接骨胶囊质量标准研究

王冰华

【摘 要】采用显微、薄层色谱进行鉴别;高效液相色谱测定制剂的含量。大黄、土鳖虫以显微鉴别法鉴别;当归、红花以薄层色谱法鉴别;异补骨脂素在1.023～20.046μg/ml的浓度范围线性关系良好，（R2=0.9997）;建立的含量测定方法专属性、精密度、重现性、准确性均符合方法学验证的要求。建立的质量标准方法稳定、专属性强、重复性好，可用于接骨胶囊的质量控制。

【关键词】接骨胶囊;质量标准

【中图分类号】  R715  【文献标识码】 B【文章编号】 1672-3783（2019）05-03-249-01

接骨胶囊是烟台象楠中医整骨医院制剂，由土鳖虫、煅自然铜等10余味中药组成，具有化瘀消肿，止痛疗伤的功效，疗效确切可靠。为控制制剂的质量，确保用药安全有效，参考相关文献[1，2]，进行了质量方法的研究，为制剂的质量控制提供了科学的检测方法。

1 仪器及试药

生物显微镜（上海浦东物理光学仪器厂）;岛津高效液相色谱仪（二元泵，紫外检测器，LC色谱工作站）。甲醇（天津市永大化学试剂有限公司）;乙酸乙酯（天津市瑞金特化学品有限公司）;乙醇、乙醚（烟台市双双化工有限公司）;甲醇（色谱纯，上海星可高纯溶剂有限公司）;水为双蒸水。

2 方法与结果

2.1 显微鉴别 取本品，显微镜下观察：草酸钙蔟晶粗大（大黄）。体壁碎片深棕色或黄色，其上着生短粗或细长刚毛（土鳖虫）。

2.2 薄层鉴别

2.2.1 当归 取样品4g，加乙醚20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取除当归的原料药，参照供试品溶液的制备方法制备，即得阴性样品溶液。另取当归对照药材0.5g，同法制备，即得对照药材溶液。吸取上述三种溶液各7μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性样品无干扰。

2.2.2 红花 取样品内容物4g，加80%丙酮溶液20ml，密塞，振摇15分钟，取上清液，作为供试品溶液。参照上述供试品溶液的制备方法制备，即得阴性样品溶液。另取红花对照药材0.5g，同法制备，即得对照药材溶液。吸取上述三种溶液各7～8μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7：2：3：0.4）为展开剂，展开，取出，晾干，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性样品无干扰。

2.3 含量测定

2.3.1 含量测定药味的选择

参考《中药制剂分析》中的中药质量标准制定原则[3]，处方土鳖虫、自然铜药典中原料药及成方制剂中均没有含量测定项目，臣药补骨脂在成方制剂中[4]的检测项目较多，一般只用甲醇提取即可测定，说明检测方法成熟，检测灵敏度高，方法专属性较好，故拟选定补骨脂为含量测定指标进行研究。

2.3.2 色谱条件 色谱柱：Techmate C18（250mm×4.6mm）;柱温：35℃;流动相：甲醇-0.1mol/L的磷酸氢二钠溶液（用磷酸调节至7）（425：575）;流速：1.0ml.min;进样量：20μl;检测波长：246nm。

2.3.3 线性关系 精密称取异补骨脂素对照品10.23mg至100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品储备液，精密量取对照品储备液5ml置50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液。精密量取对照品溶液1 ml、2 ml、3 ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，再取不稀释的对照品储备液、对照品储备液10ml置50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液注入液相色谱仪，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，见下图。

接骨胶囊 标准曲线的绘制

結论：异补骨脂素在1.023～20.046μg/ml的浓度范围内呈良好的线性关系。

2.3.4 供试品溶液的制备 取本品取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理45分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.3.5 专属性 取除补骨脂以外的其它药材，照[2.3.4]项下制备，制得阴性对照溶液，按[2.3.2]项下色谱条件进行测定，考察异补骨脂素的专属性，经过考察，异补骨脂素专属性良好。

2.3.6 稳定性试验 取样品，按照[2.3.4]制备项下制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、8h进样，测定主峰峰面积分别为：730456、732215、729854、731985、728697，计算主峰峰面积的RSD为0.2%，供试品溶液在8小时内稳定性良好。

2.3.7 精密度 精密量取对照品储备液5ml置50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，重复进样6次，峰面积分别为：1714586、1720386、1725489、1714872、1723561、1715645，RSD为0.3%，符合精密度要求。

2.3.8 准确度 制备高、中、低浓度样品各三份，进样分析，记录色谱图，测定结果如下表：

2.3.9 含量限度的制定

取2016年3月至6月的接骨胶囊共10个批次样品，按[2.3.4]项下样品溶液制备方法制备，注入色谱仪测定，计算接骨胶囊样品中的异补骨脂素的含量，10批次含测数据依次为：0.126、0.126、0.129、0.124、0.124、0.124、0.125、0.129、0.130、0.129（单位：mg/粒），平均含量为0.127mg/粒，由于原料药有产地、采收季节的差异，测定结果下浮20%，即0.127*（1-0.2）=0.101mg/粒，根据上述结果定为：接骨胶囊每粒含异补骨脂素不得少于0.10 mg。

3 讨论

接骨胶囊为生药全粉末装胶囊，显微鉴别具有经济、快速、准确的特点，方中的君药土鳖虫，臣药大黄显微特征明显，专属性强;薄层色谱研究中，参照《中国药典》一部当归、红花饮片的方法进行鉴别，方法专属性、重现性良好，订入标准。此外，本次研究中，对土鳖虫、骨碎补及延胡索也进行了薄层鉴别方法研究，此3味药阴性样品均有不同程度的干扰，方法专属性不符合要求，因此不列入质控标准。含量测定方法研究中，前期参照补骨脂药材的方法进行了研究，经过反复调整流动相的比例和极性，补骨脂素及异补骨脂素仍有不同程度的阴性干扰，再次参考“腰痛丸”的质量标准对流动相进行调整，调整后的含量测定方法，异补骨脂素专属性良好，并通过了方法学验证，因此列入质量标准。

参考文献

[1] 刘绪林.活血壮筋胶囊的质量标准研究，中国医药指南 2012，12（36）：70-72

[2] 张彬，李萍. 跌打活血散中的骨碎补薄层色谱鉴定，山西医学院学报 1996，1（27）：15-16

[3] 蔡宝昌.《中药制剂分析》 全国高等中医药院校规划教材 2007，12，218-220

[4] 腰痛丸质量标准，《中国药典》2015年版一部第1654页