顶空气相色谱法测定鱼肝油酸钠注射液中有机溶剂残留量

戴黎黎， 李苗

(武汉药品医疗器械检验所，武汉 430075)

鱼肝油酸钠注射液(sodium morrhuate injection)为鱼肝油中各种脂肪酸钠盐的灭菌水溶液[1]。本品经局部注射后，刺激血管内膜促进其增生，逐渐闭塞血管使之硬化，作为血管硬化剂用于血管瘤、静脉曲张、内痔、颞合关节病(脱位或半脱位者)，也用于妇科、外科等创面渗血和出血[1]。鱼肝油酸钠以鳕鱼肝油为原料，经过皂化、酸化、提取，最后成盐制得鱼肝油酸钠。在生产过程中引入了乙醇、乙醚等有机溶剂，但鱼肝油酸钠注射液的质量标准中未控制有机溶剂残留量[2]。为控制药品的质量与疗效，建立一个良好的注射液残留溶剂检查方法非常有必要，笔者参照文献[3-8]，采用顶空气相色谱法测定鱼肝油酸钠注射液中乙醇及乙醚残留量，报道如下。

1 仪器与试药

1.1仪器 Agilent 7890气相色谱仪(美国AGILENT公司)，G1888顶空进样器(美国AGILENT公司)，FID检测器，Agilent DB-624毛细管色谱柱(30 m×0.32 mm，0.18 μm)；XP105电子天平(瑞士梅特勒-托利多一期公司，感量：0.01 mg)。

1.2试药 乙醇(Fisher-Chemical)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(Fisher-Chemical)为色谱纯，乙醚(国药集团)为分析纯。鱼肝油酸钠注射液(规格为2 mL：0.1 g，批号：1510601，1510602，1610601，1610602)均由市场上抽样得到。

2 方法与结果

2.1色谱条件 Agilent DB-624毛细管色谱柱(30 m×0.32 mm，0.18 μm)；进样口温度：200 ℃；检测器(FID)温度：250 ℃；载气：氮气，流速：2.0 mL·min-1；顶空气化室平衡温度：80 ℃，平衡时间：20 min；进样体积：1 mL；柱温：40 ℃保持8 min，然后以7 ℃·min-1升温至70 ℃，保持4 min，最后以50 ℃·min-1升温至230 ℃，保持5 min。

2.2溶液的配制

2.2.1对照品溶液 精密称取乙醇、乙醚各100 mg，分别置于25 mL量瓶中，用50%DMF溶液稀释至刻度，摇匀。再各精密量取5 mL，置于同一100 mL量瓶中，加50% DMF溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密量取5 mL，置20 mL顶空进样瓶中，密封，即得对照品溶液。

2.2.2供试品溶液 精密量取鱼肝油酸钠注射液样品2 mL，置于50 mL量瓶中，加50%DMF溶液释至刻度，摇匀。精密量取5 mL，置20 mL顶空进样瓶中，密封。即得供试品溶液。

2.3系统适用性实验 按“2.2.1”项下配制对照品溶液，进样，记录色谱图。结果显示乙醇与乙醚两色谱峰的分离为2.0，理论板数以乙醚计为37 175，且DMF峰与两待测成分峰完全分离。

2.4空白溶剂考察 精密量取50%DMF溶液5 mL，置20 mL顶空进样瓶中，密封，进样。溶剂中未检出乙醇与乙醚峰，证明溶剂对实验结果无干扰。色谱图见图1。

2.5线性关系考察 取对照品储备液，以50%DMF溶液为溶剂，分别配制成含乙醇1004，401.6，200.8，100.4，20.08 μg·mL-1和含乙醚999.2，399.68，199.84，99.92，19.98，4.996，2.498，0.999 μg·mL-1的系列溶液。分别精密量取5 mL，置20 mL顶空进样瓶中，密封。依次进样测定，记录色谱图。以峰面积(A)为纵坐标，浓度(C，μg·mL-1)为横坐标，进行线性回归，分别得乙醇线性方程：A=0.289 7C-0.757 4(r=0.999 8)，线性范围为：20.08～1004 μg·mL-1；乙醚线性方程：A=6.039 1C-15.277 9(r=0.999 7)，线性范围为：0.999～999.2 μg·mL-1。

