猪圆环病毒2型杆状病毒载体灭活疫苗临床免疫效果比较

刘国民 宋庆庆 刘玉梅 李红炳 林文耀 张彦婷 娜仁高娃

1.金宇保灵生物药品有限公司

2.云南生物科技有限公司

猪圆环病毒2型（PCV2）是引起断奶猪多系统衰竭综合征（PMWS）的主要病原。被PCV2感染的患病猪只主要表现生长迟缓、渐进性消瘦、均匀度差等现象。除了上述症状以外，PCV2还与猪皮炎肾病综合征（PDNS）、猪呼吸道疾病综合征（PRDC）以及繁殖障碍等密切相关。因此，有学者将这些与PCV2有关的疾病统称为猪圆环病毒病（PCVD）。目前，通过国内外报道发现PCV2在猪群中的感染非常普遍。因此给养殖户造成的直接或间接经济损失一直居高不下。疫苗免疫接种是有效预防该病的方法之一。目前，我国上市的猪圆环病毒疫苗有30多种，商品化的疫苗之多，以及制造工艺不同，这给养猪企业筛选优质的圆环疫苗带来一些困难，为了观察不同疫苗的临床效果，我们进行了本次实验。

一、材料与方法

1.材料

1）试验用疫苗。对照组：猪圆环病毒 2 型灭活疫苗（WH株），商品名：科圆宁。试验组：由金宇集团扬州优邦公司生产商品名：圆立优，圆立优生产系沿用金宇口蹄疫多级全悬浮培养技术，采样用sf9 昆虫杆状病毒载体表达，实现抗原的高效表达。猪圆环病毒Cap蛋白含量≥50ug/头份，疫苗总蛋白含量＜300μg/mL，而且病毒培养物经过先进的多级纯化工艺后获得精制抗原，杂蛋白清除率超过99%。

2）试验猪场选择。为了验证圆立优的临床使用效果，我公司在全国范围内开展了大规模的临床试验，在试验期间我们分别对国内、国外圆环病毒疫苗进行了大量的对比实验（具体试验区域参考图1），本试验数据是金宇在云南省开展的部份数据。选择云南省1000以上的规模猪场做为试验对象，同时实验组与对照组均在相同的条件下饲养管理，不改变本场的免疫程序，按照各公司推荐的免疫程序进行接种。试验组：金宇组推荐14日龄接种一头份圆立优；对照组：按照竞争厂家推荐程序免疫进行免疫。免疫后通过观察生产指标（日增重、料肉比、死亡率、排毒量、抗体水平等）进行对比分析来评价疫苗使用效果，具体的试验方案如下。

图1 圆立优产品试验分区

2.方法

1）试验动物分组方案。选取1胎初产母猪15窝，2胎以上经产母猪20窝，每窝选出4头公仔猪、4头母仔猪,随机分成A、B两组，在免疫圆环疫苗前仔猪称重，记录每一头仔猪重量，计算记录每组均重；在60日龄时再次称重，记录平均体重，计算出增重，同时统计仔猪发病率及淘汰率。A组为现行疫苗对照组，B组为圆立优试验组。

2）圆环疫苗接种方案。A组与B组疫苗接种方案如表1。

表1 猪圆环病毒2型灭活疫苗临床免疫方案

3）样品采集。在14d以前以及在免疫后30d、免后90d分别采血，同时采集粪样。

4）圆环抗体、粪样排毒量检测。圆环病毒抗体由云南正大动物保健中心检测；圆环病毒粪样检测由扬州优邦公司检测。

3.统计分析

通过血清来检测抗体水平，以确定母源抗体水平和免疫抗体水平整齐度；通过PCR方法检测粪样中的病毒，以监测带毒排毒状况。对照组与试验组所有数据（体重、日增重、死亡率）用SPSS17.0软件进行系统分析，并进行显著性分析，最终综合评估圆环疫苗免疫效果。

二、结果与分析

1.仔猪14日龄免疫圆环疫苗后进行血清学抗体评估。试验A组、B组：免前14d、一免后30d、一免后90d抗体检测数据具体检测结果详见表2、图2。

从表2图2中免前抗体数据分析可知：A组抗体阳性率高于B组，因为免前数据是根据猪群实际情况随机抽取的血样，由于猪群个体的原因，免疫前不同仔猪的抗体水平有一定差异。为了体现金宇疫苗的优势，在分组过程中让A组母源抗体好一些，而B做母源抗体稍低一些，但通过统计分析试验A组与B 组之间母源抗体差异不显著（P＜0.05）。

表2 云南某规模化猪场圆环抗体检测结果比较

图2 某规模化猪场圆环抗体（s/p值）检测结果比较

从表2图2中一免后30d抗体数据分析可知：B组变异系数与A组变系数比较差异不显著（P＜0.05），但抗体平均值和抗体阳性率B组明显优于A组，而且差异显著（P＜0.05）。从S/P值数据发现B组抗体数据明显优于A组，而且差异显著（P＜0.05）。

