宫颈SIgA联合血清LncRNA-ROR与miR-29检测对女性慢性盆腔炎的诊断价值

(鄂州市中心医院妇产科，湖北 鄂州 436000)

慢性盆腔炎(pelvic inflammatory disease，PID)指女性内生殖器及其周围结缔组织、盆腔腹膜的慢性炎症[1]。PID起病多隐匿，且易反复发作导致疾病迁延不愈，甚至诱发不孕[2-3]。研究等指出，肝炎、肺炎等多种炎症组织中长链非编码RNA (long non-coding RNA，lncRNA)-ROR呈显著上升趋势，此外还有研究指出微小RNA-29(microRNA-29，miR-29)参与白介素2和白介素6等多种细胞因子的分泌，被认为是调节炎症反应的重要基因[4]。机体炎症免疫失调、巨噬细胞和上皮细胞等细胞分泌免疫效应因子功能紊乱被认为是PID疾病发展的重要因素[5-6]。宫颈分泌型IgA(secretory IgA，SIgA)、lncRNA-ROR和miR-29在机体处于炎症状态时可有异常表达[7-9]。本文收集了150例PID患者与150例健康女性，旨在探究宫颈SIgA、血清LncRNA-ROR与miR-29对PID的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取鄂州市中心医院妇产科2015年6月至2018年6月确诊的PID患者150例为病例组。包括输卵管炎(腹腔镜下表现为一侧或双侧输卵管增粗)合并卵巢炎(腹腔镜下表现为一侧或双侧卵巢组织肿大)65例、输卵管炎合并卵巢炎与慢性盆腔结缔组织炎(腹腔镜下表现为盆腔腹膜后方，子宫两侧及膀胱前间隙处结缔组织积脓)共51例、单纯输卵管炎11例、慢性盆腔结缔组织炎11例、子宫体炎12例(腹腔镜下表现为子宫体水肿、充血)。各种PID的诊断依据均来自腹腔镜检查结果[10]。患者平均年龄(32.5±3.4)岁。病例组纳入标准为：(1)经腹腔镜检查确诊为PID；(2)入院前未经治疗；(3)语言表达能力正常，能与调查人员进行正常的沟通；(4)研究对象自愿参与本研究。对照组纳入标准为：(1)既往无盆腔慢性疼痛病史；(2)月经规律；(3)妇科B超未见异常；(4)妇检无宫颈举痛、下腹部未扪及包块。所有研究对象均排除：(1)其他肿瘤史；(2)未签署知情同意书者。对照组为同期在本院行健康体检的健康女性150例，平均年龄(33.9±3.8)岁。本项目由本院伦理委员会批准。

1.2 宫颈SIgA检测

由专业医师经阴道窥器用一次性无菌注射器抽取宫颈黏液0.5 mL，放入密封标本瓶中，于1 h内在4 ℃条件下以3 500 g离心力(离心半径为10 cm)离心10 min(离心机购自中国湘仪集团H-1850R型)，吸取上清进行SIgA检测。宫颈黏液的抽取时间均在研究对象黄体期。宫颈SIgA采用放射免疫分析法检测，检测仪器为美国贝克曼库尔特公司AU5800生化仪，检测试剂盒来源于上海华大科技有限公司。

1.3 血清LncRNA ROR与miR-29水平检测

使用含促凝剂采血管抽取PID患者治疗前和健康体检者的空腹外周静脉血5 mL。血液标本在1 h内于4 ℃条件下以12 000 g离心力离心15 min，收集上层血清进行LncRNA ROR与miR-29水平检测。

应用RNA提取试剂盒(中国Bioteke公司)提取总RNA，使用逆转录试剂盒(中国Takara公司)将总RNA逆转录为cDNA，进行实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，RT-PCR)。循环条件：95 ℃变性5 min；95 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，45个循环。LncRNA-ROR、miR-29与GAPDH引物序列见表1。采用2-ΔCt法计算各基因的相对表达量。

表1 LncRNA-ROR、miR-29与GAPDH的引物序列

1.4 统计学分析

应用SPSS 20.0进行统计分析。对于正态分布资料，以均数±标准差表示。正态分布数据两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析。率的比较采用卡方检验。二元Logistic回归分析计算血清LncRNA-ROR、miR-29与宫颈SIgA预测PID的比值比(odds ratio，OR)，受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve，ROC)分析计算三者鉴别PID患者的曲线下面积(area under ROC curve，AUC)。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 基本资料与宫颈SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平比较