2.6加样回收率实验 精密量取样品4 mL置100 mL量瓶中，分别精密量取对照品储备液2.5，5，7.5 mL各3份置于上述量瓶中，用50%DMF溶液定容至刻度，摇匀，作为回收率实验测试液。分别精密量取回收率实验测试液和“2.2.1”项对照品溶液各5 mL，置20 mL顶空进样瓶中，密封。依次进样测定，记录色谱图。按峰面积以外标法计算回收率。结果见表1，2。

2.7检测限 取“2.2.1”项下对照品储备液，适当稀释，进样测定。当信噪比(S/N)为3时，测得乙醇和乙醚的检测限分别为71 ng·mL-1与3 ng·mL-1。

A.溶剂空白；B.对照品；C.样品；1.乙醇；2.乙醚；3.N，N-二甲基甲酰胺

图1 残留溶剂的GC图谱

A.blank solution；B.reference substance；C.sample；1.ehtanol；2.ethyl ether；3.DMF

Fig.1GCchromatogramsofresidualsolvent

表1 乙醇回收实验结果

Tab.1Resultsofrecoverytestofethanoln=9

加入量实测量μg回收率平均回收率RSD%502.0505.5100.7502.0501.599.9502.0499.099.41004.01021101.71004.0998.099.4100.00.71004.01004.0100.01506.01501.099.71506.01506.0100.01506.01500.099.6

表2 乙醚回收实验结果

Tab.2Resultsofrecoverytestofethylethern=9

2.8进样精密度实验 取“2.2.1”项下的对照品储备液各5 mL，依次置5个20 mL顶空进样瓶中，密封。分别进样测定，记录色谱图。乙醇和乙醚峰面积的RSD(n=5)分别为0.8%和1.8%。

2.9重复性实验 分别精密量取本品(批号：1510601)1.0，2.0，3.0 mL各3份，置50 mL量瓶中，用50%DMF溶液定容，摇匀，作为测试液。取9份测试液和“2.2.1”项下对照品溶液各5 mL，分别置20 mL顶空进样瓶中，密封，分别测定，记录色谱图。按峰面积以外标法计算残留量。9份样品中均未检出乙醇，均检出乙醚，平均含量(n=9) 为0.022%，RSD为1.3%，表明本法重复性好。

2.10样品测定 按照“2.2.1”“2.2.2”项方法制备对照品和供试品溶液，进样并计算样品中残留溶剂的含量。结果见表3。

表3 4批样品测定结果

Tab.3Resultsoffourbatchesofsamples%

批号乙醇乙醚1510601未检出0.0231510602未检出0.0251610601未检出0.0201610602未检出0.033

3 讨论

3.1色谱条件的选择 本实验考察不同涂布液种类的毛细管气相色谱柱，由于乙醇极性较大，乙醚极性较小，二者极性相差较大，故选择使用中等极性的DB-624毛细管柱，并参考《中华人民共和国药典》2015年版二部中马来酸依那普利等其他品种项下乙醇等有机溶剂的测定方法，采用程序升温的方式，并经反复实验确定升温程序，可使乙醇和乙醚的分离度达到1.5。因鱼肝油酸钠注射液浓度较大，且主成分为长链脂肪酸盐的混合物，如采用直接进样法，脂肪酸附着在气相色谱柱上较难气化完全，可能污染色谱柱而改变色谱柱性能，故本方法采用顶空进样的方式，仅使样品中存在的有机溶剂气化进入色谱柱，避免主成分进入色谱系统，既可以检测样品中残留的有机溶剂，又避免色谱系统受到污染。

3.2样品制备方法的选择 本品为水溶液，但乙醚在水中溶解性较差，不符合《中华人民共和国药典》2015年版四部通则[9]项下有机溶剂对照品应在溶剂中完全溶解的要求。因乙醇与乙醚在DMF中具有良好的溶解性，故本实验采用50%DMF溶液为溶剂，可以保证对照品溶液的浓度准确，且该溶剂对待测的两种成分并无干扰，该方法专属性、准确性和重复性良好。