子；加入质量分数为75%的乙醇浸泡30 min，于85 ℃下回流提取1 h，将煎液过滤保存；再加10倍量水回流提取1 h，将煎液过滤保存；将醇提取液和水提取液混合在一起，减压浓缩，干燥箱里面烘干成浸膏，密封保存[14]。

1.5.2 酸枣仁-五味子提取物镇静催眠作用评价

1.5.2.1 戊巴比妥钠阈下及阈上睡眠剂量的测定[15-17]

50只小鼠随机分为5组，每组10只。实验组腹腔注射戊巴比妥钠，注射剂量的质量浓度分别为30 mg/kg、34 mg/kg、38 mg/kg、40 mg/kg，阴性对照组注射等量生理盐水。15 min后，小鼠的翻正反射消失1 min以上，以确定小鼠的静息指数，并记录进入睡眠的小鼠数量。在小鼠将要睡着但是没有睡着时（90%～100%），翻正反射不消失的戊巴比妥钠的最大剂量的药物剂量即为阈下剂量。

50只小鼠随机分为5组，每组10只。实验组腹腔注射戊巴比妥钠，注射剂量的质量浓度分别为42 mg/kg、45 mg/kg、49 mg/kg、50 mg/kg，阴性对照组注射生理盐水。记录15 min内翻正反射消失超过1 min的小鼠数量，作为睡眠指标，刚进入睡眠的小鼠的最小剂量（睡眠率100%）为阈上剂量。

1.5.2.2 酸枣仁-五味子提取物对阈下睡眠剂量戊巴比妥钠致入睡小鼠数量的影响

50只昆明小鼠被分为5组，每组10只，分组如下：阿普唑仑阳性对照组（0.25 mg/kg）、低剂量组（0.40 g/kg）、中剂量组（0.80 g/kg）、高剂量组（1.60 g/kg）、阴性对照组。实验组按低、中、高剂量进行灌胃给药，阳性对照组腹腔注射阿普唑仑溶液，阴性对照组注射相同剂量的生理盐水，给药1 h后，腹腔注射阈下剂量戊巴比妥钠。观察并记录注射戊巴比妥钠后30 min内各组小鼠睡眠情况。

1.5.2.3 酸枣仁-五味子提取物对阈上催眠剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响

50只昆明小鼠被分为5组，每组10只，分组如下：阿普唑仑阳性对照组（0.25 mg/kg）、低剂量组（0.40 g/kg）、中剂量组（0.80 g/kg）、高剂量组（1.60 g/kg）、阴性对照组。实验组按低、中、高剂量进行灌胃给药，阳性对照组腹腔注射阿普唑仑溶液，阴性对照组注射相同剂量的生理盐水，给药1 h后，腹腔注射阈上剂量戊巴比妥钠，对注射戊巴比妥钠后各实验组小鼠睡眠时间进行记录。

1.5.2.4 统计分析

2 结果

2.1 戊巴比妥钠阈下及阈上睡眠剂量的测定

不同浓度戊巴比妥钠对小鼠的镇静催眠作用具体如表1所示。

表1 不同浓度戊巴比妥钠对小鼠的镇静催眠作用

组别剂量/（mg/kg）入睡动物/只入睡率/（%） 阴性对照组—00 戊巴比妥钠3000 3400 38110 40220 42550 45990 4910100 5010100

由表1可知，戊巴比妥钠的质量浓度为30 mg/kg、34 mg/kg时小鼠入睡率为0%，质量浓度为38 mg/kg时小鼠入睡率为10%，质量浓度为40 mg/kg、42 mg/kg、45 mg/kg时小鼠入睡率分别为20%，50%，90%，质量浓度为49 mg/kg和50 mg/kg时小鼠入睡率100%。因此，戊巴比妥钠阈下睡眠剂量的质量浓度确定为38 mg/kg，阈上睡眠剂量确定为49 mg/kg。

2.2 酸枣仁-五味子提取物对阈上催眠剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响

酸枣仁与五味子提取物对延长阈上剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响如表2所示。

表2 酸枣仁与五味子提取物对延长阈上剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响（n=10，±s）

注：与阴性对照组比，*为＜0.05，**为＜0.01，***为＜0.001。

由表2可知，与阴性对照组比较，阿普唑仑组明显延长了小鼠睡眠时间，且酸枣仁五味子提取物的低、中、高剂量组均能显著延长阈上剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间。

2.3 酸枣仁-五味子提取物对阈下睡眠剂量戊巴比妥钠致入睡小鼠数量的影响

酸枣仁-五味子提取物对阈下睡眠剂量戊巴比妥钠致入睡小鼠数量的影响如表3所示。

表3 酸枣仁-五味子提取物对阈下睡眠剂量戊巴比妥钠致入睡小鼠数量的影响

组别n入睡动物数/只入睡率/（%） 阴性对照组10110 阿普唑仑组1010100 低剂量组（0.40 g/kg）10220 中剂量组（0.80 g/kg）10550 高剂量组（1.60 g/kg）10880

由表3可知，与阴性对照组相比，各实验组小鼠入睡率均有所增加。其中阿普唑仑组催眠效果最为明显，入睡率最大，为100%；酸枣仁-五味子低、中、高剂量组，入睡率随剂量的增加而增加，高剂量组入睡率为80%。说明在戊巴比妥钠阈下剂量下，酸枣仁与五味子提取物对于小鼠睡眠发生率具有较好的诱导作用。

2.4 酸枣仁-五味子提取物对巴比妥钠诱导小鼠睡眠潜伏期的影响

酸枣仁-五味子提取物对巴比妥钠诱导小鼠睡眠潜伏期的影响如表4所示。

表4 酸枣仁-五味子提取物对巴比妥钠诱导小鼠睡眠潜伏期的影响（n=10，±s）

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注：与阴性对照组比，*为＜0.05，**为＜0.01，***为＜0.001。

由表4可知，与阴性对照组相比，阿普唑仑组与酸枣仁五味子提取物的低、中、高剂量组均能有效缩短小鼠巴比妥钠睡眠潜伏期，使小鼠更快地进入睡眠状态。

3 结论

本研究结果表明，与阴性对照组相比，酸枣仁-五味子提取物能够有效缩短巴比妥钠诱导小鼠睡眠的潜伏期，增加阈下睡眠剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡的数量，延长阈上催眠剂量戊巴比妥钠诱导小鼠的睡眠时间，具有明显的镇静催眠作用。

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R285.5

A

10.15913/j.cnki.kjycx.2019.16.020

2095－6835（2019）16－0049－03

潘婷婷（1988—），女，山西临汾人，硕士，讲师，研究方向为中药资源开发。

国家级大学生创新创业训练计划项目（编号：201711396015）

〔编辑：张思楠〕