ALDH1和Musashi-1在子宫内膜癌中的表达及相关性研究

黄霁 舒宽勇 邓秀娟 官定金

[摘要] 探討ALDH1和Musashi-1在子宫内膜癌中的表达情况和相互关系及评估预后价值。 方法 运用免疫组织化学法检测116例子宫内膜癌组织中ALDH1和Musashi-1的表达，分析ALDH1和Musashi-1的表达与子宫内膜癌临床病理参数的关系及两者之间的相关性，并评估两者在子宫内膜癌预后中的价值。 结果 （1）116例子宫内膜癌组织标本中ALDH1表达63例（54.31%），其中低表达33例（28.45%），中高表达30例（25.86%）;（2）116例子宫内膜癌组织标本中Musashi-1表达83例（71.55%），其中低表达40例（34.48%），中高表达43例（45.69%）;（3）ALDH1的表达在子宫内膜癌不同FIGO分级、组织学分级、肌层浸润程度、淋巴结转移状态和脉管浸润中差异显著（P<0.05）;Musashi-1的表达在子宫内膜癌不同FIGO分级、组织学分级、肌层浸润程度、淋巴结转移状态和脉管浸润中差异亦显著（P<0.05）;（4）等级相关分析显示ALDH1和Musashi-1在子宫内膜癌中的表达显著正相关（r=0.262，P=0.004）;（5）Kaplan-Meier生存曲线显示：ALDH1和Musashi-1中高表达组患者生存率显著低于无表达组和低表达组。 结论 ALDH1和Musashi-1在子宫内膜癌中呈高表达，两者呈正相关性，并与子宫内膜癌患者的预后呈负相关。ALDH1和Musashi-1高表达与子宫内膜癌的生长浸润行为相关，可能与患者预后密切相关。通过检测的ALDH1和Musashi-1表达有助于子宫内膜癌的早期发现及预后评估，为今后临床肿瘤的靶向治疗提供新思路。

[关键词] 子宫内膜癌;ALDH1;Musashi-1;免疫组化

[中图分类号] R737.33          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2019）16-0004-05

[Abstract] Objective To investigate the expression and correlation between ALDH1 and Musashi-1 in endometrial carcinoma and to evaluate the prognostic value. Methods Immunohistochemistry was used to detect the expression of ALDH1 and Musashi-1 in 116 cases of endometrial carcinoma. The relationship between the expression of ALDH1 and Musashi-1 and the clinicopathological parameters of endometrial carcinoma and the correlation between them were analyzed. The value of both in the prognosis of endometrial carcinoma was evaluated. Results （1）There were 63 cases（54.31%）of ALDH1 expression in 116 tissue specimens of endometrial carcinoma， with 30 cases（28.45%） of low expression， and 33 cases（25.86%） of moderate and high expression; （2）There were 83 cases（71.55%）of the expression of Musashi-1 in 116 tissue specimens of endometrial carcinoma， with 40 cases（34.48%） of low expression， and 43 cases（45.69%） of moderate and high expression;（3）The expression of ALDH1 was significantly different in different FIGO grades， histological grades， degrees of myometrial invasion， lymph node metastasis and vascular invasion of endometrial carcinoma（P<0.05）; the expression of Musashi-1 was also significantly different in different FIGO grades， histological grades， myometrial invasion， lymph node metastasis and vascular invasion in endometrial carcinoma（P<0.05）; （4）According to the grade correlation analysis， there was a significant positive correlation between ALDH1 and Musashi-1 expression in endometrial carcinoma（r=0.262， P=0.004）;（5）According to the Kaplan-Meier survival curve， the survival rate of patients in the group of moderate and high expression of ALDH1 and Musashi-1 was significantly lower than that in non-expression group and low expression group. Conclusion ALDH1 and Musashi-1 are highly expressed in endometrial carcinoma. The two were positively correlated between each other， but were negatively correlated with the prognosis of patients with endometrial carcinoma. High expression of ALDH1 and Musashi-1 is associated with the growth and invasive behavior of endometrial carcinoma， and may be closely related to the prognosis of patients. The detection of ALDH1 and Musashi-1 expression contributes to the early detection and prognosis evaluation of endometrial carcinoma， so as to provide new ideas for targeted clinical therapy of tumors in the future.

[Key words] Endometrial carcinoma;ALDH1;Musashi-1;Immunohistochemistry

子宫内膜癌是发生于子宫内膜的一组上皮性肿瘤，为女性生殖道三大恶性肿瘤之一，占女性全身恶性肿瘤的7%，占女性生殖道恶性肿瘤的20%～30%。平均发病年龄60岁，约75%发生于50岁以上妇女[1]。随着我国人口老龄化，子宫内膜癌的发病率呈现上升的趋势，且发病年龄日趋年轻化。在一些发达国家是发病率居首位的妇科恶性肿瘤，在我国其发病率仅次于宫颈癌。如果在早期诊断规范治疗后，5年的生存率高达80%。然而因早期症状不明显或不典型，很多患者就诊时已错过最佳治疗时机，5年生存率明显下降[2-3]。本研究通过检测ALDH1和Musashi-1在子宫内膜癌中的表达情况，分析其之间的相关性，探讨两者在子宫内膜癌发生、发展及预后方面的意义。

