大叶鳞毛蕨的生药学研究

1.昆药集团股份有限公司药物研究院，云南 昆明 650100；2.大理市凤仪卫生院，云南 大理 671005

贯众为常用中药，现代药理研究表明具有抗病毒、抗细菌、抗肿瘤及止血等作用，由于大叶鳞毛蕨形态特征、药材的功效主治及应用与贯众相似，同时全国各地又普存同名异物、地区性习惯用药、人为掺假等现象，使其在云南民间常作贯众的习用品入药[1]。大叶鳞毛蕨具有清热解毒、散瘀止血之功效，用于治斑疹毒、痢疾，金疮、红崩、带下、产后出血、衄血等[2]。经查阅文献资料，目前对本品的研究仅见有染色体数目的报道研究[3]，而对其进行生药学研究尚未见报道，对大叶鳞毛蕨进行生药学研究，为其鉴别、质量标准制定及深入研究和开发利用提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Nikon E100型生物显微镜、Nikon Eclipse 80i型高级研究用正置(明场微分干涉系统)生物数码摄影显微镜、DXM1200超高品质显微摄影数码相机、Nikon D-3000数码单反相机、Adobe Photoshop8.0简体中文版图形处理软件、电热恒温水浴锅DK-98-Ⅱ、NOVA NANOSEM 450 型扫描电镜。

1.2 材料 水合氯醛试液、稀甘油试液、蒸馏水、(浓)盐酸(A.R)(成都市欣海兴化工试剂厂)、乙醇(A.R)(天津市风航化学试剂科技有限公司)、甲醇(A.R)(重庆川江化学试剂厂)、正丁醇(天津市博迪化工有限公司)、固绿、番红、中性树胶、固体石蜡。

实验材料采自大理市漾濞县，原植物经云南大学陆树刚教授鉴定为鳞毛蕨科植物大叶鳞毛蕨Dryopterismarginata(C. B. Clarke) Christ.

2 方法

2.1 性状鉴别 通过眼看、鼻闻和口尝的方法，如眼看药材形状、大小、外表、断面、颜色、质地。鼻闻和口尝药材气味。

2.2 显微鉴别

2.2.1 根茎和叶柄 将采集的新鲜根茎和叶柄分开固定于FAA固定液中，用常规石蜡切片法即脱水、浸蜡、包埋、切片、脱蜡、染色、封片。(切片厚度8～12 μm，用不同浓度的二甲苯和二甲苯与无水酒精不同比例的混溶液脱蜡，番红和固绿染色，加拿大树胶封片)；鳞片及叶上下表皮用显微镜下观察其组织构造、细胞特征及内含物特征，拍摄其显微照片，图片、数据处理分析。

2.2.2 鳞叶 取干净的载玻片，中间滴一点清水，再将清理干净的鳞片用镊子放在水滴上，然后进行展平，之后压上盖玻片，制成临时装片(视鳞片的大小选择一张装片放几个鳞片，通常3～5个鳞片)，体式显微镜下观察，并用Nikon E100型生物显微镜拍照观察，每个物种观察同一部位3～5个鳞片。

2.2.3 叶上下表皮 取骨碎补类植物已固定的叶片中段，在水中反复冲洗后用开水浸泡，于Jeffery溶液中浸泡2～24 h，具体时间因材料而异，需要在浸泡过程中进行观察，直至上下表皮能轻易分开为止。将材料放在清水中漂洗干净，取干净的载玻片于中央滴一滴清水，然后将分离后的叶表皮用解剖针挑起置于水滴中，吸走多余水分，表皮自动展平后盖上盖玻片。在Nikon Eelipse 80i生物数码显微镜下观察，拍照。

2.2.4 孢子 从野外采集的药用骨碎补类植物，选择有成熟孢子的标本，用解剖针刺破孢子囊获取孢子，获取一定数目(不少于50粒)的孢子，在光学显微镜下进一步检查孢子的颜色、成熟情况等，选取成熟度好、颜色均匀、发育良好的孢子，均匀地撒在事先贴好双面胶的样品台上。取样过程中严格避免不同种间孢子的污染。每一个样品采集完孢子后，完成所取材料的标本相关信息的记录。将取好的孢子材料固定在样品台上，经喷金后置于NOVA NANOSEM 450型扫描电镜下观察。镀金时长为30 s。镀金结束后取出样品台，置于NOVA NANOSEM 450扫描电子显微镜下进行观察。观察过程中选择发育良好、具有代表性的孢子对其裂缝情况、近极面和远极面的纹饰情况进行拍照，同时每个样品选取不少于20个孢子来测量其极轴长和赤道轴长。

