7 360例呼吸道感染儿童病毒抗原七联检的临床结果分析

柳晓琴，崔亚利，沈 川，甘春玉，段义飞，彭磊文，李文胜△

(1.四川大学华西第二医院临床检验科,四川成都 610041；2.出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室,四川成都 610041)

病毒、细菌和非典型病原体是儿童患者3大类主要致病源，病毒感染是引起儿童呼吸道感染的重要原因[1]。呼吸道病毒的检测可以通过抗原或抗体进行检测鉴定，有资料证实，应用直接荧光免疫方法(DFA)对抗原进行早期检测，可以使患者接受治疗的时间降低2.5～4 d[2-3]。不同年龄阶段的患儿对病毒的耐受力不同，免疫器官和组织发育阶段不一致，患儿感染后会有不同程度的症状，尤其是处于婴儿阶段，一旦发病可能危及生命，所以早期明确病毒感染亟待解决[4-5]。

为了解本地区呼吸道病原体感染的病原学构成和流行病学特征，本研究回顾性收集2016年4月至2018年3月期间在四川大学华西第二医院就诊的7 360例急性呼吸道感染患儿呼吸道病毒抗原的检测结果，以期为临床医生对这类患者进行早期诊断，治疗及合理用药提供可靠的理论依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 2016年4月至2018年3月在四川大学华西第二医院就诊，经临床确诊为急性呼吸道感染、急性喘息性支气管炎、急性扁桃体炎、急性支气管炎、急性肺炎和急性重症肺炎的疾病，年龄为0～15岁的患儿。

1.2标本采集 根据本科的《标本采集标准程序》要求在患儿平躺或头仰起时，用植绒拭子从鼻孔插入鼻腔，到达鼻咽部来回旋转2～3次后迅速抽出拭子放入加有2 mL生理盐水的七联检专用离心管中，并立即送检。

1.3试剂与仪器 7项呼吸道病毒检测试剂盒(免疫荧光法)为美国Diagnostic Hybrids,Inc.公司的产品。检测项目包括流感病毒A型(Flu A)、流感病毒B型(Flu B)、副流感病毒1型(PIV1)、副流感病毒2型(PIV2)、副流感病毒3型(PIV3)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)。2016年4月至2018年3月期间，所使用的批号分别为7R111715B、7R030916D、085046、092922、105269和114347，新批号启用前，均按照ISO15189要求做新旧批号标本比对，阴阳性结果均一致。采用奥林巴斯BX43 LED荧光显微镜观察结果。

1.4操作方法

1.4.1样本处理 将植绒拭子样本在旋涡混匀器上剧烈涡旋混匀约30 d，见浑浊后去掉植绒拭子，离心2 000 r/min，10 min，弃去上清液(留400～500 μL )，吸管吹打混匀，形成混浊的细胞悬浮液。

1.4.2样本制片 每份样本在8孔的载玻片上，每孔中分别加入25 μL样本悬浮液。在电吹风冷风下风干10～15 min至干燥后浸没在冷丙酮中固定10 min，取出晾干。

1.4.3样本反应 每份样本的1孔到7孔分别加D3试剂(Flu A、Flu B、PIV1、PIV2、PIV3、RSV、ADV)25 μL，必须完全覆盖待测样本，将载玻片放在湿盒中置于37 ℃水浴箱，孵育15～30 min，取出载玻片用PBS冲洗1遍，后浸没在PBS中洗2遍。

1.4.4样本观察 在载玻片中央加1滴封闭液，盖上盖玻片，荧光显微镜下观察。

1.4.5结果判断 荧光显微镜下显示苹果绿荧光的细胞为阳性细胞，而被Evans蓝染成红色的细胞为阴性细胞。当放大倍数为200倍时，在视野中找到≥2个阳性细胞，判为标本阳性。阴性对照/阳性对照处理同样本处理流程。合格的样本要求在放大倍数为200倍下，每个视野至少有2个上皮细胞。阴性结果为至少含有20个柱状上皮细胞的样本中无荧光染色。如果样本中上皮细胞数量少于20个则为样本不合格，应重新采样再进行检测。

1.5统计学处理 所有数据采用SPSS19.0统计软件进行统计分析处理，率的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1呼吸道病毒总检出率 7 360例急性呼吸道感染标本中，783例标本呼吸道病毒抗原检测结果呈阳性，阳性率为10.64%(783/7 360)，其中2项同时有阳性结果的8例，以RSV合并感染最常见，占总阳性标本的0.11%；阳性率最高的是RSV(7.40%)，其次为PIV3(1.45%)，ADV(0.84%)，Flu B(0.34%)，Flu A(0.33%)，PIV1 (0.24%)和PIV2(0.03%)。结果见表1。在7 360例患儿检测结果中，按年龄分为3组：婴儿组(≤1岁)，幼儿组(1～3岁)，学龄后组(≥3岁)。不同年龄组患儿呼吸道病毒阳性率见表2。多组样本间呼吸道七联检用χ2检验，由表2结果可知，婴儿组与幼儿组病毒检出率比较，差异有统计学意义(χ2=120.89，P<0.001)；幼儿组与学龄后组病毒检出率比较，差异有统计学意义(χ2=34.72，P<0.001)；婴儿组与学龄后组病毒检出率比较，差异有统计学意义(χ2=280.44，P<0.001)。

