荧光原位杂交技术联合尿脱落细胞学、膀胱肿瘤抗原对尿路上皮细胞肿瘤的诊断效能分析

熊 钻，梅玉峰，王春阳，魏宝珍，刘 萍，王 亚，沈利华，刘 庆

(1.鄂州市鄂钢医院检验科，湖北鄂州 436000；2.鄂州市妇幼保健院检验科，湖北鄂州 436000)

上尿路上皮细胞癌是我国男性泌尿生殖系统最为常见的恶性肿瘤，因临床症状不是十分典型，很容易被漏诊而延误治疗，导致患者预后较差[1-2]。上尿路上皮细胞癌的诊断方法较多，包括尿脱落细胞学、血清膀胱肿瘤抗原(BTA)、影像学(尿路造影、CT和磁共振成像等)、内窥镜检查等。BTA及尿脱落细胞学检测虽对肿瘤具有明确的提示作用，但灵敏度较低；影像学检查对上尿路上皮细胞癌的分期具有明确的指导意义，但对较小体积癌、早期癌的诊断灵敏度较低；内窥镜则是一种侵入性手术，将其纳入常规检查较为困难，故提高上尿路上皮细胞癌的早期诊断率、减少无创性操作一直是近年来上尿路上皮细胞癌的研究热点。目前，临床常使用的检测方法均不能完全满足此目的[3-4]。最新的临床研究表明，上尿路上皮细胞癌的发生与某些基因位点缺失、染色体数目异常等密切相关[5-6]。UroVysion荧光原位杂交技术可准确、清晰地检测肿瘤细胞染色体改变，或许可成为早期诊断上尿路上皮细胞癌的一种新技术。故本研究选取泌尿外科经膀胱镜活检确诊为尿路上皮细胞癌患者105例作为研究对象，分别进行UroVysion荧光原位杂交技术、尿脱落细胞学联合BTA检测，比较不同方法对上尿路上皮细胞癌诊断的差异，并分析了UroVysion荧光原位杂交技术的诊断效能，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 本研究取得医学伦理委员会的审批同意。选取2014-2017年鄂州市鄂钢医院经膀胱镜活检确诊为上尿路上皮细胞癌患者105例作为观察组，选取同期鄂州市鄂钢医院健康体检者100例作为对照组。与两组研究对象讲明本研究目的，并获得同意后共同签订知情书。两组研究对象均分别接受UroVysion荧光原位杂交技术及尿脱落细胞学联合BTA检查。观察组患者中男73例，女32例；平均年龄(51.58±6.37)岁；高分级乳头状尿路上皮癌42例，低分级乳头状尿路上皮癌31例，低度恶性倾向尿路上皮乳头状癌32例。对照组研究对象中男64例，女36例；平均年龄(51.24±6.78)岁。

1.2方法

1.2.1采集尿液标本 使用清洁、干燥的一次性大口杯的容器留取两组研究对象50 mL以上的新鲜晨尿，为防止时间较久的尿液成分会发生变化、出现细胞溶解或其他原因导致的污染，最好在留取后1 h内送检，每份样本分为2份，分别进行UroVysion荧光原位杂交技术及尿脱落细胞学检查。留取尿标本过程中防止精液、月经血、粪便、白带等掺入，并准确区分标记研究对象的个人信息。

1.2.2采集血液标本 留取两组研究对象静脉血5 mL，进行BTA检查。

1.2.3利用对照组设立正常阈值[7]对对照组研究对象的尿液标本进行UroVysion荧光原位杂交技术检查，每份标本采用9p21区带探针和17、7、3号染色体着丝粒探针组合计算100个尿路上皮细胞，统计出现正常细胞数目、不同类型异常细胞数目的百分比，建立参考阈值。检测指标若大于阈值计为阳性，小于阈值计为阴性。

1.2.4结果判读

1.2.4.1尿脱落细胞学检查 取新鲜尿液40 mL，离心后将沉淀制成细胞涂片，常规苏木精-伊红染色后使用显微镜观察。每例研究对象均接受3次检测，发现1次异常细胞即判断为阳性。

1.2.4.2UroVysion荧光原位杂交技术检查 当1个位点有2种以上出现异常，如p16有3信号点异常或0信号点异常，即计为阳性，任意2个以上位点出现异常，如7号或3号染色体出现非整倍增加，计为阳性。若只有1个位点出现1种异常，需重新检测判断。

1.3统计学处理 应用SPSS19.0统计软件对数据进行分析，计数资料以率或构成比表示，采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.12种方法诊断上尿路上皮细胞癌的灵敏度、特异度比较 UroVysion荧光原位杂交技术诊断上尿路上皮细胞癌的灵敏度及特异度分别为81.90%、92.00%，尿脱落细胞学联合BTA诊断上尿路上皮细胞癌的灵敏度及特异度分别为37.14%、93.00%，2种方法诊断上尿路上皮细胞癌的灵敏度比较，差异有统计学意义(P<0.05)，而特异度比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1～3。