从表2图2中一免后90d抗体数据分析可知：B组S/P明显优于A组数据，而且B组S/P稳定1～1.5之间，抗体极差异显著（P＜0.01），说明猪群免疫圆环疫苗后B组圆环抗体相对稳定，从而间接说明B组疫苗质量优于A组疫苗。

2.试验仔猪免疫前后圆环病毒排毒量监测。从免疫前、免疫后30d、90d抗原检测结果分析来看，仔猪出生2周时刚开始进行疫苗免疫，本场存在猪圆环病毒2型野毒感染情况，但感染率并不高。本猪场免疫圆环疫苗后90d，对34头仔猪进行检测，其中仅有3头（A4、A16和B19）抗原检测为明显阳性，其余均为弱阳性，说明猪圆环病毒2型疫苗免疫后90d可以有效地清除体内的抗原，使用疫苗后可以有效地遏制抗原的扩散和感染。从表3、图3～5中圆环病毒排毒量分析统计分析可知：免疫前A组与B组之间差异不显著（P＞0.05）；一免后30d、90d B组排毒量明显低于A组，而差异不显著（P＜0.05），说明猪群免疫圆环疫苗后能有效地压制圆环病毒的感染，而且从实验结果发现B组疫苗好于A组疫苗。

表3 试验猪群免疫前后圆环病毒排毒统计情况

图3 免前14d检测圆环抗原情况 ，猪群有感染

图4 免后5周检测圆环抗原情况，猪群感染比例降低

3.试验猪群生产成绩评估

1）免疫后30d体重增长差异分析（结果见表4、表5）。从表4中可以看出单尾检验和双尾检验均小于临界值，即两组仔猪的平均增长体重无显著差异，但免后30d B组平均增重高于A组0.27kg/头。

表4 免疫后30d体重增长差异分析

2）免疫后90d体重增长差异分析。从表5中可以看出单尾检验和双尾检验均小于临界值，即两组仔猪的平均增长体重无显著差异，但免后90dB组平均增重高于A组9.29kg/头，即疫苗免疫后90d B组的平均增重每头高于A组9.29kg，结合当前猪肉价格预计每头可增加150元左右（按16元/kg计算）。且B组仔猪体重离散度低、体重较均一。

表5 免疫后4周体重增长差异分析

三、讨论

1.仔猪免疫圆环病毒疫苗后血清学检测和病毒血症。猪群的健康是规模化猪场稳定生产的前提，而猪圆环病毒病控制的好坏直接关系到整个猪群的健康状况。通过流行病学调查发现，几乎所有的猪场都存在猪圆环病毒2型（PCV2）感染，而且保育仔猪和生长育肥猪感染率最高，很多猪场达100%，而圆环阴性场全国屈指可数，因此PCV2防控非常严峻。疫苗免疫能降低猪群母源抗体的下降速度,在一定程度上可减少群体向外排毒的机会,降低整个猪群和环境中的PCV2感染压力,达到预防PCVD的目的。目前，对于圆环病毒抗体水平虽然说法不一，但肯定越高越好。姜平研究表明，PCV2抗体水平越高，病毒血症水平越低，抗体含量与病毒攻毒保护成正相关。刑刚研究也表明，圆环病毒疫苗效果可以分析抗体水平变化进行初步评估，仔猪母源抗体产后1周左右达到峰值，6周开始降到保护线以下，8周则是圆环病毒的感染高峰期，在8周进行监测能够真实反映圆环病毒疫苗免疫抗体的水平。从本次抗体检测结果分析可知，B组一免后30d、90d抗体数据明显优于A组数据，而且差异显著（P＜0.05），从抗体数据和排毒量数据综合分析说明B组疫苗质量优于A组疫苗。综合考虑B组疫苗免疫效果明显优于A组疫苗。

2.生产性能评估与经济效益分析。目前，圆环疫苗临床效果评价还存在一定争议，但现阶段大部养猪场通过实验室手段，同时统计成活率、出栏天数、饲料转化率、用药成本、猪群整齐度和经济效益分析等指标来综合评价圆环病毒疫苗效果。临床研究也表明，商品化的PCV2疫苗能有效的控制圆环病毒相关疾病，接种PCV2疫苗可减轻病毒血症，增加日增重。从本次试验结果可知，在整个试验阶段B组猪的均匀度、死亡率好于A组猪群而且差异显著；从保育阶段数据分析可知，B组平均重比对照A组多9.29kg。对于一个年出栏1万头猪场来讲，平均每头猪增重9.29Kg其经济收入是可观的。因此，对于规模化猪场来讲选择一个高性价比的圆环疫苗，对提高猪场的生产成绩及整体效益非常关键。

综上所述，从抗体数据、病毒排毒量、生产数据综合分析可知，B组明显优于试验对照组，而且B组在免疫后90d能明显的降低病毒血症，猪群感染比例明显低于对照A组。目前，对于市面销售的圆环病毒疫苗来讲，有全病毒疫苗、真核表达的亚单位疫苗、原核表达的亚单位疫苗，其临床效果排序，真核表达的亚单位疫苗好于全病毒疫苗和原核表达的亚单位疫苗。