强直性脊柱炎患者血清DKK-1、VEGF-A、IL-17水平变化及其临床意义

刘大栋

周口市中心医院骨科，河南 周口 466000

强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)是以骶髂关节和脊柱附着点炎症为主要病理改变的疾病[1]。病变特点为四肢大关节、椎间盘纤维环及其附近结缔组织出现纤维化和骨化，或者出现关节强直等，是一种慢性炎性疾病[2]。该病起病比较隐匿，早期可无任何临床症状，导致病情延误，容易错过最佳治疗时机[3]。Dickkopf-1蛋白(DKK-1)不仅存在于扁骨中，在管状骨中也有表达，其含量与骨密度呈负相关，血管内皮细胞生长因子-A(VEGF-A)作为促进血管生成的物质，也参与软骨生成，白细胞介素-17则主要与炎症反应相关[4]。本研究选取我院收治的AS患者(AS组)、健康体检对象(健康组)，分析血清DKK-1、VEGF-A、IL-17与AS患者红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate，ESR)、C-反应蛋白(C-reactive protein，CRP)、强直性脊柱炎疾病活动指数(BASDAI)、巴氏强直性脊柱炎功能指数(BASFI)的关系。

1 材料和方法

1.1 临床资料

选取我院2016年2月至2017年9月收治的AS患者40例(AS组)、健康体检对象40名(健康组)。AS组：年龄18～65岁，平均(35.5±13.0)岁，男28例、女12例，平均病程(7.8±2.9)年。健康组：年龄18～65岁，平均(37.2±15.1)岁，男25例、女15例。两组研究对象的年龄、性别比较，差异不具有统计学意义(P>0.05)。

纳入标准：(1)强直性脊柱炎患者的诊断标准参考1997年美国风湿病协会制定的诊断标准；(2)患者年龄范围18～65岁；(3)入院后经X线、CT诊断检测及病理学检查确诊；(4)患者未接受抗肿瘤坏死因子药物治疗；(5)本研究获得医学伦理委员会的批准。

排除标准：(1)结核、肿瘤；(2)血液系统疾病；(3)免疫功能缺陷性疾病；(4)严重的骨质疏松；(5)肝肾功能疾病；(6)近3个月使用糖皮质激素、抗骨质疏松药物。

1.2 各项实验室指标的检测方法

检测两组的血清DKK-1、VEGF-A、IL-17、ESR、CRP水平。AS患者和健康体检对象均于清晨取静脉血5 mL，血样离心后于-80 ℃条件下保存。DKK-1、VEGF-A、IL-17使用ELISA方法统一检测，DKK-1 ELISA试剂盒来自于南京森贝伽生物科技有限公司，VEGF-A ELISA试剂盒则来自上海江莱生物科技有限公司。IL-17 ELISA试剂盒采购自上海樊克生物科技有限公司。DKK-1、VEGF-A、IL-17检测步骤相同，首先解冻血清，用ELISA试剂盒里的稀释液稀释后，将其分别加入预包被96孔板内(ELISA试剂盒提供)，再分别加入100 μL稀释后的样品和标准品，37 ℃条件下孵育90 min。除去上清液后，清洗3次左右，每孔加入100 μL亲和素-过氧化物酶复合物，于37 ℃条件下孵育30 min，再次除去上清液，清洗5次后。每孔均加入100 μL TMB显色液，在37 ℃避光反应30 min后，加入TMB终止液。通过标准曲线计算样品中相应指标的浓度。

ESR采用温氏法测定，枸橼酸钠(4∶1)抗凝血2 mL，用LENA血沉仪测定红细胞沉降率。CRP通过胶体金法测定，即CRP检测试剂盒(生产厂家：基蛋生物科技股份有限公司)测定，取少量血清样本，通过产品说明书操作后，与上海凯创医药生物科技有限公司KD-I型金标读数仪配套使用进行测定。

1.3 强直性脊柱炎疾病活动指数、巴氏强直性脊柱炎功能指数

BASDAI：该量表主要是对患者过去一周脊柱疼痛、疲劳感、关节疼痛感、肌腱附着点局限性压痛、晨僵5种症状的持续时间、疼痛程度进行评估，评分越高表示疾病活动程度越强。

BASFI：主要采用视觉模拟评分法，对患者完成日常生活活动的情况进行自主评分。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 两组研究对象的血清DKK-1、VEGF-A、IL-17水平比较

AS组患者的血清DKK-1、VEGF-A、IL-17水平显著高于健康组，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

组别例数DKK-1VEGF-AIL-17AS组401663.9±182.0328.1±23.332.8±8.9健康组401310.4±121.7292.4±19.512.6±4.1t值10.212 7.431 13.038 P值0.000 0.000 0.000

2.2 两组研究对象的ESR、血清CRP水平比较

AS组患者的ESR、血清CRP水平显著高于健康组，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

组别例数ESR/(mm/h)CRP/(mg/L)AS组4029.5±7.827.9±14.8健康组4011.0±4.23.8±1.2t值13.208 10.265 P值0.000 0.000