表1 UroVysion荧光原位杂交技术诊断上尿路上皮 细胞癌的灵敏度、特异度

表2 尿脱落细胞学联合BTA诊断上尿路上皮 细胞癌的灵敏度、特异度

表3 2种方法诊断上尿路上皮细胞癌的 灵敏度、特异度比较[n(%)]

2.22种方法对上尿路上皮细胞癌的分级检测分析 2种方法随上尿路上皮细胞癌分级的升高检测阳性率逐渐升高，且各类型上尿路上皮细胞癌比较，UroVysion荧光原位杂交技术检出率明显高于尿脱落细胞学联合BTA，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 2种方法对上尿路上皮细胞癌的分级 检测分析[n(%)]

注：与尿脱落细胞学联合BTA检测比较，P<0.05

2.3联合3种方法对上尿路上皮细胞癌的检测分析 联合3种方法诊断上尿路上皮细胞癌的灵敏度、准确度均明显高于单独UroVysion荧光原位杂交技术、尿脱落细胞学联合BTA检测，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表5。

表5 联合3种方法对上尿路上皮细胞癌的检测分析(%)

注：与联合3种方法检测比较，*P<0.05

3 讨 论

上尿路上皮细胞癌是一种较为常见的泌尿系统肿瘤，由于临床症状不典型，常导致就诊时肿瘤分期已相对靠后。虽然上尿路上皮细胞癌可经手术完全切除，但术后复发率较高，高达45.00%以上[8]。因此，如能对上尿路上皮细胞癌进行早期诊断，对患者的预后十分关键。临床BTA、尿脱落细胞学、内窥镜检查是诊断上尿路上皮细胞癌较常用的方法。但由于尿脱落细胞学灵敏度较低，尤其是低级别肿瘤的灵敏度更低。

诊断上尿路上皮细胞癌的肿瘤标记物除常用的BTA，还有人核基质蛋白22(NMP22)、Im-munocyt等，相关研究表明，对可疑上尿路上皮细胞癌患者进行BTA检查和膀胱镜检，BTA的特异度为85.90%，灵敏度不超过60.00%，故BTA不能作为早期诊断的确诊依据，不能取代膀胱镜，而只能是一种筛选手段；诊断上尿路上皮细胞癌的“金标准”为内窥镜检查，其灵敏度可达84.80%，但因其操作属侵入有创性、检测费用昂贵等缺点，不易在门诊对所有患者普遍使用[9,11]。因此，探索一种灵敏度及特异度均较高、创伤小的检查测方法是上尿路上皮肿瘤早期诊断的研究热点问题。

UroVysion荧光原位杂交技术可对9p21区带和17、7、3号染色体着丝粒进行检测，分别针对的是p16基因、HER2基因、EGFR基因和RAF1基因，最新研究表明，上尿路上皮细胞癌的发生与p16基因、HER2基因、EGFR基因和RAF1基因密切相关，而膀胱尿路上皮癌与上尿路上皮细胞癌细胞核型改变一致，故提出可使用UroVysion荧光原位杂交技术进行检测[12-13]。

UroVysion荧光原位杂交技术可通过4种荧光标记的DNA探针检测肿瘤细胞染色体的改变情况，具有一定的可行性及可操作性[14-15]。近年来，国内外大量临床研究应用UroVysion荧光原位杂交技术检测上尿路上皮细胞癌，发现其灵敏度高于BTA、尿脱落细胞学检查，且特异性差异不大[16,18]。2001年UroVysion荧光原位杂交技术被美国食品和药物管理局认证可用于检测上尿路上皮细胞癌的术后复查，而2005年时便被指南更新，批准用于无上尿路上皮细胞癌病史的镜下或肉眼血尿患者中诊断上尿路上皮细胞癌[19-20]。

本研究选取2014-2017年鄂州市鄂钢医院泌尿外科经膀胱镜活检确诊为尿路上皮细胞癌的患者105例作为研究对象，分别进行UroVysion荧光原位杂交技术、尿脱落细胞学联合BTA检测，结果显示，UroVysion荧光原位杂交技术诊断尿路上皮细胞癌的灵敏度高达81.90%，明显高于尿脱落细胞学联合BTA检测，且2种方法诊断尿路上皮细胞癌的特异度相似，说明前者具有较高的诊断效能。本研究在随后的细化讨论中发现，UroVysion荧光原位杂交技术也可用于上尿路上皮细胞癌的分级诊断，且恶性程度越高，诊断灵敏度越高。最后将3种方法联合分析发现，联合3种方法确诊为尿路上皮细胞癌的灵敏度、准确度均明显高于单独使用UroVysion荧光原位杂交技术、尿脱落细胞学联合BTA检测。

4 结 论

UroVysion荧光原位杂交技术因其技术特点尚不能完全取代内镜诊断，建议UroVysion荧光原位杂交技术、尿脱落细胞学联合BTA对可疑患者进行筛查，在可保证获得较高诊断水平的基础上节约成本、减少内镜检查次数、减轻患者痛苦，值得临床推荐应用。