德阳地区地中海贫血基因型分析

王 秀，曹桂群，文 强，徐志红

(德阳市人民医院生殖遗传科，四川德阳 618000)

地中海贫血(地贫)是一种常染色体隐性遗传病，是由于编码珠蛋白的基因发生缺失或点突变，使珠蛋白链合成缺如或不足所致的遗传性溶血性贫血。在我国主要以α地贫和β地贫最为常见[1]。在长江以南地区，广东、广西、四川、海南等地发病率较高。由于重型α地贫患儿大多数在怀孕的中晚期宫内死亡，而重型β地贫患儿除定期输血、除铁治疗和造血干细胞移植外，尚无有效的治愈方法，只能通过生育前进行胎儿羊水细胞的地贫基因产前诊断，提早发现并终止妊娠，从而避免重型地贫患儿的出生[2]。为初步了解德阳地区人群中α地贫和β地贫基因型的分布情况，本研究对2 498例疑诊地贫患者进行了基因型分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2012年2月至2018年9月本院门诊及住院部就诊的2 498例疑诊地贫患者作为研究对象。血常规检测为小细胞低色素性贫血，以平均红细胞比容小于80 fL，平均红细胞血红蛋白小于27 pg作为筛查依据[3]，部分患者为有地贫家族史，需进一步确诊者。其中男462例，女2 036例；年龄生后5 h～84岁。

1.2样本采集与处理 采用枸橼酸钠抗凝管采集静脉全血2 mL，及时按DNA提取试剂盒说明书的方法提取DNA检测或置于-20 ℃冰箱冷冻保存并于7 d内提取DNA检测。

1.3主要设备与检测试剂 主要设备为美国BIO-RAD定量扩增仪，凯普HB 2012A核酸分子杂交仪等。采用潮州凯普生物化学有限公司生产的血液基因DNA提取试剂盒(离心柱型)和α/β地贫基因检测试剂盒。

1.4方法 采用聚合酶链反应(PCR)和反向斑点杂交技术进行地贫基因检测(PCR+导流杂交法)，检测3种缺失型α-地贫(--SEA、-α3.7、-α4.2)、3种突变型α-地贫(CS、QS、WS)及17个位点的19种突变型β-地贫。α/β地贫基因扩增及检测采用凯普配套DNA提取试剂盒提取DNA基因组，提取的样本DNA进行PCR扩增，扩增产物进行导流杂交。杂交显色后人工肉眼判读，阳性结果为蓝紫色斑点。操作过程参照凯普地贫基因检测试剂说明书进行。

2 结 果

2.1地贫基因检出率 2 498例疑诊患者检出地贫基因携带者1 537例，检出率为61.53%，共检出41种地贫基因突变类型，其中α-地贫756例，占49.19%(756/1 537)，β-地贫752例，占48.93%(752/1 537)，αβ复合型地贫29例，占1.89%(29/1 537)。

2.2α地贫的基因类型及其分布 756例α-地贫基因携带者中检出13种基因型，前4位α-地贫的基因型及构成比分别为--SEA/αα(74.87%)、-α3.7/αα(12.70%)、--SEA/αα合并-α3.7(3.70%)、-α4.2/αα(2.65%)。根据临床特点区分，静止型145例(19.18%)，标准型571例(75.53%)，中间型40例(5.29%)。见表1。

表1 α-地贫基因型及构成比

2.3β-地贫的基因类型及其分布 752例β-地贫基因突变类型以CD41-42(35.37%)、IVS-2-654(26.60%)、CD17(24.20%)、-28(5.98%)为主。其基因型和构成比见表2。

表2 β-地贫基因型及构成比

2.4αβ复合地贫的基因类型 αβ复合地贫29例，涉及5种α-地贫基因突变类型和5种β-地贫基因突变类型。复合型α-地贫基因型以--SEA/αα(48.28%)、-α3.7/αα(31.03%)为主，β-地贫基因突变类型多见于CD41-42(58.62%)。见表3。

表3 αβ复合地贫基因型及构成比[n(%)]

3 讨 论

地贫是全球分布最广、累及人群最多的一种单基因遗传病。在我国南方各地报道的地贫检出率为2.50%～20.00%[4]。由于地贫基因携带率存在明显的地域差异，在不同种族、不同地域具有不同的分布特点，德阳地区2 498例疑诊患者检出地贫基因携带者1 537例，检出率为61.53%，α-地贫检出率为30.26%，β-地贫检出率为30.10%，αβ复合地贫检出率为1.16%，检出率明显高于四川自贡、遂宁、泸州地区等。α型和β型地贫基因阳性病例的比值为1.01∶1，较自贡(1.27∶1)低，高于遂宁(0.58∶1)、泸州(0.65∶1)[5-7]。表明德阳地区地贫检出率较高，α地贫与β地贫检出率相接近，与毗邻地区明显不同。

本研究α地贫756例，检出13种α地贫基因类型，主要以东南亚型(--SEA/αα缺失型)为主(74.86%)，α-3.7/αα缺失型占12.70%，--SEA/α3.7缺失型占3.70%，-α4.2/αα缺失型占2.65%。德阳地区α地贫基因常见类型与贺钰磊等[8]报道的四川地区相似，但构成比稍有所不同。其中非缺失型比例为3.97%，以HbQS突变占多数(15/30)，这点又与四川地区、广东和广西地贫高发地区非缺失突变以HbCS突变占多数不同[8-10]。

本研究β地贫752例，检出12种突变基因类型，15种基因组合形式，杂合突变为主。前4位依次为CD 41-42、IVS-2-654、CD17、-28。这4类基因型总例数为693例，占92.15%。德阳地区β地贫主要类型为CD 41-42，与相关研究结果相似[5-6]，与陈红英等[7]和唐敏等[11]报道的四川泸州地区和川南地区以CD17突变型为主有差异。

本研究αβ复合型地贫29例(1.89%),13种基因突变类型，与相关文献报道的自贡地区复合型地贫检出率为2.06%相近[5]。αβ复合地贫基因型以β-地贫CD41-42复合α-地贫——SEA/αα和-α3.7/αα为主，可能与--SEA/αα、-α3.7/αα与CD41-42在德阳地区地贫基因型中最为常见有关。据文献报道，αβ复合型地贫患者无论与α或β地贫患者婚配，下一代均可能生出中或重型地贫患儿，如双方均为αβ复合型地贫患者，生出重型患儿的概率将会大大提升[12]。

德阳地区人口历经“湖广填四川”、支援三线建设人群的迁移混杂，遗传背景复杂，地贫检出率较高且基因类型较多，共检出41种，α地贫与β地贫携带率相接近，分布具有区域性特点。本研究较好地了解了德阳地区地贫的基因型检出情况及分布特点，为开展地贫的产前诊断提供了有益资料。因此，作为高发地区,积极开展地贫人群的基因检测，对夫妇双方均为地贫携带者或已生育过地贫儿的孕妇进行产前诊断，防止重型地贫儿出生是降低地贫发生率最有效的预防措施[8]。有效贯彻遗传咨询及产前诊断，对地贫的预防、诊治均具有十分重要的临床意义。