1 材料与方法

1.1 材料来源

收集子宫内膜癌病例及蜡块，整理临床病理参数及随访资料。入选标准：本院2010年1月～2015年12月手术切除并经病理证实的116例子宫内膜癌及癌旁正常子宫内膜组织的存档腊块，制作成组织芯片。子宫内膜癌患者平均年龄（54.00±8.62）岁，术前均未进行放射治疗、化学治疗及性激素类药物治疗。正常子宫内膜来自相应患者的癌旁组织。根据FIGO标准，Ⅰ期患者98例、Ⅱ期8例、Ⅲ～Ⅳ期10例;根据组织学分级，G1（高分化）23例、G2（中分化）73例、G3（低分化）20例。所选子宫内膜癌患者中，脉管浸润37例，淋巴结转移9例。由2名病理科医师对所选的病理切片再次复核。

1.2 主要试剂

兔抗人ALDH1单克隆抗体和兔抗人Musashi-1单克隆抗体购自英国abcam公司;染色试剂盒及DAB显色试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 方法

采用MaxVisionTM/HRP两步法免疫组织化学染色检测子宫内膜癌及癌旁组织中ALDH1和Musashi-1蛋白的表达情况。主要步骤：所选蜡块标本连续切片3 μm，HE染色。穿刺针钻取靶点组织，制作组织芯片，60℃烤箱烘片4 h，然后二甲苯脱蜡至梯度酒精至水化;采用柠檬酸盐缓冲抗原修复液煮沸3 min后进行抗原修复，DAB 溶液显色5 min后，用苏木精进行复染，最后封片。

1.4 染色结果判读及评分

使用顯微摄像计算机图像分析系统在每个视野计数100个子宫内膜癌细胞中的阳性细胞，换算成百分比计数并取平均值。阳性细胞数：<10%为0分; 10%～30%为1分;31%～50%为2分;>50%为3分。染色强度：0分：无染色;1 分：淡黄色;2分：黄色;3分：棕黄色。两者的乘积即为表达强度：0分：阴性;1～3分：弱阳性为低表达;4～6分：阳性为中等表达;7～9分：强阳性为高表达。

1.5 统计学方法

应用SPSS 19.0软件进行统计分析。ALDH1和Musashi-1在子宫内膜癌中的表达及其与临床病理参数间的关系采用χ2检验及χ2趋势检验;ALDH1和Musashi-1表达之间的相关性采用Spearman相关性分析。生存曲线用Kaplan-Meier法;P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ALDH1和Musashi-1在子宫内膜癌组织中的表达情况

ALDH1：低表达33例（33/116，28.45%），中等表达16例（16/116，25.86%），高表达14例（14/116，9.48%），总阳性表达率为54.31%（63/116）（封三图1：A、B、C）。Musashi-1：低表达40例（40/116，34.48%），中等表达24例（24/116，20.69%），高表达19例（19/116，16.38%），总阳性表达率为71.55%（83/116）（封三图2：D、E、F）。

2.2 ALDH1和Musashi-1的表达与子宫内膜癌患者各临床病理参数间的关系

ALDH1和Musashi-1在子宫内膜癌患者不同妊娠史、年龄的表达差异均无统计学意义（P>0.05）。ALDH1在子宫内膜癌不同FIGO分期（χ2=5.418，P=0.020）、组织学分级（χ2=9.291，P=0.002）、肌层浸润深度（χ2=5.54，P=0.019）、淋巴结转移状态（χ2=4.70，P=0.03）和脉管浸润状态（χ2=15.69，P=0.0001）的表达，差异均有统计学意义（P<0.05）。Musashi-1在子宫内膜癌不同FIGO分期（χ2=5.73，P=0.017）、组织学分级（χ2=11.682，P=0.001）、肌层浸润深度（χ2=7.65，P=0.006）、淋巴结转移状态（χ2=3.88，P=0.049）和脉管浸润状态（χ2=3.99，P=0.046）的表达，差异也均有统计学意义（P<0.05）。见表1、2。

2.3 ALDH1和Musashi-1在子宫内膜癌组织中表达的相关性

在116例子宫内膜组织中，ALDH1与Musashi-1阳性者47例，二者同时阴性者17例，ALDH1阳性同时Musashi-1阴性者16例，ALDH1阴性同时Musashi-1阳性者36例，Spearman 等级相关分析显示：ALDH1和Musashi-1在子宫内膜癌组织中表达呈正相关（r=0.262，P=0.004）。见表3。

2.4 ALDH1和Musashi-1在子宫内膜癌组织中的表达与子宫内膜癌患者生存时间之间的关系

116例子宫内膜癌病例共随访40～108个月，死亡17例，平均生存时间57.42个月。分别将ALDH1和Musashi-1表达分为（阴性组和低表达组）、（中表达和高表达组），制作出Kaplan-Meier生存曲线，结果显示：ALDH1阴性组和低表达组平均生存时间62.23个月（随访期间内），中表达和高表达组46.50个月（随访期间内），ALDH1中表达和高表达患者的生存时间较阴性组和低表达组患者显著减少（P=0.000，封三图3）;Musashi-1阴性组和低表达组平均生存时间67.52 个月，中表达和高表达组平均生存时间为 45.95个月，Musashi-1中表达和高表达患者的生存时间较阴性组和低表达患者显著减少（P=0.007，封三图4）。