表1 7项呼吸道病毒检测结果

2.2不同季节患儿呼吸道病毒发病率 此次统计得出，男性患儿4 288例，发病患儿阳性率占11.22%，其中，女性患儿3 072例，发病患儿阳性率占9.83%。男性与女性患儿检出率比较，差异无统计学意义(χ2=7.705，P>0.05)。按四季发病率统计，春季发病患儿2 328例，患儿阳性率占14.05%；夏季发病患儿1 695例，患儿阳性率占4.72%；秋季发病患儿1 449例，患儿阳性率占5.31%；冬季发病患儿1 888例，患儿阳性率占16.37%。春季与夏季检出率比较，差异有统计学意义(χ2=105.933，P<0.001)；秋季与冬季检出率比较，差异有统计学意义(χ2=114.824，P<0.001)；秋季与冬季检出率比较，差异有统计学意义(χ2=105.933，P<0.001)；春季与冬季检出率比较，差异有统计学意义(χ2=29.851，P<0.001)。

表2 不同年龄组患儿呼吸道病毒检测结果

表3 不同季节患儿呼吸道病毒发病率

3 讨 论

引起呼吸道感染的病原体种类繁多，导致呼吸道感染病情复杂，临床症状多样[6]。因此，对于引起呼吸道感染的呼吸道病原体的准确诊断变得十分重要，应及早干预、诊断与治疗，以降低其发病率及病死率[7-8]。这不仅对感染患者的健康恢复有重要的价值，另一方面，尽早发现疑似病例，快速确认病原体，有利于对病原体流行爆发的控制，以避免危及更广泛的人群，也可为流行病学调查、疾病治疗及疫情防治提供强有力的支持[6,9]。

急性呼吸道感染中80%由呼吸道病毒引起，研究表明呼吸道病毒七联检是检测小儿呼吸道病毒感染的有效手段[10-11]。近年来，有研究表明婴幼儿急性肺炎是我国住院患儿死亡的主要原因之一[12]，每年因呼吸道感染病死的儿童占患儿死亡人数的20%左右，严重影响着儿童的身体健康[13-14]。儿童呼吸道的感染与病原体、年龄、饮食、心理及儿童所在的地区差异有关，其中病原体因素占主导地位。随着科技的发展，抗菌药物的生产随之增多，临床上的抗菌药物得到广泛应用，呼吸道感染有所降低，但其他病原体感染却有上升之势[15-16]。钱熊杰等[17]的研究表明，儿童急性呼吸道感染中，上呼吸道感染主要由病毒引起(53.78%)。

本研究结果显示，7 360例急性呼吸道感染患儿标本中，有783例呼吸道病毒检测结果呈阳性，阳性率达10.64%。阳性率由高到低依次为RSV、PIV3、ADV、Flu B、Flu A、PIV1、PIV2，这与FEARNS等[18]报道的结果是一致。在年龄分组结果中，婴儿组患儿检出阳性率远高于幼儿组和学龄后组，这提示临床医生婴儿呼吸道病毒感染的概率高于幼儿和学龄后儿童，进一步提示这类患儿就诊时可以进行早期呼吸道病原体筛查。春季和冬季7项呼吸道病毒感染的检出率远高于夏季和秋季，这与赖伟兰等[19]得出的结论一致。本研究结果发现，急性呼吸道感染情况受年龄和季节的影响较大，并表现出各年龄段儿童的感染率不同。鉴于近年来RSV感染明显增多，每个地区一年四季均可发病，常引起严重的呼吸道疾病，所以在临床上不容忽视[20]。流感病毒感染发生高峰在北半球一般是从11月至来年4月，腺病毒出现在深冬到夏初，RSV通常是在冬天到早春，持续5个月流行，副流感病毒爆发会持续1年。

通过检测呼吸道病毒抗原可有效发现疫情的暴发流行，早期进行呼吸道病毒七联检可以及时有效地筛查出患儿所感染病毒种类，监测患儿病情，指导临床合理的用药，为做好婴幼儿的预防及医院储备相关药品等起到一定提示作用，进而为婴幼儿急性呼吸道感染治疗的相关探索研究提供流行病学依据。但是，该检测方法存在一定局限性，如标本采集质量不合格易发生漏检，且检测结果未经核酸检测验证，可能出现假阳性。尽管如此，该方法相较于核酸检测对人员及设备要求均不高，且成本较低，可广泛适用于基层医院开展。早期诊断对使用抗病毒药物治疗、缓解流感症状、缩短病程、降低并发症发生率、缩短排毒时间、降低病死率有积极作用，在流行期间，预防性使用抗病毒药物可能降低患病率，节省患者开支和医院资源。

4 结 论

呼吸道病原体的准确检测对呼吸道感染的早期诊断、干预及治疗具有重要的指导意义。急性呼吸道感染情况受年龄和季节影响大。呼吸道病毒七联检是检测小儿呼吸道病毒感染的有效手段。