2.3 AS患者血清DKK-1、VEGF-A、IL-17水平与患者疾病活动程度的关系

AS组患者的BASDAI评估值为(52.91±10.62)分、BASFI评估值为(55.81±9.70)分。AS患者血清DKK-1、IL-17水平与ESR、血清CRP水平BASDAI评分、BASFI评分呈显著正相关关系(P<0.05)；AS患者血清VEGF-A水平与ESR、血清CRP水平BASDAI评分、BASFI评分无显著的相关性(P<0.05)，见表3。

表3AS患者血清DKK-1、VEGF-A、IL-17水平与患者疾病活动程度的关系

Table3Relationship between serum DKK-1, VEGF-A and IL-17 levels and disease activity in AS patients

指标BASDAIBASFIESRCRPDKK-1 r值0.671 0.704 0.663 0.528 P值0.000 0.000 0.000 0.000VEGF-A r值0.204 0.152 0.091 0.127 P值0.084 0.291 0.421 0.336IL-17 r值0.711 0.615 0.639 0.577 P值0.000 0.000 0.000 0.000

3 讨论

强直性脊柱炎属于风湿病的范畴，是一种慢性疾病，也是自身免疫疾病，该病主要以脊柱为病变部位，病变涉及骶髂关节，引起脊柱僵硬和纤维化，并引起眼、肺、肌肉和骨骼的病理变化[5]。患者早期不一定会有症状出现，也有部分病人早期出现乏力、消瘦、长期或间断低热、厌食、轻度贫血等现象[6]。早期病变部位关节存在炎性疼痛，伴有关节周围肌肉痉挛、僵硬，在清晨较为明显，它也可以表现为夜间疼痛，随着疾病发展，关节的疼痛减轻，脊柱节段和关节的运动受到限制和变形，并且后期整个脊柱和下肢出现僵硬和向前屈曲[7]。AS治疗的目的在于控制炎症，进而起到减轻或者缓解症状的作用，同时为了防止畸形，要注意在日常生活中保持正确姿势，治疗的药物主要包括非甾体类抗炎药、柳氮磺胺吡啶、甲氨蝶呤、肾上腺皮质激素、雷公藤多甙、生物制剂，使用何种药物主要根据患者的实际情况，对脊柱严重变形的患者，在其情况稳定后可采取手术治疗[8]。

经典型的Wnt信号通路是成骨细胞增殖、分化以及成熟的必需通路，而DKK-1是一种抑制骨形成过程相关通路的关键性因子，在抑制Wnt信号通路中具有重要意义[9]。VEGF-A是一种体内含量较多且功能强大的促血管生长因子，该因子参与软骨和骨的生成，其水平还与脊柱病变程度存在关联，其含量越高提示脊柱病变越严重[10]。IL-17是T细胞诱导的炎症反应的早期启动因子，主要通过促进释放前炎性细胞因子来激发炎症反应，IL-17与受体结合后可通过MAP激酶途径和NF-kB途径发挥其生物学作用，加剧体内炎症程度[11]。AS组患者的血清DKK-1、VEGF-A、IL-17水平显著高于健康组，差异具有统计学意义，该结果说明DKK-1、VEGF-A、IL-17与骨的形成、脊椎病变及炎症反应之间存在密切联系，因AS患者的脊柱病变和体内炎症反应明显强于正常人群，因此各指标较正常人群高。

机体受到感染或组织损伤时血浆中CRP会急剧上升，进而激活补体和加强吞噬细胞功能，除去体内的病原微生物及损伤、坏死及凋亡的细胞，在机体的天然免疫过程中发挥重要的作用[12]。临床上常用ESR作为红细胞间聚集性的指标，可用来反映身体内部的某些疾病，当机体出现炎症反应时，其含量呈现上升趋势[13]。AS组患者的ESR、血清CRP水平显著高于健康组，差异具有统计学意义，因AS患者体内含有较多的炎症因子，使机体出现强烈的炎症反应及免疫应答，故与炎症反应相关的ESR、CRP较正常人群高。

AS组患者的BASDAI评估值为(52.91±10.62)分、BASFI评估值为(55.81±9.70)分，上述评估值代表了患者其疾病活动程度处于较高的水平；AS患者血清DKK-1、IL-17水平与ESR、血清CRP水平BASDAI评分、BASFI评分呈显著正相关关系，提示可通过血清DKK-1、IL-17水平反映疾病活动程度，检测上述指标有助于判断治疗后的疗效；AS患者血清VEGF-A水平与ESR、血清CRP水平BASDAI评分、BASFI评分无显著的相关性，可能是因为VEGF-A水平的影响因素较多，故未明显显示各指标之间的相关性。

综上所述，AS患者血清DKK-1、VEGF-A、IL-17的水平较健康人群显著升高，其中血清DKK-1、IL-17水平还能反映患者的疾病活动程度，可将其用于患者的临床病情判断。