两组研究对象在年龄、吸烟、饮酒等方面的差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。相比于对照组，病例组宫颈SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平均增高，且差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2。此外，病例组宫颈SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平在不同部位PID患者中的差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表2 基本资料与宫颈SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平比较

(n=150)

表3 各类型PID患者宫颈SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平比较

2.2 宫颈SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29对PID的鉴别诊断

ROC曲线分析显示，宫颈SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29在区分PID与健康女性的AUC分别为：0.664(95%CI：0.573～0.762，P=0.003)、0.814(95%CI：0.783～0.902，P<0.001)和0.846(95%CI：0.797～0.925，P<0.001)；灵敏度/特异度分别为74.9%/48.7%、76.5%/83.3%和78.1%/92.3%；诊断界值分别为74.6 μg/mL、34.6(-log)和16.2(-log)。联合宫颈SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29区分PID与健康女性的AUC为0.924(95%CI：0.882～0.989，P<0.001)，灵敏度为88.8%，特异度为91.6%，见图1。

图1 宫颈SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29对PID的鉴别诊断

2.3 宫颈SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29对PID的发病风险评估

单因素分析结果显示，高宫颈SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平是PID发病的危险因素。多因素分析结果表明，在校正年龄、BMI、吸烟、饮酒等因素影响后，高宫颈SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平仍是PID发病的独立危险因素，见表4。

3 讨 论

LncRNA和miR是近年研究的热点，这两类属于非编码RNA且均广泛表达于单核细胞、中性粒细胞、T细胞和B细胞中，并可诱导这些免疫细胞向病灶迁移，吞噬或杀灭病原体，参与机体炎症反应过程[11-12]。Yang等[8]指出，肝炎、肺炎等多种炎症组织中LncRNA-ROR呈显著上升趋势，提示LncRNA-ROR水平与炎症疾病相关。多个研究指出miR-29参与白介素2和白介素6等多种细胞因子的分泌，被认为是调节炎症反应的重要基因[4]。机体炎症免疫失调、巨噬细胞和上皮细胞等细胞分泌免疫效应因子功能紊乱被认为是PID疾病发展的重要因素[5-6]。在本次研究中，相比于健康女性，PID患者的血清LncRNA-ROR及miR-29水平均显著增高，该结果与前期多个基础研究结果相符[4,8]，二者对PID的诊断具有较高的敏感性。

表4 宫颈SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29对PID的发病风险评估

SIgA是存在于人体黏膜的一种重要免疫球蛋白，当黏膜受到炎症刺激时，其水平会迅速增高[13]。在本次研究中，发现宫颈SIgA水平在PID患者中显著增高，推测这是由于PID时，所产生的SIgA更容易被检测到。宫颈SIgA诊断PID的敏感性较高，当联合血清LncRNA-ROR、miR-29与宫颈SIgA，诊断PID的灵敏度为88.8%，特异度为91.6%，显著优于单项指标的诊断价值。此外，本研究还对血清LncRNA-ROR、miR-29与宫颈SIgA对PID的发病风险进行评估，结果表明三者均是PID发病的独立危险因素，提示该三项指标的联合检测对PID发病风险的预测也具有一定价值。

然而，本次研究仍有如下不足：(1)由于PID的确诊依赖于腹腔镜检查，因而对照中无法完全排除PID，但本研究的对照排除了慢性盆腔痛，宫颈举痛、腹部包块的女性，此种情况下，对照中PID所占比例极低，不足以对研究结果造成影响；(3)本次研究中采用的血清LncRNA-ROR、miR-29与宫颈SIgA多个指标的联合模型虽然较各单独指标有较高的临床价值，但该模型的应用仍有待进一步的验证；(4)本次纳入的150例PID患者均来自于本院，这可能会造成一定的选择偏倚，后期需要更多的多中心队列研究来进一步证实；(5)本研究中宫颈黏液的抽取时间均在研究对象的黄体期，但是PID患者的发病时间可能不一定处在黄体期，未来需要进一步分析不同月经周期时宫颈SIgA水平是否对结果产生影响。

综上所述，本研究首次探究了联合检测血清LncRNA-ROR、miR-29与宫颈SIgA三项指标对PID的诊断与发病风险预测价值，并发现联合该三项指标诊断PID具有较高的灵敏度，且三者均是PID发病的独立危险因素，有望为PID的临床诊疗提供新思路。

致谢：向给予我教诲和帮助的人们致以崇高的敬意和真诚的感谢!承蒙领导和同事的帮助，尤其是文章的第二作者，对我的大力支持，谢谢！