3 结果

3.1 性状鉴别 干燥根茎呈长圆柱形或棱柱状，多弯曲，上端稍大。长10～25 cm，直径5～8 cm。表面密被深棕色的鳞片，脱去鳞片之表面呈黄绿色。具叶柄残基及须根，表面呈瘤状分歧。质硬，不易折断，断面多为黄褐色，可见多数黄白色小点(分体中柱)，排成不规则环状。气微弱而特异，味微涩。(如图1)

3.2 显微鉴别

3.2.1 根茎横切面 不规则形。鳞片基着生于表皮层深凹陷处，由3～5列细胞构成，细胞长方形或多角形。外层为数列厚壁细胞，棕褐色。基本薄壁组织细胞类圆形或不规则形，壁略波状弯曲。内皮层外侧一列细胞的内壁增厚为7～10 μm，可见孔沟。内皮层为一列长方形细胞，可见凯氏点。周韧型维管束(分体中柱)21～28个，类圆形或长椭圆形，直径125～586 μm，不规则排列，在分体中柱外侧有较多的叶迹维管束。木质部由多角形管胞及非木化纤维状细胞构成，管胞直径25～83.4 μm。见图2、图3和图4。

3.2.2 叶柄横切面 类椭圆形，直径约为6.5 mm，中部一处深陷明显。表皮细胞类圆形，长方形，排列较平整，外被角质层。下皮为5～14列多角形厚壁细胞。基本薄壁组织细胞类圆形或多角形。类圆形周韧维管束(分体中柱)4～6个，直径120～540 μm，呈“U”字型排列，近深陷明显腹面两个较大。每一维管束内皮层外侧一列细胞内壁稍增厚。内皮层细胞为一列扁小的细胞，可见凯氏点。木质部由管胞和非木化纤维构成。见图5。

3.2.3 鳞片 长圆形，先端渐尖，长2.3～3.6 cm，基部宽8～12 mm。深棕色，边缘全缘。鳞片细胞类长方形，长85～220 μm，宽40～65 μm，壁略弯曲或平直。见图6、图7、图8。

3.2.4 叶上下表皮 上下表皮细胞大小不均，形状不规则，细胞垂周壁呈深波状。气孔分布于下表皮，气孔器以长轴方向平行均匀分布，主脉处的气孔长轴方向与叶脉处走向相同，气孔器是由2个大小相等的副卫细胞包围2个肾形的保卫细胞组成，保卫细胞与副卫细胞长轴方向一致，属于平列型气孔器。见图9、图10。

3.2.5 孢子囊及孢子 孢子囊呈椭球形，靠近孢子囊柄的一端较小，另一端较大；环带隆起，类型为垂直环带或纵行环带，环带与孢子囊相连。孢子呈类椭圆形，大小为26.03 μm×34.03 μm。孢子表面瘤状、鸡冠状突起，具球形或近球形较大的突起，均匀分布在孢子表面或相连在一起。

4 讨论

通过来源鉴别、性状鉴别、显微鉴别方法研究大叶鳞毛蕨的生药学特征，结果显示有显著的性状及显微鉴别特征：药材具叶柄残基及须根，表面呈瘤状分歧；根茎横切周韧型维管束(分体中柱)21～28个，类圆形或长椭圆形，不规则排列，在分体中柱外侧有较多的叶迹维管束；叶柄横切周韧维管束(分体中柱)5个，呈“U”字型排列；鳞片长圆形，先端渐尖，深棕色，边缘全缘；叶下表皮的气孔器是由2个大小相等的副卫细胞包围2个肾形的保卫细胞组成；孢子囊环带类型为垂直环带或纵行环带，孢子类椭圆形，孢子表面瘤状、鸡冠状突起，具球形或近球形较大的突起。大叶鳞毛蕨的药材形状和显微形态特征，可作为该药材真伪鉴别及质量标准制订的理论依据。

为确定大叶鳞毛蕨根茎和叶柄的分体中柱数量，分别对不同植株，不同粗细根茎及叶柄制作了徒手切片，对照观察并统计得出：根茎分体中柱为21～28个。叶柄分体中柱为4～6个，且靠近根茎端较多。大叶鳞毛蕨根茎和叶柄的分体中柱个数、形状和排列方式是鉴别的重要形态特征之一。